CBX8激活JAK-STAT3通路促进宫颈癌进展的机制研究

发布时间：2020-11-07 19:54

　　 目的:宫颈癌是全球目前严重威胁女性健康且肿瘤恶性程度最高的肿瘤之一,发达国家的宫颈癌患者在医疗技术逐渐发展的今天,其患者的致死率已经有了一定的好转,但对于发展中国家、经济或医疗条件欠佳的国家,宫颈癌的发病率以及致死率仍然居高不下。在我国宫颈癌是女性肿瘤中十分严重的恶性肿瘤,严重威胁着患者的健康及其家庭的精神以及经济情况。在我国对于宫颈癌的治疗主要是通过手术切除肿瘤组织以及癌旁组织,以及结合放化疗等的综合治疗。但是,根据临床数据以及患者的术后随访发现,多数宫颈癌术后复发的患者面临着化疗药物耐药的情况,因此为有效治疗宫颈癌带来了巨大的困难,所以,能够寻找到新的高效的治疗方式或者新的有效治疗药物,对于宫颈癌术后的辅助治疗,延缓或避免宫颈癌的复发以及增加患者的生存时间是目前临床迫切需要的。本文旨在通过探讨多梳蛋白家族(PcG)中的色素框同源蛋白8(CBX8)对宫颈癌的相关生物过程的影响及其潜在的作用机制,为发现诊断和治疗宫颈癌新的分子激活基因、研发新的抗宫颈癌药物与临床应用提供理论依据。方法:第一部分:首先通过构建CBX8过表达慢病毒载体以及其空载体,对人宫颈癌细胞SiHa细胞进行转染,设置实验组分别为未感染组(Control),感染CBX8过表达空载体慢病毒组(Empty vector)以及感染CBX8过表达慢病毒组(OE-CBX8)。分别采用CCK-8,划痕实验以及Transwell实验检测CBX8对各实验组的细胞活力,迁移和侵袭能力的影响;其次,我们进行了裸鼠体内成瘤实验。最后,分别采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中CBX8、STAT3、Bcl-2、p21 mRNA以及相关蛋白的表达情况,初步探究CBX8的作用机制。第二部分:首先通过构建CBX8过表达慢病毒载体以及其空载体,对人宫颈癌细胞SiHa细胞转染后,设置实验组分别为感染CBX8过表达空载体慢病毒组(Empty vector)、感染CBX8过表达空载体慢病毒+AG490组(Empty vector+AG490)、感染CBX8过表达慢病毒组(OE-CBX8),感染CBX8过表达慢病毒+AG490组(OE-CBX8+AG490)。采用CCK-8,划痕实验以及Transwell实验检测JAK/STAT3通路抑制剂AG490对各实验组细胞活力,迁移以及侵袭能力的影响。然后采用RT-PCR和Western blot检测各组细胞中STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21mRNA以及相关蛋白的表达,明确CBX8与JAK/STAT3通路之间的相互作用以及对宫颈癌发生发展的影响。结果:第一部分:结果表明过表达的CBX8转染宫颈癌SiHa细胞后,其细胞的增殖以及侵袭迁移能力显著增强(P0.01),差异具有统计学意义,结果证明CBX8的过表达可以显著增强宫颈癌的细胞活力,促进细胞增殖和转移。为了证明在体内复杂的环境下,CBX8对宫颈癌的影响,裸鼠成瘤实验的结果证明了过表达的CBX8可促进裸鼠体内成瘤的体积和重量显著上升。为进一步研究其在宫颈癌发展中的作用,RT-PCR和Western blot的研究结果发现与Control组相比,Empty vector组宫颈癌SiHa细胞中CBX8、STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和CBX8、STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表达量均无明显变化,差异不具有统计学意义;与Empty vector组相比,OE-CBX8组宫颈癌SiHa细胞中CBX8、STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和CBX8、STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表达量被显著上调(P0.01),差异具有统计学意义。第二部分:结果表明与Empty vector组相比,Empty vector+AG490组宫颈癌细胞SiHa的细胞活力以及侵袭迁移能力显著下降(P0.01),差异具有统计学意义;与Empty vector组相比,OE-CBX8组的宫颈癌细胞SiHa的细胞活力以及侵袭迁移能力显著增强(P0.01),差异具有统计学意义。与OE-CBX8组相比,OE-CBX8+AG490组的宫颈癌细胞活力以及侵袭迁移能力显著下降(P0.01),差异具有统计学意义。分别采用RT-PCR和Western blot检测各组细胞中STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表达,结果显示,与Empty vector组相比,Empty vector+AG490组宫颈癌细胞SiHa的细胞中STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表达量被显著下调(P0.01),差异具有统计学意义;与Empty vector组相比,OE-CBX8组的宫颈癌SiHa细胞中STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表达量显著被上调(P0.01),差异具有统计学意义;与OE-CBX8组相比,OE-CBX8+AG490组的宫颈癌细胞中STAT3、Bcl-2、p21 mRNA和STAT3、p-STAT3(ser727)、Bcl-2、p21蛋白的表达量被显著下调(P0.01),差异具有统计学意义。结论:(1)CBX8可促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,在宫颈癌的发生发展中发挥癌基因的作用。(2)CBX8可上调宫颈癌细胞中相关JAK/STAT3信号通路STAT3、Bcl-2、p21mRNA以及STAT3、p-STAT3(ser727)Bcl-2、p21蛋白的表达量。(3)JAK/STAT3通路抑制剂AG490可显著逆转由CBX8过表达导致的宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的上调。(4)JAK/STAT3通路抑制剂AG490可显著逆转CBX8过表达导致的宫颈癌细胞中JAK/STAT3通路相关mRNA以及蛋白质的表达上调。(5)CBX8通过激活JAK/STAT3信号通路促进宫颈癌的发生发展。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R737.33
【部分图文】：

