miR-429通过靶向调节TRAF6表达抑制肝癌细胞增殖的研究
发布时间：2018-08-24 18:17
【摘要】：目的:肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)占原发性肝癌(Primary liver cancer,PLC)的90%以上,是世界上肿瘤死亡的主要原因之一,我国原发性肝癌的发病率、死亡率均占全世界的50%以上,提高肝癌的早期诊断率和进一步开发治疗肝癌的有效药物,对于改善肝癌患者的预后和生活质量是非常有必要;miRNA异常表达于各种恶性肿瘤中,与肿瘤的发生、发展密切相关;当前研究显示miR-429在不同肿瘤中的表达水平和作用有明显差异,提示miR-429作为一个原癌或抑癌miR,与多种肿瘤的发生、发展有关,对肿瘤的诊断、治疗和预后有潜在临床应用价值;本实验通过检测肝癌中miR-429的表达情况,研究了其对肝癌增殖、迁移的影响,分析其靶基因TRAF6的表达及对肝癌增殖、迁移的影响,通过体内外实验进一步探究其在调节肝癌发生、发展中的关系。方法:1、临床标本和肝癌细胞系中采用Real time PCR检测miR-429的表达情况;2、在体外实验中,使用miR-429慢病毒和对照组空白慢病毒miR-CON分别转染肝癌细胞系SK-HEP1,然后采用MTT检测miR-429对肝癌细胞系增殖能力的影响;利用wound healing和Transwell实验检验miR-429对肝癌细胞系迁移能力的影响;3、运用生物信息学、荧光素酶报告实验检测miR-429的靶基因;4、采用质粒转染、回复实验检测mi R-429与TRAF6的相互调控关系,采用免疫荧光、Western blot检测miR-429在调控肝癌细胞增殖中的核心信号通路;5、采用裸鼠荷瘤体内实验检测miR-429对肝癌细胞增殖的影响。结果:1、通过Real time PCR检测发现,miR-429在肝癌组织中的表达水平明显降低,在癌旁组织中miR-429的表达水平较肝癌组织增加1.47倍;通过Real time PCR检测发现,与正常肝细胞HL7702对比,肝癌细胞中mi R-429的表达明显下调,其中SK-HEP1的表达下调最为明显。2、与转染空白对照组miR-CON相比,miR-429抑制肝细胞系X椫澈蜕つ芰，
本文编号：2201640
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