全人源抗PD-L1抗体的筛选及其与放疗联合治疗肿瘤的效果和机制研究

发布时间：2020-06-28 18:27

【摘要】：放疗作为肿瘤常规治疗虽可在一段时间内控制或消退肿瘤,但常常伴随肿瘤复发。近年来研究表明,肿瘤组织中淋巴细胞浸润的程度同预后呈正相关。放疗,尤其是SBRT可以增加免疫细胞的浸润,但是同时可能诱导肿瘤细胞表达一些抑制性的分子,如PD-L1,介导肿瘤组织淋巴细胞免疫耐受,不能将肿瘤细胞完全清除。提示放疗联合PD-L1抗体阻断PD1/PD-L1抑制信号通路很有可能取得更好的治疗效果。本课题拟利用酵母展示技术筛选全新的人源化PD-L1抗体,并建立小鼠乳腺癌单次大剂量放疗模型,研究其联合PD-L1抗体阻断PD1/PD-L1抑制信号通路是否可取得更好的治疗效果及其作用机制。利用酵母展示技术平台筛选针对PD-L1抗原的人源化抗体,获得8个比较理想的酵母抗体序列,通过分子克隆的方式克隆到真核表达载体,并通过瞬时转染293细胞分泌表达,经纯化后获得抗体蛋白。蛋白通过流式细胞术和Elisa的方式鉴定其是否特异性结合PD-L1抗原,及其是否具有阻断PD-1/PD-L1结合的功能.最终确定2株抗体具有阻断PD-L1、PD-1结合的功能,是阻断性抗体,特异性识别PD-L1抗原,且有一株抗体可以识别小鼠的PD-L1,可用于后续放疗治疗肿瘤联合免疫治疗的研究。体外活性实验证实其具有激活T细胞的能力,并具有良好的量效关系。在小鼠肿瘤模型中证实其抗肿瘤活性,同目前在三期临床的PD-L1阻断抗体体内抗肿瘤活性相当。本研究过程中筛选得到的全新的PD-L1抗体不仅可用于同放疗联合治疗肿瘤的药效和机制研究。同时还将用于全新PD-L1抗体药物的研发,申报专利并临床转化,填补国内该靶点阻断抗体零申报的突破,带来巨大的经济和社会价值。另一方面,建立了Balb/C小鼠Tubo乳腺癌细胞皮下移植瘤模型,给予不同剂量照射,获得Balb/C小鼠Tubo乳腺癌放疗后稳态模型。进一步机制研究发现单次大剂量照射引起肿瘤内部免疫反应的激活肿瘤,稳态平衡依赖于CD8 T细胞,同时诱导肿瘤细胞表面PD-L1上调。在此基础上,单次大剂量照射联合抗PD-L1阻断性抗体使皮下肿瘤完全消退,效果显著优于单纯照射。机制研究过程中发现联合治疗引起的肿瘤消退产生有效地免疫记忆,可以保护小鼠抵抗10倍剂量的肿瘤复发模拟挑战。该作用依赖于CD8T细胞的激活和对肿瘤细胞的有效杀伤,联合治疗后肿瘤浸润CD8T细胞分泌IFNγ和TNFα的能力显著增强。本研究将为肿瘤放疗联合免疫治疗提供新思路和必要的参考依据。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.5

【参考文献】