天麻素与宁动颗粒对Tourette综合征大鼠纹状体多巴胺双向调节作用的研究

发布时间：2016-11-25 12:16

  本文关键词：天麻素与宁动颗粒对Tourette综合征大鼠纹状体多巴胺双向调节作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

《山东大学》 2015年

天麻素与宁动颗粒对Tourette综合征大鼠纹状体多巴胺双向调节作用的研究

张峰  

【摘要】：目的探讨天麻素(Gastrodin, Gas)对Tourette综合征(Tourette's syndrome, TS)模型大鼠纹状体细胞外液多巴胺(Dopamine, DA)浓度的调节作用,并通过对纹状体细胞外液高香草酸(Homovanillic Acid, HVA)浓度以及纹状体多巴胺转运体(Dopamine Transporter, DAT)的检测,进一步明确天麻素对DA调节作用的分子作用机制。方法70只雄性Wistar大鼠随机分为3组,分别予以腹腔注射：空白对照组(10只),腹腔注射生理盐水5 ml/kg/d;阿朴吗啡(Apomorphine, Apo)诱导模型组(30只),腹腔注射Apo 2 mg/kg/d;亚氨基二丙腈(3,3'-Iminodipropionitrile,IDPN)诱导模型组(30只),腹腔注射IDPN 150mg/kg/d。每日上午9：00进行造模干预,连续注射7天。后Apo造模继续,将Apo诱导模型组进一步划分3组,分别进行药物治疗：Apo模型组(10只),生理盐水10ml/kg/d灌胃；Apo+Gas组(10只),天麻素20mg/kg/d灌胃；Apo+Hal组(10只),氟哌啶醇(Haloperidol, Hal) 1.0 mg/kg/d灌胃。IDPN诱导模型组进一步划分3组,分别给予药物干预：IDPN模型组(10只),生理盐水10ml/kg/d灌胃；IDPN+ Gas组(10只),天麻素20 mg/kg/d灌胃；IDPN+Hal组(10只),Hal 1.0 mg/kg/d灌胃。空白对照组(10只)予生理盐水10 ml/kg/d灌胃。每日上午9：00 Apo造模干预(共持续3周),下午2：00药物灌胃治疗(共持续8周)。Apo及IDPN造模开始后,每隔7天对大鼠的刻板行为进行一次行为学评价。灌胃治疗结束后,处死各组大鼠,快速分离出纹状体,后分别应用微透析技术(Microdialysis)及高效液相色谱技术(High-performance liquid chromatography, HPLC)测定各组大鼠纹状体细胞外液的DA浓度,蛋白质免疫印迹技术(Western-blot)测定大鼠纹状体DAT的蛋白表达。结果1.大鼠刻板运动的行为学评价重复测量性方差分析显示,Apo及IDPN诱导的TS模型大鼠均表现出明显的组间效应(Apo诱导模型组：F2,27=28.91,p0.01；IDPN诱导模型组：F2,27=50.81,p0.01)。与空白对照组相比,腹腔注射Apo和IDPN均可诱导大鼠产生明显的刻板行为(Apo诱导模型组：p0.01；IDPN诱导模型组：p0.01)。给予药物治疗后,与Apo模型组及IDPN模型组对比,统计结果显示,天麻素和Hal均可明显减轻两种造模药诱发的刻板运动(Apo+Gas组 vs Apo+saline组,p0.01,IDPN+Gas组 vs IDPN+saline组,p0.01：Apo+Hal组 vs Apo+saline组,p0.01,IDPN+Hal组 vs IDPN+saline组,p0.01)。2.天麻素对大鼠纹状体细胞外液DA浓度的影响方差分析显示,Apo诱导模型组与IDPN诱导模型组均有明显的组间效应(Apo诱导模型组：F3,36=5.68,p0.01；IDPN诱导模型组：F3,36=51.84,p0.01)。统计结果表明,Apo与IDPN对大鼠纹状体细胞外液DA浓度的作用截然相反：Apo可明显升高大鼠纹状体细胞外液的DA浓度：而IDPN则使纹状体细胞外液DA浓度明显降低。分别给予药物治疗后,结果显示,天麻素可显著降低Apo诱导升高的大鼠纹状体细胞外液的DA浓度,同时显著升高IDPN诱导降低的纹状体细胞外液DA浓度。换言之,对异常升高或降低的纹状体细胞外液DA浓度,天麻素均具有对其进行调节、使之趋向于正常的作用。与天麻素的良性调节作用不同,Hal对于Apo以及IDPN诱导产生的异常的纹状体细胞外液DA浓度,均未表现出明显的干预作用。3.天麻素对大鼠纹状体细胞外液HVA浓度的影响两种造模干预药物,Apo及IDPN均未对大鼠纹状体细胞外液HVA浓度产生明显影响(Apo诱导模型组：p0.05；IDPN诱导模型组：p0.05)。分别给予药物治疗后,统计数据显示,天麻素与Hal亦未对两种TS模型大鼠纹状体细胞外液HVA浓度产生明显的调节作用。4.天麻素大鼠纹状体DAT表达的影响方差分析显示,Apo诱导模型组与IDPN诱导模型组均有明显的组间效应(Apo诱导模型组：F3,36=10.92,p0.01；IDPN诱导模型组：F3,36=21.15,p0.01)。Apo与IDPN均可使大鼠纹状体DAT表达量明显增高(Apo诱导模型组：p0.01；IDPN诱导模型组：p0.01)。