巨噬细胞、Tca8113细胞的影响及雷公藤甲素在其中的作用

发布时间：2016-12-01 19:25

  本文关键词：酸性微环境对单核-巨噬细胞、Tca8113细胞的影响及雷公藤甲素在其中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

《贵阳医学院》 2015年

酸性微环境对单核-巨噬细胞、Tca8113细胞的影响及雷公藤甲素在其中的作用

冯红超  

【摘要】：目的:肿瘤细胞在利用周围环境增殖的同时,也在改变其生长的微环境,使细胞外呈现酸性,间质细胞中单核-巨噬细胞受微环境的变化而影响其表型分化及功能状态,更多的参与了肿瘤的生长和转移。本研究模拟肿瘤细胞外酸性微环境,了解酸性微环境下Tca8113细胞增殖及分泌细胞因子等生物学行为的变化、酸性微环境对巨噬细胞表型分化及功能状态的影响及雷公藤甲素(TP)在此过程中的干预效果,进一步了解肿瘤发生、发展、转移及肿瘤细胞抵御治疗的机制,也为抗肿瘤药物的研发提供新的思路和理论基础。方法:1、通过10%HCl调整细胞培养液的p H值分别为7.2、7.0、6.8、6.6下进行64h Tca8113细胞的培养,ELISA法测定培养液中的白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)和低氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)的含量,MTS法测定Tca8113细胞增殖情况;2、流式细胞仪分离人外周血单核细胞,通过10%HCl调整细胞培养液的p H值分别为7.2、7.0、6.8、6.6,分别单独培养及与Tca8113细胞混合培养,培养时间为经预实验确定的64h,流式细胞学检测细胞表面CD68分子、CDl63分子和CD80分子的表达以进行巨噬细胞分型,其中CD68分子标记巨噬细胞,CD80标记M1型巨噬细胞,CD163分子标记M2型巨噬细胞;ELISA法测定培养液中的白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的含量;上述培养液采用MTS法检测对淋巴细胞转化的作用;不同p H值下混合培养MTS法测定Tca8113细胞的增殖。3、通过10%HCl调整单核-巨噬细胞系THP-1细胞培养液的p H值分别为7.2、6.8、6.6,进行24h、48h、72h的培养,分别加入不同浓度TP,ELISA法检测培养液中VEGF和血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor,VEGF-C)的含量;4、提取人外周血单核细胞,调整细胞培养液的p H值分别为7.2、7.0、6.8、6.6,加入不同浓度的TP,培养64h,流式细胞学检测细胞表面CD68分子、CDl63分子和CD80分子的阳性及阴性以进行单核-巨噬细胞分型,ELISA法测定培养液中的IL-10、IL-12的含量,收集上述培养液采用MTS法检测对淋巴细胞转化的作用;在单核-巨噬细胞与Tca8113细胞混合培养液中加入上述不同浓度的TP,MTS法测定Tca8113细胞增殖情况,设Tca8113细胞加入不同浓度TP作为对照。结果:1、p H值为7.2、7.0、6.8、6.6时,Tca-8113细胞OD值分别为2.722±0.039、2.828±0.048、2.884±0.010、2.896±0.022,各组间有显著性差异(P0.05),培养液中IL-8含量分别为192.8±3.5、205.9±0.7、208.6±0.5、216.4±3.9ng/L,各组间有显著性差异(P0.05),MCP-1含量分别为33.74±0.27、33.82±0.41、34.07±0.41、34.77±0.45ng/L,差异有显著性(P0.05),HIF-1含量分别为36.63±0.11、37.78±1.05、37.71±0.74、128.90±2.97ng/L,各组间有显著性差异(P0.05)。2、单核-巨噬细胞单独培养组中,p H值为7.2、7.0、6.8、6.6时,CD68+单核-巨噬细胞分别为97.65%、97.50%、97.09%、98.84%,差异没有显著性(P0.01);CD68+CD163+单核-巨噬细胞(M2型巨噬细胞)分别为2.61%、2.73%、2.71%、6.40%,其中p H值6.6时高于p H值7.2、7.0、6.8时,差异有显著性(P0.01);CD68+CD80+单核-巨噬细胞(M1型巨噬细胞)分别为3.77%、6.60%、5.82%、17.74%,其中p H值6.6时高于p H值7.2、7.0、6.8时,差异有显著性(P0.01);培养液中代表M2型巨噬细胞分泌的IL-10含量分别为37.26±0.17、37.22±0.17、38.57±1.50、39.63±0.83ng/L,差异有显著性(P0.05);VEGF分别为103.0±1.2、102.5±0.5、106.5±2.1、110.3±4.8pg/L,差异有显著性(P0.05);培养液中代表M1巨噬细胞分泌的IL-12含量分别为5.939±0.024、5.925±0.048、5.884±0.024、5.842±0.048ng/L,差异有显著性(P0.05)。