生食贝类中副溶血性弧菌污染水平调查、定量风险评估和分离菌株特征分析

发布时间：2020-07-12 16:06

【摘要】：副溶血性弧菌是世界范围内与海产品消费相关的重要致病菌,由其引起的典型疾病是胃肠炎。中国的数据显示,副溶血性弧菌是引起细菌性食源性疾病的首要病原体。由于贝类的滤食作用,贝类中可富集大量的副溶血性弧菌,从而带来食源性感染风险。本研究调查了中国六个省份生食贝类中副溶血性弧菌的定量污染数据；基于定量数据,建立了从养殖场到餐桌全过程中副溶血性弧菌在生食贝类中消长规律的数学模型,结合剂量-反应关系,描述因生食贝类而摄入致病性副溶血性弧菌的致病概率及发病人数；针对副溶血性弧菌分离株,分析其生化、基因、耐药和分子分型特征。一、生食贝类中副溶血性弧菌污染水平总副溶血性弧菌的阳性率和污染水平分别是70.6%和44.6MPN/g。总副溶血性弧菌的污染水平从北向南有明显的地区趋势,辽宁最低,从低到高依次为山东、福建、浙江、四川,最高的为广西。总副溶血性弧菌的污染水平有明显季节趋势,以夏秋季最高。总副溶血性弧菌的污染水平在牡蛎和毛蚶间无显著性差异。在三个采样环节中,养殖场的污染水平最高,零售市场次之,餐饮市场最低,差异有显著性。25.1%的餐饮市场的总副溶血性弧菌污染水平超过了《GB 29921》中针对水产制品的副溶血性弧菌限量值1,000MPN/g。致病性副溶血性弧菌的阳性率和污染水平分别是26.7%和0.5MPN/g。致病性副溶血性弧菌阳性样品的污染水平呈现出明显的地区和季节趋势。致病性副溶血性弧菌地区趋势与总副溶血性弧菌相反,辽宁最高,广西最低。致病性副溶血性弧菌阳性样品的污染水平以夏季最高、冬季次之,最低为春季。毛蚶的致病性副溶血性弧菌阳性样品的污染水平高于牡蛎。在三个采样环节中,致病性副溶血性弧菌的污染水平为餐饮市场最高,零售市场次之,养殖场最低。二、生食贝类中副溶血性弧菌风险评估本研究以养殖阶段副溶血性弧菌的实际污染数据为起点,进行了冷链评估和常温评估。本研究评估了贝类经冷链流通后的副溶血性弧菌生食风险。冷链评估的结果显示：家庭食用时副溶血性弧菌的污染水平高于养殖阶段；每餐食用风险广西最低,为2.36×10-5,其它三地均为10.4；结合四地的人口学数据,每年食用风险广西最低,每年平均有323人发病,山东最高,每年平均有4942人发病。符合标准《GB 29921》限量要求的四地每餐食用风险均为10-6,每年食用风险均少于100人,标准保护水平均为87%以上。常温评估结果显示：常温流通后,家庭食用时的副溶血性弧菌污染水平高于冷链评估；每餐食用风险高于冷链评估；每年食用风险高于冷链评估。常温评估的标准保护水平均为98%以上。冷链评估南海广西的每餐食用风险的敏感性分析发现了8个风险因素,按照相关性从大到小依次排列为气温牡蛎消费克数冷却时间运输时间初始污染水平(Cp)生食概率致病性VP阳性率总VP阳性率。南海广西的初始污染水平位列风险因素的第5位,相关系数为0.21,而致病性VP阳性率和总VP阳性率与每餐食用风险的相关性仅为0.02和0.01。三、副溶血性弧菌分离菌株特征分析利用API 20E和VITEK 2 GN两个生化鉴定系统进行副溶血性弧菌的生化试验,结果显示：临床株和环境株有显著性差异的四项生化是dSOR、SUCT、AMY和1LATk.八项共同生化项目中,有三项结果一致,分别是ONPG/BGAL、H2S和SAC；其余五项生化结果不一致,其中GLU/OFF、CIT和LDC等三项生化有显著性差异。菌株OMP基因阳性率为100%。其中临床株tdh阳性率为89.25%,trh基因均为阴性；88株环境株中有1株tdh阳性、1株trh阳性。临床株T3SS2阳性率为98.92%,环境株有1株阳性。临床株PGS阳性率为96.77%,环境株为67.05%。ERIC结果显示：临床株阳性率为88.17%,高于环境株的10.23%。9株环境株SXT阳性。副溶血性弧菌对八种抗生素的耐药谱大致相同,多数菌株表现为对氨苄西林耐药及中介。其氨苄西林MIC值的几何均数大于耐药标准。四株菌表现为多重耐药／中介,出现了复方新诺明耐药、庆大霉素中介、四环素中介等表型。相比PFGE, ERIC-PCR和REP-PCR的优点是更加快速便捷,适合用于大量菌株的分型分析。本研究结果显示,ERIC-PCR和REP-PCR都具有一定的分型能力,能够用于副溶血性弧菌的分子分型。ERIC-PCR的扩增条带更多,而分型的群数较少；REP-PCR的扩增条带数量较少,而分型能力更强。来自不同样品种类、采样环节和采样地点的菌株经两种方法分型后都有较高的相似系数,说明副溶血性弧菌在环境中存在优势污染菌株。
【学位授予单位】：中国疾病预防控制中心
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R155.5
【图文】：