给予药物治疗后,统计结果显示,天麻素可显著降低Apo诱导模型组纹状体DAT表达量,同时显著升高IDPN诱导模型组纹状体DAT的蛋白表达。与天麻素对DAT表达量的双向调节作用不同,Hal对于Apo以及IDPN诱导产生的异常升高和降低的纹状体DAT蛋白表达量,均未表现出明显的干预调节作用。结论1.天麻素具有与Hal相似的抑制TS模型大鼠刻板运动的作用。2.天麻素对TS模型大鼠纹状体细胞外液DA浓度具有双向良性调节作用。3.天麻素对TS模型大鼠纹状体细胞外液DA浓度的双向良性调节作用的实现可能与其对DAT蛋白表达量的双向调节作用有关。目的探讨宁动颗粒(Ningdong Granule, NDG)对Tourette综合征(TS)模型大鼠纹状体多巴胺(DA)浓度双向调节作用,以进一步明确宁动颗粒治疗Tourette综合征的药理作用机制。方法70只雄性Wistar大鼠随机分为3组,分别进行腹腔注射：空白对照组(10只)：腹腔注射生理盐水5 ml/kg/d；Apo诱导模型组(30只)：腹腔注射阿朴吗啡(Apo)2mg/kg/d; IDPN诱导模型组(30只)：腹腔注射亚氨基二丙腈(IDPN) 150mg/kg/d。每日上午9：00予以干预,连续注射7天。Apo造模继续,将Apo诱导模型组进一步划分3组,进行药物干预：Apo模型组(10只)：生理盐水10ml/kg/d灌胃；Apo+ NDG组(10只)：宁动颗粒370 mg/kg/d灌胃；Apo+Hal组(10只)：氟哌啶醇(Hal) 1.0mg/kg/d灌胃。IDPN诱导模型组进一步划分3组,进行药物干预：IDPN模型组(10只)：生理盐水10ml/kg/d灌胃；IDPN+ NDG组(10只)：宁动颗粒370mg/kg/d灌胃；IDPN+Hal组(10只)：氟哌啶醇1.0mg/kg/d灌胃。空白对照组(10只)予生理盐水10 ml/kg/d灌胃。每日上午9：00Apo造模干预(共持续3周),下午2：00进行药物灌胃治疗,灌胃治疗共持续8周。造模干预开始后,每隔7天对大鼠的刻板行为进行一次行为学评价。药物干预结束后,处死各组大鼠,取出纹状体,分别用高效液相色谱法(HPLC)测量大鼠纹状体多巴胺浓度,蛋白质免疫印迹(Western-blot)测定大鼠纹状体多巴胺D2受体蛋白表达。结果1.大鼠刻板运动的行为学评价重复测量性方差分析显示,Apo及IDPN诱导的TS大鼠均表现出明显的组间效应(Apo诱导模型组：F2,27=22.73,p0.01；IDPN诱导模型组：F2,27=42.25,p0.01)。造模干预后,与空白对照组对比,Apo和IDPN均可诱导大鼠产生明显的刻板行为(Apo诱导模型组：p0.01；IDPN诱导模型组：p0.01)。分别给予干预治疗后,与Apo模型组及IDPN模型组对比,统计结果显示,宁动颗粒和Hal均可明显减轻两种造模药诱发的刻板运动(Apo+ NDG组vs Apo+ saline组,p0.01,IDPN+ NDG组vs IDPN+ saline组,pP0.01；Apo+ Hal组vs Apo +saline组,p0.01,IDPN+ Hal组vs IDPN+ saline组,p0.01)。2.宁动颗粒对大鼠纹状体DA浓度的影响方差分析显示,Apo诱导模型组与IDPN诱导模型组均有明显的组间效应(Apo诱导模型组：F3,36=30.79,p0.01；IDPN诱导模型组：F3,36.16.07,p0.01)。统计结果表明,Apo与IDPN对TS大鼠纹状体DA浓度的作用截然相反：Apo可明显升高大鼠纹状体的DA浓度；而IDPN则使纹状体DA浓度明显降低。分别给予治疗干预后,结果表明,宁动颗粒可显著降低Apo诱导升高的纹状体的DA浓度,同时显著升高IDPN诱导降低的纹状体DA浓度。一言概之,无论对异常升高或降低的DA浓度,宁动颗粒均具有对其进行调节,使之恢复正常的作用。与宁动颗粒对DA浓度的良性调节作用不同,Hal对于Apo以及IDPN诱导产生的异常的纹状体DA,均未表现出明显的干预调节作用。3.宁动颗粒对大鼠纹状体DRD2表达的影响方差分析显示,Apo诱导模型组与IDPN诱导模型组均有明显的组间效应(Apo诱导模型组：F3,36.24.69,p0.01；IDPN诱导模型组：F3,36.29.73,p0.01)。统计结果表明,Apo与IDPN均可使TS模型大鼠纹状体DRD2表达明显升高(Apo诱导模型组：p0.01；IDPN诱导模型组：p0.01)。分别给予干预治疗后,与Apo模型组及IDPN模型组对比,统计结果显示,宁动颗粒和Hal均可降低两种造模药诱发产生的纹状体DRD2表达增高(Apo+ NDG组vsApo+ saline组,p0.01,IDPN+ NDG组vs IDPN+ saline组,p0.01；Apo+Hal组vs Apo+ saline组(?)p0.01；IDPN+ Hal组vs IDPN+ saline组,p0.01)。结论1.宁动颗粒具有与Hal相似的、抑制TS模型大鼠刻板运动的作用。2.宁动颗粒对TS模型大鼠纹状体DA具有双向良性调节作用。

【关键词】：
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

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本文编号：191952