银杏叶提取物对实验性心肌重塑的干预作用及其机制研究

发布时间：2017-04-09 03:20

  本文关键词：银杏叶提取物对实验性心肌重塑的干预作用及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过体内和体外实验研究银杏叶提取物(GBE)对实验性心肌重塑的保护作用及其可能的机制。方法:1.采用TGF-β1诱导的乳鼠心肌成纤维细胞(CFb)增殖为实验模型,给予GBE和TGF-β1抑制剂进行干预,将实验分为五组A组:阴性对照组,药物同容积的细胞培养液;B组:TGF-β1作用组,TGF-β1(20 ng/m L)干预;C组:ALK5抑制剂(SB431542)作用组,SB431542(6mg/m L)+TGF-β1(20 ng/m L);D组:GBE低剂量组,GBE(2mg/ml)+TGF-β1(2 0ng/m L),;E组:GBE高剂量组,GBE(20mg/ml)+TGF-β1(20 ng/m L)。采用MTT法和HE染色分析GBE对TGF-β1诱导心肌成纤维细胞增殖及形态的影响;采用免疫组织化学分析各组大鼠心肌TGF-β1、I和III型胶原、MMP-2和MMP-9蛋白表达、以及TIMP1和TIMP2蛋白表达变化。2.采用Ang II诱导的乳鼠心肌细胞细胞凋亡为研究对象,给予GBE和ALK5抑制剂进行干预,将实验分为五组:A组:阴性对照组,药物同容积的细胞培养液;B组:Ang II作用组,Ang II(10-5 mol/L)干预;C组:ALK5抑制剂作用组,SB431542(6mg/m L)+Ang II(10-5 mol/L);D组:GBE低剂量组,GBE(2mg/ml)+Ang II(10-5 mol/L);E组:GBE高剂量组,GBE(20mg/ml)+Ang II(10-5 mol/L)。采用HE染色和倒置相差显微镜观察Ang II诱导大鼠心肌细胞心肌凋亡的形态学变化;流式细胞仪和原位末端标记技术(TUNEL法)检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况;采用实时荧光定量PCR和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测心肌凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2在细胞内m RNA及蛋白水平的表达。3.采用结扎大鼠左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌梗死(AMI)模型,术后将存活鼠分为5组(每组20只):假手术组(A组)、AMI模型组(B组)、AMI+阿司匹林10 mg/kg组(C组)、AMI+卡托普利20 mg/kg组(D组)、AMI+GBE 100mg/kg组(E组),分别干预至4周和8周。采用免疫组化和实时荧光定量PCR技术分别检测各组大鼠心肌Ⅰ型胶原、MMP-2和MMP-9蛋白表达以及TGF-β1、MMP-2和MMP-9 m RNA转录水平的表达变化。结果:1.与TGF-β1造模组比较,高浓度GBE组和SB431542组I、III型胶原蛋白表达显著减少(P0.05);与TGF-β1造模组比较,高浓度GBE组MMP-2、MMP-9蛋白表达显著减少(P0.05),SB431542组仅MMP-2蛋白表达显著减少(P0.05);与TGF-β1造模组比较,SB431542组TIMP1、TIMP2蛋白表达均减少(P0.05),高浓度GBE组仅TIMP1蛋白表达减少(P0.05)。2.与阴性对照组比较,Ang II造模组Bax基因表达增加,Bcl-2基因表达降低,差异具有统计学意义(P0.05);B431542组和高浓度GBE组Bax基因表达下降(P0.05);B431542组和高浓度GBE组Bcl-2基因表达上升(P0.05);与Ang II造模组比较,SB431542组和高浓度GBE组细胞凋亡率显著减少(P0.01),高浓度GBE组细胞内Bcl-2蛋白表达显著升高(P0.05),仅高浓度GBE组细胞内Bax蛋白表达显著降低(P0.05),低浓度组或高浓度GBE组的Bcl-2/Bax值有显著增高(P0.05)。3.与AMI模型组比较,4周或8周时GBE组、阿司匹林及卡普托利处理组的Ⅰ型胶原、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平以及TGF-β1、MMP-2和MMP-9 m RNA转录水平均显著降低(P0.01);8周时,GBE、阿司匹林及卡普托利组Ⅰ型胶原蛋白表达水平较4周均明显降低(P0.05),GBE组MMP-2、MMP-9蛋白表达水平与阿司匹林组相比,差异无统计学差异;GBE、阿司匹林及卡普托利处理组TGF-βm RNA 8周时的表达均显著低于4周(P0.01);GBE、阿司匹林及卡普托利处理组MMP-2和MMP-9的m RNA表达在8周时与4周时比较均无明显差异。结论:1、GBE显著抑制TGF-β1诱导心肌成纤维细胞增殖与分化,其抑制作用与MMPs系统密切相关;2、GBE对Ang II诱导心肌细胞凋亡具有显著的保护作用,其作用机制与提高细胞凋亡抑制基因Bcl-2蛋白及m RNA的表达和降低促细胞凋亡基因Bax蛋白及m RNA的表达、上调Bcl-2/Bax值相关;3、GBE可降低大鼠急性心肌梗死后心肌重塑与MMPs及TGF-β1密切相关。GBE对大鼠实验性心肌纤维化模型具有抑制作用,其作用机制与抑制心肌细胞凋亡、改善成纤维细胞增殖及分化密切相关。
【关键词】：银杏叶提取物 转化生长因子-β1 血管紧张素II 心肌纤维化 细胞凋亡 心室重塑
【学位授予单位】：贵阳医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-13
• 略缩词表13-15
• 前言15-20
• 第一章 GBE对TGF-β1 诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞纤维化的干预作用20-47
• 引言20-21
• 材料与方法21-27
• 结果27-42
• 讨论42-46
• 结论46-47
• 第二章 GBE对Ang II诱导的新生大鼠心肌细胞凋亡的影响47-70
• 引言47-48
• 材料与方法48-55
• 结果55-66
• 讨论66-69
• 结论69-70
• 第三章 银杏叶提取物对AMI大鼠心肌组织心肌重塑相关因子的影响70-84
• 引言70
• 材料与方法70-74
• 结果74-82
• 讨论82-84
• 结论84
• 参考文献84-97
• 综述97-111
• 参考文献105-111
• 作者简历111-113
• 致谢113-114
• 学位论文数据集114

【参考文献】

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本文编号：294354