调控头颈鳞癌端粒酶miRNAs的研究

发布时间：2017-03-22 11:18

  本文关键词：调控头颈鳞癌端粒酶miRNAs的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过广谱miRNA芯片技术筛查调控端粒酶活性的特异性miRNA。方法：选择端粒酶阳性细胞株人喉鳞癌细胞(Hep-2),人鼻咽癌细胞(CNE)及端粒酶阴性细胞株人骨肉瘤细胞(U-2 OS),正常组织细胞人肺上皮细胞(BEAS-2B),抽提所有细胞总RNA并进行Hy3荧光标记,在miRCURYTM LNAArray(v.11.0)(Exiqon)芯片上进行杂交反应,同时采用实时定量PCR验证miRNAs芯片结果的可靠性。结果：芯片结果显示5种miRNA：hsa-miR-301b,hsa-miR-624,hsa-miR-22,hsa-miR-618,hsa-miR-1267在端粒酶阳性细胞中高表达,7种miRNA：hsa-miR-512-5p, hsa-miR-647, hsa-miR-194, hsa-miR-135a, hsa-miR-621hsa-miR-640,hsa-miR-155在端粒酶阴性细胞中高表达。在所有这些表达差异的miRNA中,miR-512-5P在两类细胞中表达差异最大。结论：miR-512-5P可能参与了肿瘤细胞端粒酶活性的内在调控。目的：探讨miRNA-512-5P调控肿瘤端粒酶可能的机制。方法：通过miRNA数据库寻找miR-512-5p可能的靶基因,构建miR-512-5p质粒并转染肿瘤细胞,观察miR-512-5p对靶基因的抑制作用,并通过荧光素酶方法验证其作用靶点。结果：经多个miRNA数据库交叉分析后,发现miR-512-5p可能的靶基因为端粒酶逆转录酶hTERT,在端粒酶阳性细胞中转染miR-512-5p质粒后,hTERT蛋白表达量明显下降,同时荧光素酶检测发现荧光素酶活性下降明显,揭示了miR-512-5p对hTERT的直接靶向和抑制作用。结论：miR-512-5p通过直接靶向抑制hTERT蛋白的表达从而抑制端粒酶活性。目的：探讨miR-512-5p对头颈部鳞癌细胞的抑制作用。方法：将miR-512-5p质粒转染肿瘤细胞后,观察肿瘤细胞端粒酶、端粒长度的改变,细胞凋亡以及细胞增殖的的变化情况。同时建立裸鼠荷瘤模型,在体内水平验证miR-512-5p对肿瘤的抑制作用。结果：miR-512-5p能有效降低端粒酶的活性、缩短端粒长度,同时促进肿瘤细胞凋亡发生率增加,体外实验结果证实导入miR-512-5p后瘤细胞增殖明显受限。同时裸鼠移植瘤体内实验也证实了miR-512-5p可以明显减慢肿瘤的生长速度和瘤内hTERT蛋白的表达。结论：miR-512-5p在体内或者体外均能抑制头颈部肿瘤的增殖,其作用机制可能与靶向抑制hTERT蛋白的表达导致端粒酶活性下降、端粒长度缩短和细胞凋亡增加有关。
【关键词】：头颈部鳞癌 小分子RNA 端粒酶 端粒
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.91
【目录】：

• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 英汉缩略名词对照表12-13
• 引言13-16
• 第一部分 调控端粒酶miRNAs的筛选及验证16-27
• 前言16
• 实验材料16-18
• 实验方法18-22
• 结果22-24
• 附图24-27
• 第二部分 miR-512-5P调控端粒酶作用机制的研究27-39
• 前言27
• 实验材料27-29
• 实验方法29-34
• 结果34-36
• 附图36-39
• 第三部分 miR-512-5p对头颈鳞癌细胞抑制作用研究39-51
• 前言39-40
• 实验材料40-42
• 实验方法42-45
• 结果45-47
• 附图47-51
• 讨论51-57
• 全文总结57-58
• 参考文献58-65
• 综述65-86
• 参考文献78-86
• 攻读博士期间发表文章情况86-87
• 致谢87

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