月份,污染程度,流程,稀释度

图１１邋ＭＰＮ－ＰＣ民检验流程逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－１邋Ｔｈｅ邋ｆｌｏｗ邋ｃｈａｒｔ邋ｏｆ邋ＭＰＮ－ＰＣ民逡逑４N２逦ＭＰＮ检验逡逑根据污染程度，在温暖月份（５－１０月）和寒冷月份（１１－４月）可Ｗ选用不同逡逑的３个连续适宜稀释度。每个稀释度接种３支盛有９邋ｍＬ邋ＡＰＷ的试管，每管接种１逡逑ｍＬ，置于３７邋’Ｃ恒温箱内培养８ｈ－１８ｈ。逡逑４．１．３邋分离培养逡逑所有显示生长的ＭＰＮ增菌管，用接种环沾取一环，于ＴＣＢＳ琼脂或科玛嘉弧逡逑菌显色培养基上划线分离，３７邋‘Ｃ培养１８－２４邋ｈ。副溶血性弧菌的典型茜形态为：逡逑在ＴＣＢＳ上呈圆形、半透明、表面光滑的绿色菌落，直径２－３邋ｍｍ；在科玛嘉弧菌逡逑显色培养基上呈圆形、半透明、表面光滑的粉紫色茵落，直径２－３邋ｍｍ。逡逑２３逡逑

地理分布图,副溶血性弧菌,阳性率,地理分布

１３１个数据来自四川，２４４个数据来自江宁，２２２个数据来自浙江品种类分类，３９８个数据来自毛邮，７９８个数据来自牡邮。按照采样环节５个数据来自餐饮市场，５８１个数据来自零售市场，４６０个数据来自养殖采样季节分类，５０２个来自夏r-，２２７个数据来自秋季，１７９个数据来自８个数据来自春季。按照采样年份分类，５７７个数据为２０１３年监测数据，据为２０１４年监测数据。因四川为内陆省份，其零售市场的牡蜗主要运自冰鲜杜顿。逡逑副溶血性弧菌的阳性率逡逑根据／化基因ＰＣ民结果是否阳性，按照监测地点、样品种类、采样环节和分别进行分析，＾式研巧总副溶血性弧菌阳性率的多维分布。逡逑按照监测地点逡逑

副溶血性弧菌,致病性

Ｗ从定性水平了解致病性副溶血性弧菌的分布特征。逡逑６．４．１总体概况逡逑如图２－６所示，在抓阳性的样品中，诚阳性的样品占２４．３％，Ｗｉ阳性的占１６．４％逡逑，０ＲＦ８阳性的占２２．９％。致病性副溶血性弧菌阳性（即Ｓ者中任一基因阳性）的逡逑样品占３７．８％，其中１９．７％的样品为二个或者二个Ｗ上毒为基因同时阳性。逡逑Ｔｏｔａｌ邋ｓａｍｐｌｅｓ逡逑ｔ`e？洰．＂？逦２４．３％逦￣？逡逑：猫献：．．进巧姦邋１６．４＊。逦／逦／／逦＼逡逑１逦７日．６％逦２５，４％邋；］逡逑。静［５７p}海海炒Γ财危苠危苠危义稀遥蹋病畠2进￣逡逑图２－邋６致病性副溶血性弧菌占总副溶血性弧菌的比例逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－邋６邋Ｔｈｅ邋ｒａｔｉｏ邋ｏｆ邋ｐａｒｔｉｏTBｅｎｉｃ邋Ｋ邋ｐａｒａ／ｚａｅｍｏ（ｖｎ．ｃ化ｙ邋ｔｏ邋化化１逡逑注：榐表示诚２，邋和０ＲＦ８Ｈ个基因中二个或者二个Ｕ上阳性占总副溶血性弧菌逡逑（伽阳性）比例。逡逑６．４．２按照监测化点逡逑六个省份致病性副溶血性弧菌的总阳性率是２６．７％。最高四川为５８．８％，其逡逑次福建为４１．６％，然后依次为广西（２５．７％）、山东（２０．４％）、江宁（１７．２％）、逡逑浙江（１３．１％）。地区间致病性副溶血性弧菌的阳性率有显著性差异（ＰＯ．０１）。逡逑３８逡逑

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