本研究通过构建CBX8过表达慢病毒载体以及其空载体,对人宫颈癌细胞SiHa细胞进行转染,设置实验组分别为未感染组(Control),感染CBX8过表达空载体慢病毒组(Empty vector)以及感染CBX8过表达慢病毒组(OE-CBX8)。采用CCK-8检测CBX8对各组细胞活力的影响,Control组,Empty vector组和OE-CBX8组的OD值分为(0.63±0.10)、(0.74±0.08)、(1.16±0.10)。结果如图1-1所示:与Control组相比,感染CBX8过表达空载体慢病毒组宫颈癌细胞SiHa的细胞活力无明显变化,差异不具有统计学意义(P>0.05);与感染CBX8过表达空载体慢病毒组相比,感染CBX8过表达慢病毒组的宫颈癌细胞SiHa的细胞活力显著增强(P<0.01),差异具有统计学意义,结果证明CBX8的过表达可以显著增强宫颈癌细胞活力,促进细胞增殖。2.2 划痕实验检测细胞的迁移能力

划痕实验检测CBX8对宫颈癌细胞迁移能力的影响。未感染(Control)组、感染CBX8过表达空载体慢病毒(Empty vector)组、感染CBX8过表达慢病毒(OE-CBX8)组宫颈癌细胞SiHa的迁移率分别为(52.00±8.19)%、(56.33±9.07)%、(83.00±3.60)%。结果如图1-2所示:与未感染(Control)组相比,感染CBX8过表达空载体慢病毒(Empty vector)组宫颈癌细胞SiHa的迁移能力无明显变化(P>0.05),差异不具有统计学意义;与感染CBX8过表达空载体慢病毒(Empty vector)组相比,感染CBX8过表达慢病毒(OE-CBX8)组宫颈癌细胞SiHa的迁移能力显著增强(P<0.01),差异具有统计学意义,结果证明CBX8的过表达可以显著增强宫颈癌细胞的迁移能力。2.3 Transwell实验检测细胞侵袭的能力

Transwell实验检测CBX8对宫颈癌细胞侵袭能力的影响。未感染(Control)组、感染CBX8过表达空载体慢病毒(Empty vector)组、感染CBX8过表达慢病毒(OE-CBX8)组宫颈癌SiHa细胞的数量分别为(155.67±9.61)、(157.67±13.20)、(236.33±15.70)。结果如图1-3所示:与未感染组相比,感染CBX8过表达空载体慢病毒组穿出Transwell小室的宫颈癌SiHa细胞的数量无明显变化(P>0.05),差异不具有统计学意义;与感染CBX8过表达空载体慢病毒组相比,感染CBX8过表达慢病毒组穿出Transwell小室的宫颈癌SiHa细胞的数量显著增高(P<0.01),差异具有统计学意义,结果证明CBX8的过表达可以显著增强宫颈癌细胞的侵袭能力。2.4 RT-PCR检测各组细胞中CBX8、STAT3、Bcl-2、p21 mRNA的表达
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本文编号：2874401