CISD2在胰腺癌细胞增殖及上皮间质转化中作用的研究

发布时间：2018-05-05 16:22

本文选题：胰腺癌 + CISD2　；参考：《吉林大学》2017年博士论文

【摘要】：胰腺癌是致死性及侵袭性均非常高的恶性肿瘤。主要的治疗方法包括手术、化疗、放疗。由于大部分患者诊断时失去手术治疗机会,且化放疗有效率较低,5年生存率小于5%。所以,发现新的生物学标志及明确新的分子靶点对于胰腺癌早期发现和治疗尤为重要。CDGSH铁硫结构域2即CISD2,主要位于线粒体外膜并在哺乳动物生存期内调节线粒体的完整。最新研究显示CISD2参与多种肿瘤发生、发展:CISD2在乳腺癌中促进乳腺癌细胞增殖、生长;CISD2表达水平与早期宫颈癌的盆腔淋巴结转移呈正相关,与宫颈癌患者生存期呈负相关;CISD2促进肝癌细胞增殖,与肝癌患者生存期呈负相关;CISD2通过AKT通路促进胃癌细胞增殖,是胃癌的独立预后因素。在胰腺癌中,上皮间质转化(Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)与远处转移及化疗药物耐药相关。EMT特征是上皮表型E-钙粘蛋白、γ-钙粘蛋白的减少和间质表型波形蛋白、N-钙粘蛋白的增加。高EMT的胰腺癌患者更易出现远处转移,预后更差。Wnt/β-Catenin通路通过促进粘附分子受体表达包括转录因子SNAI1、SNAI2、ZEB1调节E-钙粘蛋白,证明Wnt/β-catenin通路在调节EMT中起到重要作用。最新研究表明Wnt/β-catenin通路、EMT促进胰腺癌细胞生长,并且CISD2蛋白表达水平与胰腺癌临床特性密切相关。本实验40组新鲜样本是胰腺癌组织和相邻的正常胰腺组织,均来自于2015.1-2016.1于中日联谊医院手术的胰腺癌患者。120例石蜡包埋胰腺癌样本为2008.3-2014.1中日联谊医院胰腺癌术后标本。120例患者随访25个月。标本通过蛋白质印记法(Western Blot)、免疫组化染色法(Immunohistochemistry staining)、实时荧光定量PCR法(Real-time Quantitative PCR,q RT-PCR)明确CISD2蛋白和CISD2m RNA的表达水平。本实验选择永生化的正常胰腺细胞系h TERT-HPNE,人的胰腺癌细胞系PANC-1、SW1990、Capan-1、Capan-2和Hs766T作为细胞株。慢病毒携带sh CISD2或oe CISD2沉默或上调PANC-1和SW1990细胞系中CISD2蛋白表达水平。用MTT法、TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞仪分析凋亡、坏死细胞的比率。在动物模型中,PANC-1细胞系被预先感染Lv-scramble或Lv-sh CISD2,注射到裸鼠右侧腹股沟。在接种后的40天,杀死小鼠,切除肿瘤。计算肿瘤的重量及体积(length×width2×π/6)。数据分析:分类变量分析应用卡方检验。多变量分析是基于Cox风险回归模型。生存分析应用K-M曲线和log-rank检验。组之间的数据分析应用单因素方差或是t检验,p0.05有意义。所有数据应用SPSS 18统计软件分析。所有的实验均重复三次,数据以平均数±标准差表示。实验结果显示在胰腺癌样本和胰腺癌细胞系中CISD2 m RNA和CISD2蛋白表达均显著高于正常胰腺组织和细胞系。CISD2蛋白表达水平与临床分期呈正相关(p0.05),包括:T分期、血管侵犯、远处转移、肿瘤体积(p0.05)。多变量分析显示:CISD2蛋白表达水平与胰腺癌患者总生存期呈负相关,且是胰腺癌患者独立预后因素(p=0.02);结果进一步证实远处转移(p0.001)、临床分期(p=0.019)、血管侵犯(p=0.021)均为胰腺癌患者独立预后因素。此外我们研究CISD2、Wnt/β-catenin通路、EMT之间的关系,结果显示:CISD2蛋白表达水平与胰腺癌细胞系内Wnt/β-catenin通路活性、EMT及胰腺癌细胞增殖呈正相关。综上,实验结果显示CISD2在胰腺癌组织及胰腺癌细胞系中表达增高,CISD2表达水平与胰腺癌患者临床分期呈正相关,与胰腺癌患者的总生存期呈负相关;CISD2高表达通过Wnt/β-catenin通路促进上皮间质转化、胰腺癌细胞增殖及迁移。CISD2是胰腺癌患者独立的预后因素并有希望成为胰腺癌治疗新的靶基因。
[Abstract]:In this experiment , we found that the expression level of Wnt / 尾 - catenin was significantly correlated with the survival time of cancer patients . In the animal model , the expression level of CISD2 protein was significantly higher than that in normal pancreatic tissue and pancreatic cancer cell line . The results showed that CISD2 protein expression level was positively correlated with the clinical stage of pancreatic cancer . The results showed that CISD2 protein expression level was positively correlated with the clinical stage of pancreatic cancer . The results showed that CISD2 protein expression level was positively correlated with the clinical stage of pancreatic cancer . The results showed that CISD2 was independent prognostic factor in pancreatic cancer patients and had the hope of being a new target gene for pancreatic cancer .

【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.9

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