单核-巨噬细胞与肿瘤细胞混合培养组中,p H值为7.2、7.0、6.8、6.6时,CD68+单核-巨噬细胞分别为98.00%、95.66%、97.07%、99.37%,p H值6.6时与p H值7.0时差异有显著性(P0.01),相同p H值时与单独单核-巨噬细胞培养组差异没有显著性(P0.01);CD68+CD163+单核-巨噬细胞(M2型巨噬细胞)分别为1.81%、2.94%、3.46%、5.67%,其中p H值6.8时与p H值7.2、7.0时比较及p H值6.6时与其它p H值时比较,差异有显著性(P0.01),p H6.8时其比率高于而p H6.6低于单独单核-巨噬细胞培养组,差异有显著性(P0.01);CD68+CD80+单核-巨噬细胞(M1型巨噬细胞)分别为5.88%、10.10%、10.72%、14.09%,差异有显著性(P0.01),p H7.0、6.8时其比率高于而p H6.6低于单独单核-巨噬细胞培养组,差异有显著性(P0.01);培养液中代表M2型巨噬细胞分泌的IL-10含量分别为37.10±0.55、37.34±0.55、54.63±0.41、56.16±0.93ng/L,差异有显著性差异(P0.05);VEGF分别为171.7±0.9、173.3±1.2、173.0±0.8、177.4±2.5pg/L,差异有显著性(P0.05),培养液中代表M1巨噬细胞分泌的IL-12含量分别为9.703±0.080、9.730±0.023、9.556±0.129、9.490±0.122ng/L,差异有显著性(P0.05)。3、在相同p H值时随着TP浓度的增加THP-1细胞培养液中VEGF、VEGF-C含量减少,差异有显著性(p0.05),p H值6.6及TP浓度50ug/ml时最低(p0.05)。4、酸性微环境下经TP干预后,与不加TP相比,加入不同浓度TP后M1型巨噬细胞比率增加,而且随TP浓度上升比率增加,差异有显著性(p0.01),TP在较低浓度(10-25μg/ml)M2型巨噬细胞比率有增加,差异有显著性(p0.01),在较高浓度50-100μg/ml时M2型巨噬细胞比率明显减少,差异有显著性(p0.01);析因方差分析显示,在不同p H值下随TP浓度的增加细胞培养液中IL-10的含量均出现减少(p0.01),而IL-12含量随TP浓度的增加均出现增加(p0.01),TP浓度为50μg/ml、100μg/ml时细胞培养液中IL-12较TP浓度为10μg/ml、25μg/ml时增加明显(p0.05);不同p H值时加入不同浓度的TP的细胞培养液明显增加了淋巴细胞的转化,并随浓度的上升作用增强(p0.05)。单独应用TP在低浓度时(10μg/ml和25μg/ml)Tca8113细胞数量有增加,而在高浓度(50μg/ml和100μg/ml)时Tca8113细胞数量明显减少(p0.05);与单核-巨噬细胞联合加入不同浓度的TP均使Tca8113细胞数量明显减少,且随浓度增加而减少明显(p0.05)。结论:1、Tca8113细胞能够通过自身的改变更好的适应酸性微环境,上调多种对单核-巨噬细胞具有趋化作用的因子,Tca8113细胞能够作为研究酸性微环境对肿瘤细胞及非肿瘤细胞影响的研究对象;2、酸性微环境可以使单核细胞向M1和M2型巨噬细胞两极分化,但表现为M2型巨噬细胞的功能状态,从而更多的促进肿瘤细胞的生长,酸性微环境可能是肿瘤内浸润的巨噬细胞出现促瘤作用的直接因素之一;3、在酸性微环境下,低浓度TP就能促使单核细胞更多的向M1型巨噬细胞转化,并表现为M1型巨噬细胞的功能状态,产生明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,TP可以作为以肿瘤内浸润的巨噬细胞为靶点的抗肿瘤药物研发的研究方向,但其机制及如何有效利用TP调节单核-巨噬细胞分化及功能状态而达到抗肿瘤的目的还需要更多的研究。

【关键词】：
【学位授予单位】：贵阳医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.2
【目录】：

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 杨建斌,冯红超,宋宇峰;单核细胞趋化蛋白-1在口腔鳞癌中的表达及意义[J];贵阳医学院学报;2005年02期

