海洛因成瘾的检测方法及其神经病理学特征研究

发布时间：2016-11-23 09:50

  本文关键词：海洛因成瘾的检测方法及其神经病理学特征研究，，由笔耕文化传播整理发布。

《兰州大学》 2015年

海洛因成瘾的检测方法及其神经病理学特征研究

柴尔青  

【摘要】：目的：以Wistar大鼠为研究对象,建立海洛因成瘾动物模型及海洛因代谢产物的检测方法,研究海洛因成瘾对中枢神经系统的毒性作用,探索海洛因成瘾的生理、生化机制,为临床手术麻醉品的合理应用提供科学依据。方法：1.采用依次递增给药法,建立海洛因成瘾大鼠模型。即第1天,每只大鼠每次海洛因10.00 mg/kg,每天2次,肌肉注射；第2天以后,每次增加5.00 mg/kg,在连续注射第7天时,每天剂量达135.00mg/kg,维持该剂量持续7天,建立海洛因成瘾大鼠模型。2.采用气-质联用分析法(Gas Chromatography-Mass Spectrometry Analysis, GC-MS)测定海洛因代谢产物。3.建立海洛因代谢产物的简易检测法。主要包括显色法、薄层层析法、高效毛细管电泳法。4.采用免疫组化法检测海洛因成瘾对实验大鼠脑组织Bax c-fos表达的影响。5.给予利血平后,再给予海洛因,观察动物成瘾情况。用放射免疫法检测血液和脑组织中肾上腺素(adrenaline, A)、去甲肾上腺素(noradrenaline, NA)、多巴胺(dopamine, DA)、环磷酸腺苷(cAMP)及环磷酸鸟苷(cGMP)的表达水平。6.采用Dossy-2H多通路生理参数采集存储系统,检测给予海洛因和／或利血平后大鼠的脑电图、心电图和肌梭放电图的变化情况。结果：1.在末次给予海洛因次日,腹腔注射盐酸纳洛酮(4.00 mg/kg) 2h后,大鼠出现扭体、湿狗样颤抖、咬牙、跳跃、站立等戒断症状,成瘾动物模型建立成功。2.GC-MS检测发现,海洛因在体内的代谢产物主要有吗啡和6-单乙酰吗啡。3.用显色法、薄层层析法和高效毛细管电泳法检测海洛因代谢产物—吗啡效果灵敏,操作简单易行。4.免疫组化法检测发现,海洛因组脑组织中Bax、c-fos表达阳性细胞比对照组明显增多(P0.01),IOD(积分吸光度)和MA(平均吸光)均显著增强(P0.01)。5.通过放射免疫法检测分析表明,(1)与对照组相比较,海洛因组和利血平组血液cAMP的表达水平均显著上升(P0.01),且利血平组的上升幅度较海洛因组的大；海洛因组(P0.05)和利血平组(P0.05)血液cGMP的表达水平均下降,且利血平组的下降幅度也较海洛因组的大；海洛因组和利血平组血液A和NA的表达水平均发生变化,但是,海洛因组的是均均显著上升(P0.01),而利血平组的则是均显著下降(P0.01)。(2)与对照组相比较,海洛因组和利血平组中脑腹侧被盖区、大脑前额叶皮层及海马中cAMP的表达水平均极显著地上升(P0.01),而且利血平组上述各组织中cAMP的表达水平也均高于海洛因组的；利血平组上述各组织中cGMP的表达水平均极显著地下降(P0.01),而海洛因组上述各组织中cGMP的表达水平也是均下降的,但是在中脑腹侧被盖区(P0.01)中的下降幅度较大脑前额叶皮层和海马(P0.05)的更显著,总体而言,利血平组上述各组织中cGMP表达水平的下降幅度均较海洛因组的大。(3)与对照组相比较,利血平组大脑前额叶皮层、海马区、纹状体及伏隔核中DA的表达水平均极显著下降(P0.01),而且利血平组上述各组织中DA的表达水平也均低于海洛因组的；海洛因组大脑前额叶皮层、海马区及伏隔核中DA的表达水平均是上升的,而在大脑前额叶皮层和伏隔核(P0.01)中的上升幅度较海马区(P0.05)的更显著,但是,纹状体中DA的表达水平确是下降的(P0.05)；利血平组上述各组织中DA的表达水平均低于海洛因组的。6.神经生理学研究发现,海洛因成瘾大鼠的脑电图、心电图和肌梭放电图均发生明显的改变。结论：1.自拟“快速海洛因成瘾动物模型的建立”方法,建模时间短,戒断症状明显,操作简单易行。2.用显色法、薄层层析法和高效毛细管电泳法检测海洛因代谢产物(吗啡或单乙酰吗啡)效果灵敏,操作简单易行。3.海洛因成瘾显著上调脑组织中Bax和c-Fox的表达,而导致脑组织损伤。4.大脑前额叶皮层、中脑腹侧被盖区、海马、纹状体及伏隔核均参与了海洛因成瘾过程。5.海洛因成瘾将会改变成瘾动物血液和脑组织中与DA系统调节相关激素、神经递质等因子的表达水平；运用药物利血平干预后,尽管海洛因吸食者血液和脑组织中与DA系统调节相关激素、神经递质等因子的表达水平也发生一定的变化,但其干预将会改善动物成瘾戒断的症状。6.海洛因成瘾将会不同程度的影响成瘾动物脑、心脏及肌梭的正常生理功能。7.DA系统在海洛因成瘾过程中发挥着非常重要的作用,海洛因成瘾机制：海洛因→6-乙酰吗啡→受体→G蛋白→AC→ATP→cAMP→PKA→DA、EP、NE合成和释放→靶器官(成瘾、戒断症状)。该研究结果将为临床手术麻醉品的合理应用提供了科学依据,为临床海洛因成瘾戒断治疗、法医学鉴定提供了实验依据。

【关键词】：
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.64
【目录】：

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