长非编码RNA-ANCR对三种牙源性干细胞增殖及分化的调控作用研究

发布时间：2020-07-14 18:31

【摘要】：牙源性干细胞是一类来源于牙齿组织的具有多向分化潜能和自我增殖能力的成体干细胞。牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)、牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSC)以及根尖牙乳头干细胞(stem cells from the apical papilla,SCAP)都是非常重要的牙源性干细胞,是组织工程研究领域充满潜力的种子细胞。许多因素都对牙源性干细胞的增殖分化有重要的调节作用。随着对micro RNA调控作用的深入研究,学者们发现很多非编码RNA都在牙源性干细胞的增殖分化调控中起着重要的作用。在人类基因组中,有93%的DNA都会转录为RNA,但仅有2%的RNA具有编码蛋白质的功能,众多的DNA最终转录为非编码RNA。长链非编码RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)过去被认为是转录过程中的杂音,没有实际作用。但近些年来,随着研究的深入,科学家们发现其在表观遗传、转录及转录后基因表达中起着重要的调控作用。ANCR(anti-differetiation noncoding RNA,抗分化非编码RNA)就是具有分化调控作用的lnc RNA。但还没有关于ANCR在牙源性干细胞分化领域的相关调控研究。本实验通过RNAi下调ANCR在牙源性干细胞中的表达,来观察其对牙源性干细胞增殖分化的调控作用。课题所取得的主要结果如下:1.ANCR对DPSC的成骨、成脂、成神经分化有重要的调控作用我们通过病毒转染下调ANCR在DPSC中的表达,发现下调ANCR对DPSC的增殖能力无明显影响,但可以促进DPSC的成骨、成脂、成神经分化,上调相关基因的表达。下调ANCR可以明显提高DPSC的轴突形成能力。2.ANCR对PDLSC的增殖、成骨、成脂、成神经分化有重要的调控作用我们通过病毒转染下调ANCR在DPSC中的表达。对比ANCR下调后的PDLSC及正常PDLSC后,发现下调ANCR可以促进PDLSC的增殖能力,并且可以促进PDLSC的成骨,成脂,成神经分化,上调相关基因的表达。下调ANCR促进PDLSC的成骨分化与Wnt通路相关,是通过下调GSK3-β降解复合物来实现对PDLSC的成骨分化调控。与DPSC不同的是下调ANCR后,PDLSC经过神经诱导后形态更加类似于神经元体部。3.ANCR对SCAP的成骨、成脂分化有重要的调控作用我们通过病毒转染下调ANCR在DPSC中的表达。对比ANCR下调后的SCAP及正常SCAP后,发现下调ANCR对SCAP的增殖能力无明显影响,但可以促进DPSC的成骨,成脂分化,上调相关基因的表达。下调ANCR对SCAP的成神经分化无明显影响。综上所述,ANCR在三种牙源性干细胞(DPSC,PDLSC,SCAP)的增殖和分化过程中起着重要的调控作用,但对三种细胞的调控作用不尽相同。下调ANCR的表达会促进DPSC的成骨、成脂、成神经分化,PDLSC的增殖及成骨、成脂、成神经分化,SCAP的成骨、成脂分化。下调ANCR对PDLSC成骨分化的促进作用是通过激活经典Wnt通路实现的。
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R78
【图文】：

原代培养

DPSC的原代培养图

表面标记物

.2.2 DPSC 的表面标记物鉴定流式细胞检测结果显示（图 2），我们培养的 DPSC 可以表达间充质干细胞表记物 CD29（98.2%）、CD90（86%）、CD146（42.1%） and Stro-1（12.2%），不造血细胞表面标记物 CD34（0.9%）和白细胞表面标记物 CD45（0.9%）。

矿化,显微镜下,油红,脂滴

A.CD29（98.2%）； B. CD34（0.9%）； C. CD45（0.9%）；D. CD90（86%）； E. CD146（42.1%）； F. Stor-1（12.2%）1.2.3 DPSC 的多向分化能力鉴定我们所培养的 DPSC 经过矿化诱导 3 周后茜素红染色，显微镜下可见红染的矿结节。经过 3 周的成脂诱导后油红 O 染色，显微镜下可见细胞间红染的脂滴（图 3

【共引文献】