2 冯红超;彭玉峰;宋宇峰;;口腔鳞癌中白细胞介素-8的表达及临床意义[J];贵阳医学院学报;2008年05期

3 宋宇峰;冯红超;唐路;彭江帆;马洪;;酸性微环境对单核/巨噬细胞分泌血管内皮细胞生长因子及Tca8113细胞杀伤作用的影响[J];华西口腔医学杂志;2010年04期

4 冯红超,宋宇峰;口腔鳞癌中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)和血管生成与淋巴结转移的关系[J];临床口腔医学杂志;2003年03期

5 冯红超;彭江帆;马洪;宋宇峰;唐路;;单核/巨噬细胞在缺氧微环境下对Tca8113舌鳞癌细胞系杀伤作用的实验研究[J];实用口腔医学杂志;2009年06期

6 张凤;熊思东;;巨噬细胞的极化及其意义[J];细胞生物学杂志;2007年01期

7 戴泰鸣;宋宇峰;马洪;冯红超;魏宏琳;;口腔鳞癌中MMP-9的表达与巨噬细胞测定的意义[J];中国肿瘤临床;2007年16期

8 冯红超;唐路;彭江帆;宋宇峰;马洪;;酸性微环境下单核/巨噬细胞对舌鳞癌细胞系Tca-8113杀伤作用的实验研究[J];中国肿瘤临床;2009年05期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 冯红超,宋宇峰,温玉明;口腔癌组织中血管内皮生长因子-C在肿瘤相关巨噬细胞内的表达及与淋巴结转移的关系[J];癌症;2004年03期

2 李焱;蒋勇;史立群;史爱学;彭亦良;梁后杰;;结肠癌组织肿瘤相关巨噬细胞VEGF-C/D的表达及与淋巴结转移的关系[J];第三军医大学学报;2007年02期

3 宋宇峰,李超,冯红超;促血管生成素-2在口腔鳞癌中表达的初步研究[J];贵阳医学院学报;2005年03期

4 戴泰鸣;宋宇峰;马洪;冯红超;任晓敏;;口腔鳞癌中MIF的表达与巨噬细胞浸润的相关性[J];贵阳医学院学报;2013年04期

5 付爱坤;胡胜兰;杜威;史艳云;李卫芬;;益生菌对巨噬细胞的免疫调节作用[J];动物营养学报;2013年12期

6 任柏林;宋宇峰;冯红超;马洪;;舌鳞癌酸性微环境下雷公藤多甙对单核-巨噬细胞分泌血管内皮生长因子的影响[J];广东牙病防治;2015年03期

7 戴泰鸣;马洪;宋宇峰;;口腔鳞癌原发灶及淋巴结转移灶中巨噬细胞的检测及意义[J];口腔医学研究;2010年03期

8 卓贤露,冯红超,宋宇峰;口腔鳞癌组织中Survivin的表达与血管生成的关系[J];临床口腔医学杂志;2004年04期

9 李超,冯红超,宋宇峰;口腔鳞癌中促血管生成素-2的表达与临床病理学特征及血管生成的关系[J];临床口腔医学杂志;2005年03期

10 陈钟;冯红超;宋宇峰;;口腔鳞癌中乙酰肝素酶的促血管生成作用及临床意义[J];临床口腔医学杂志;2006年11期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 高扬;RNA干涉抑制STAT3基因诱导口腔鳞癌细胞发生凋亡的体内外实验研究[D];吉林大学;2011年

2 李明;槟榔碱对上皮细胞周期、凋亡、恶性转化影响的初步研究[D];中南大学;2010年

3 王燕;甘露聚糖结合凝集素对单核巨噬细胞分化发育调节作用的研究[D];南方医科大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前9条

1 何敏;妊娠不同时期胎盘蜕膜单核-巨噬细胞和DC样细胞的生物学特性的比较[D];南京医科大学;2010年

2 吴芳;结直肠癌组织LV与TAM相关性分析[D];广州医学院;2010年

3 韩颖;紫杉醇节律化疗的抗Lewis肺癌血管生成作用[D];郑州大学;2007年

4 周芳;巨噬细胞浸润及环氧化酶-2的表达与食管鳞癌血管生成及预后关系[D];郑州大学;2007年

5 岳金;VEGF-C、PDGF-A和SPARC在口腔鳞状细胞癌中表达的研究[D];青岛大学;2009年

6 黄敏;牙周致病菌Aa-LPS对组织特异性单核/巨噬细胞细胞因子表达的影响[D];福建医科大学;2013年

7 江泽波;猪苓多糖对巨噬细胞极化的调节作用[D];广州中医药大学;2014年

8 李小鹏;中枢神经系统结核病中单核细胞—星型胶质细胞网络对金属基质蛋白酶9基因表达和分泌的调控[D];南昌大学;2012年

9 陈龙飞;DNC类似物合成、鉴定及抗尼卡巴嗪单克隆抗体的制备与鉴定[D];河南农业大学;2010年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 冯红超,宋宇峰,温玉明;口腔癌组织中血管内皮生长因子-C在肿瘤相关巨噬细胞内的表达及与淋巴结转移的关系[J];癌症;2004年03期

