CD7-CAR-NK-92MI细胞靶向治疗T细胞肿瘤及双特异CAR-T细胞靶向治疗B细胞肿瘤

发布时间：2021-03-25 19:50

　　近几年,嵌合抗原受体（CAR）免疫疗法在B细胞恶性肿瘤的临床研究中展现出非常好的临床疗效,但是,针对T细胞肿瘤的CAR-T疗法仍然面临着很大的挑战,我们很难找到一个针对T细胞肿瘤的合适靶点,大部分在T细胞肿瘤细胞上高表达的抗原,在正常T细胞上也会表达,这会导致CAR-T细胞产生自相残杀的现象。CD7分子在大部分的T淋巴细胞白血病细胞中是高表达的,但在一小群正常T淋巴细胞中是不表达的,有研究表明CD7不会对T细胞的发育和功能产生关键的影响。暗示CD7分子可能是T淋巴细胞白血病的一个理想靶点,但是,由于CD7分子在大部分正常T细胞上也表达,在制备过程中CD7-CAR-T细胞也会产生自杀现象,因此在体外很难制备成功。另外,我们也很难从T淋巴细胞白血病患者的体内获得足够的没有被肿瘤细胞污染的正常T细胞来制备CD7-CAR-T细胞。虽然最近有报道显示,在动物模型中,可以通过同时敲除了CD7和T细胞受体的异体CD7-CAR-T来治疗T细胞恶性肿瘤,但在临床实际应用中不能保证100%的基因编辑效率,因此,异体CD7-CAR-T仍然存在移植物抗宿主病（GVHD）的风险。自然杀伤（NK）细胞在对抗恶性细... 

【文章来源】：苏州大学江苏省

【文章页数】：144 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图２．?ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２Ｍ丨和ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ的细胞表面Ｆｃ的表达：ＮＫ－９２ＭＩ为未转染??ＣＡＲ的阴性对照细胞

第一部分?ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ钿胞靶向治疗Ｔ细胞肿瘤及双特异ＣＡＲ－Ｔ细胞靶向治疗Ｂ细胞肿瘤??ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ细胞中有特异性ＣＤ７－ＣＡＲ和ｄＣＤ７－ＣＡＲ的表达。??１２?３??ａｎｔｉ－ＣＤ３?Ｉ?＞?＾——８３ｋＤａ??ａｎｔｉ－ＣＤ３《?＞?＾——６８ｋＤａ??ａｎｔｉ－ＣＤ３?＾??１６ｋＤａ??图３．ＣＤ７－ＣＡＲ和ｄＣＤ７－ＣＡＲ表达的Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测：在变性条件下通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离??ＮＫ－９２ＭＩ?（泳道?１）?，?ＣＤ７－ＮＫ－９２ＭＩ?（泳道?２）和?ｄＣＤ７－ＮＫ－９２Ｍｌ?（泳道?３）细胞的裂解物。??用ＣＤ３＾Ｉ特弄性抗体进行免疫印迹分析，然后用ＨＲＰ偶联的抗体检测。图中标出的是内源??（１６ＫＤ）和外源嵌合ＣＤ３Ｃ融合蛋白（６８ＫＤ，８３ＫＤ）的位置。??（３）我们通过细胞流式检测了?ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ?和?ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ??细胞表面ＣＤ７的表达。结果显示，未转染ＣＤ７－ＣＡＲ的ＮＫ－９２ＭＩ细胞中ＣＤ７的??阳性率为８．４２?％，而转染了?ＣＤ７－ＣＡＲ或ｄＣＤ７－ＣＡＲ的ＮＫ－９２ＭＩ细胞??（ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ?和?ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ）中的?ＣＤ７?阳性率显著降低，基本??检测不到ＣＤ７的表达，阳性率都低于１％?（图４）。这说明了我们构建的??ＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ或ｄＣＤ７－ＣＡＲ－ＮＫ－９２ＭＩ细胞对ＣＤ７阳性细胞具有靶向性，可??以特异性杀死ＣＤ７阳性的ＮＫ－９２ＭＩ细胞。??ＮＫ－９２ＭＩ?ＣＤ７?ＣＡＲ?ＮＫ?９２ＭＩ?ｄＣＤ７－ＣＡＲ?ＮＫ?９２ＭＩ??Ａ

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本文编号：3100225