护肝清脂片对FFA诱导的肝脂肪变性L02细胞的药理保护作用及蛋白质组学研究

发布时间：2019-12-04 05:57

【摘要】：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外酒精和其他明确的损肝因素所致的肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征,其包括单纯性脂肪肝(SFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相关肝硬化。对该疾病机制研究显示其与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关。前期的研究结果显示,护肝清脂片作为一种中药复方,展现出了良好的降脂抗炎作用。然而,其对NAFLD的防治作用的相关机制还不是很明确。在本次研究中,我们首先验证检测了护肝清脂片对游离脂肪酸诱导的L02细胞脂肪变性的保护作用。然后运用血清药理学与iTRAQ蛋白标记定量技术相结合的方法来阐明护肝清脂片对游离脂肪酸诱导的L02细胞脂肪变性的保护作用机制。结果显示护肝清脂片能显著地改善游离脂肪酸导致的L02细胞中相关炎症因子、氧化应激以及脂质积累的影响。后续的的iTRAQ蛋白定量结果显示:游离脂肪酸单独刺激组与空白组比较,有355个蛋白表达发生改变,即鉴定到355个差异蛋白。同样地,护肝清脂药物血清高剂量组干预后与单独游离脂肪酸诱导组比较,有359个差异蛋白;护肝清脂药物血清高剂量组干预后与空白组比较,有365个差异蛋白。对所有差异蛋白的pathway分析结果显示有多条信号通路被注释到,比如:微生物在不同环境中的代谢(microbial metabolism in diverse environments),脂肪酸代谢(fatty acid metabolism),过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路(peroxisome proliferator activated receptor signaling pathway),丝裂原活化蛋白激酶信号通路(mitogen-activated protein kinase signaling pathway)等与护肝清脂片对游离脂肪酸诱导的L02细胞脂肪变性的保护作用有关。此外,本次试验还对其中的一些差异蛋白包括 heat shock protein 27(HSP27),acetyl-CoA acetyltransferase 1,calnexin,and integrin-linked kinase进行了后续的Western blotting验证。最后运用特异性siRNA将HSP27沉默,检测了 ROS、IL-6以及TNF-α水平,进一步揭示了 HSP27蛋白在护肝清脂片药物血清对游离脂肪酸诱导的L02细胞脂肪变性的保护作用中所扮演的角色。以上所有结果证明护肝清脂片对游离脂肪酸诱导的L02细胞具有很好的保护作用,且该与上述蛋白的功能有关。
【图文】：

曲线,法制,曲线,盒子

ＣＶ邋（Ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ邋ｏｆ邋Ｖａｒｉａｔｉｏｎ）变异系数可以反映数据的离散程度，是数据标逡逑准方差和平均值的比值，用百分数表示，具体表达式为ＣＶ邋＝邋（标准偏差ＳＤ／平均逡逑值ｍｅａｎ）ｘ邋１邋00％。图２－２表示不同样品的ＣＶ值分布及盒形图，从左图中可以看出，逡逑当ＣＶ的阈值设置在２０％时，三组样品（Ｃ、ＦＦＡ、ＨＨ）的ＣＶ累计百分比分别逡逑为９０．４５％、９１．２５％以及８８．５４％，相对来说，ＦＦＡ样品的ＣＶ值更加集中在低值逡逑区域，说明ＦＦＡ样品的重复性更好。而通过右侧ＣＶ盒形图更加直观的显示出不逡逑同实验组ＣＶ值的对比，不同颜色的盒形图代表了不同实验组的ＣＶ分布，盒子逡逑的上下两边为上下四分位数线，，盒子中间的黑色横线是数据中位数（数据中占据逡逑中间位置的数）。通过盒子的上下四分位数可以判断出，相对来说，Ｃ样品的ＣＶ逡逑３８逡逑

样品,相关性分析,比值,底数

ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ＊邋ＣＶ邋ｖａｌｕｅ，邋Ｂｌａｃｋ邋ｌｉｎｅ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｔｏｐ邋ｏｆ邋Ｂｏｘ邋ｓｈｏｗｅｄ邋ｔｈｅ邋ｐｏｓｉｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｍｅｄｉａｎ．逡逑４．３邋ｉＴＲＡＱ各实验组样品相关性分析逡逑相关性分析可以衡量出不同样品之间的相关密切程度。图２－３综合的反映了逡逑不同实验样品（１１３：Ｃ１，邋１１４：Ｃ２，邋１１５：ＦＦＡ１，１１６：ＦＦＡ２，邋１１７：ＦＦＡ３，邋１１８：ＨＨ１，逡逑１１９：邋ＨＨ２，邋１２１：邋ＨＨ３）中重复样品的Ｐｅａｒｓｏｎ相关性，数据来源于：以１１３标记逡逑样品（Ｃ１）作为分母，所有差异蛋白质（经比值和Ｐ值判断）的比值经过以２为逡逑底数的对数转化后的值，从结果中可以看出，重复样品的比值相关系数达到了邋０．７逡逑以上，说明本项目的重复性较好。逡逑３９逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【相似文献】