2 姚丽艳,张白凌,施作霖;MMP-9在口腔鳞癌的表达[J];福建医科大学学报;2000年01期

3 宋宇峰,冯红超;口腔鳞癌巨噬细胞侵入与肿瘤血管生成的关系[J];贵阳医学院学报;2003年01期

4 冯红超,宋宇峰;口腔鳞癌巨噬细胞和微血管的空间关系[J];贵阳医学院学报;2003年01期

5 于大海,温玉明,李龙江,王昌美,王晓毅,付风华;口腔癌VEGF-C表达和血管及淋巴管生成与淋巴道转移关系的研究[J];临床口腔医学杂志;2001年01期

6 冯红超,宋宇峰;口腔鳞癌中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)和血管生成与淋巴结转移的关系[J];临床口腔医学杂志;2003年03期

7 邹敏君;刘肖珩;李毅;赖怡;;IL-8诱导血管内皮细胞迁移的实验研究[J];生物医学工程学杂志;2006年05期

8 李宏捷;张玉茹;朱晓虹;李秋芝;;基质金属蛋白酶-9在口腔鳞癌中的表达及其与癌细胞增殖和转移的关系[J];实用口腔医学杂志;2007年02期

9 张妍蓓,刘荣玉,汪伟民,孙昕,赵卉,庞玉瑛;非小细胞肺癌患者血清中IL-8水平的研究及相关临床意义探讨[J];实用医学杂志;2003年07期

10 殷平,李才,宋学;结肠癌MMP-9和VEGF的表达及其意义[J];中国肿瘤临床;2003年07期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 季晓辉;;单纯疱疹病毒感染单核-巨噬细胞[J];国外医学(微生物学分册);1994年04期

2 李磊,赵鄞生;创伤与单核-巨噬细胞[J];国外医学(免疫学分册);1989年05期

3 李榜龙;李文朴;;单核-巨噬细胞在急性呼吸窘迫综合征发病机制中的作用[J];中国实用医药;2010年02期

4 丁建中;姜顺求;;脂质体与单核-巨噬细胞系统和细胞内寄生性疾病[J];延边医学院学报;1988年01期

5 王家骥,佘素贞;铅、镉、铬和锰对小鼠单核-巨噬细胞系统吞噬功能的影响[J];卫生毒理学杂志;1990年02期

6 蔡昌锡,朱锡华;单核-巨噬细胞在肾小球肾炎发病中的免疫病理作用[J];国外医学(免疫学分册);1986年03期

7 谭睿;石雪蓉;;藏药色吉美多提取物对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响[J];世界科学技术;2005年S1期

8 孙克娅,张留保,刘平,周其锦,程向明,崔传德,胡冰,贺之义;幼鼠内毒素血症脾内单核-巨噬细胞等动态分布[J];南京军医学院学报;1998年04期

9 何敏;张晓洁;季晓辉;;妊娠不同时期胎盘单核-巨噬细胞免疫学特性的比较[J];南京医科大学学报(自然科学版);2010年08期

10 罗云蔓;郭晓奎;姜叙诚;;病原菌逃避单核-巨噬细胞杀灭策略的研究进展[J];微生物与感染;2010年02期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 冯永红;刘忠华;丁元生;胡忠义;;重组结核分枝杆菌ESAT-6-CFP-10对人单核-巨噬细胞活化的影响[A];2007年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2007年

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 冯红超;酸性微环境对单核-巨噬细胞、Tca8113细胞的影响及雷公藤甲素在其中的作用[D];贵阳医学院;2015年

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 张永飞;颜面播散性粟粒性狼疮的免疫学发病机制探讨[D];山东大学;2015年

2 何敏;妊娠不同时期胎盘蜕膜单核-巨噬细胞和DC样细胞的生物学特性的比较[D];南京医科大学;2010年

3 宫金伶;NDV7793刺激小鼠单核—巨噬细胞对肝癌细胞的杀伤作用[D];广西医科大学;2011年

  本文关键词：酸性微环境对单核-巨噬细胞、Tca8113细胞的影响及雷公藤甲素在其中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：201188