转录因子EN1调控TR4/EZH2诱导前列腺癌转移的分子机制研究

发布时间：2021-03-26 13:43

　　[研究背景及目的]前列腺癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤之一,在欧美国家,其发病率居男性恶性肿瘤之首,死亡率仅次于肺癌,在我国,前列腺癌发病率呈逐年上升趋势。前列腺癌患者早期无明显症状,近一半患者初诊时已发生远处转移,丧失根治手术机会。目前针对转移性前列腺癌临床首选雄激素剥夺治疗,但大多数患者雄激素剥夺治疗后2年左右转变成转移性去势抵抗性前列腺癌。而针对转移性去势抵抗性前列腺癌患者临床有效治疗方法有限,患者预后也差。成为临床治疗难题。因此,深入研究和探讨前列腺癌转移的分子机制,找到新的分子标记物或治疗靶标,是当前的一个研究热点。这些科研成果也将加强和促进临床问题的解决。我们结合网络数据库以及自己实验中的发现,想通过已有的分子生物学研究方法,深入发掘转移性前列腺癌细胞中EN1调控的关键靶基因,构建EN1基因表达调控网络,并阐明其分子机制。为临床治疗转移性前列腺癌提供新思路。[方法]1.对来自美国纽约“纪念斯隆-凯特林癌症中心（MSKCC）和匹兹堡大学的2个的前列腺癌样本库mRNA表达谱芯片分析EN1在前列腺癌转移灶中的表达水平,比较转移性前列腺癌与局限性前列腺癌中EN1的表达差异。2.通过小... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：87 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－１前列腺癌的发生发展过程??

第２章转录因子ＥＮ１可以促进前列腺癌细胞的侵袭??此时的转染效率（荧光／总体的比例）应达到７０％以上为最佳。??第四天：??１．收集转染４８?ｈ后的病毒液并换新鲜培养基１０?ｍｌ，待７２?ｈ后再次收集病毒液。??２．?３?０００?ｒ／ｍｉｎ离心２０?ｍｉｎ，０．４５?ｌａｍ滤膜过滤，去除细胞沉淀。??３．?１２?００〇１７〇１；１１离心浓缩细胞、分装－８０°０贮存。??２．３实验结果??首先，我们对来自美国纽约纪念斯隆－凯特林癌症中心（ＭＳＫＣＣ）和匹兹堡??大学的２个的前列腺癌样本ｍＲＮＡ表达谱芯片分析，发现转移性前列腺癌细胞??组织中表达的转录因子ＥＮ１要高于局限性的前列腺癌细胞组织（ｐ＜０．０５），但??在正常的前列腺组织中，转录因子ＥＮ１的表达量非常相近（图２－１）。??？?ｔｉｓｓｕｅ?ａｄｊａｃｅｎｔ?ｔｏ?ｔｕｍｏｒ?？?Ｔｕｍｏｒ?？?Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ??＊＊??’〇５??０．００６０???４?１?０．０２７３?Ｑ．Ｑ４５３?１??１０．０－?１?＾??Ｉ?９－５＊?°－０３７１?ｔ?丨去感??＾?＿?９．０－?＇?０．９８６８?０．０１２４?＿?Ｓ－Ｖ?士??〇?１?Ｍ?１?Ｖ?？！??８．５－?？？?ｉ??ｒ?－ｉ：?Ｍ?ｉｉ?？?？??７?０＇?＊＊＊＊＊?＊?Ｐ＜０．０５，?＊？?Ｐ＜０．０１??６．５?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??ｎ＝?２９?１３０?１９?６０?６６?２３??ＧＳＥ＝?２１０３２?６９６１??图２－１各组别中ＥＮＩ的表达量统计分析??３６??

４００．?ｈ?〇?风咖以??．＊？？？＇；?ｒ?．．；？?，．．．＇？、、“：?＇?．?Ｖ?｜?３００．?■一＊??．ＵＷ?Ｃ４－２?ＰＣ－３??ｃ??ｐＬＫＯ－ｌｕｃ?ｓｈＥＮｌ＃ｌ?ｓｈＥＮｌ＃２??８０?＂Ｉ?★??３?｜｜６０＊?Ｉ?厂?Ｈ??＾?■！：，《－’－?■§．?ｇ?４０?－?￣??ｒ－ｒ?＝?ｉＴｉ??ｒｎ?Ｓ?１２０－??＾?＾■〇１１」＿１螽?１，１＿蠢??Ｃ４－２?ＰＣ－３??．＾?ｖ？ｎＳｒｔ＜Ｋ－ｏ－＇??图２－２敲低ＥＮＩ显著抑制Ｃ４－２和ＰＣ３细胞的迁移能力??Ａ．在Ｃ４－２和ＰＣ３细胞中，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ检测ＥＮ１蛋白质水平的相对表达量，验证ｓｌｉＲＮＡ??敲低ＥＮ１的皴果。Ｂ．?Ｃ４－２和ＰＣ３细胞敲低ＥＮ１后，铺细胞于ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室中，培养３６??小时后对穿过ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室的细胞进行结晶紫染色后计数（放大倍数１００Ｘ，Ｂａｒ：２００?ｕ?ｍ）。??结果显示三次独立实验的平均值±标准误。Ｃ．?Ｃ４－２和ＰＣ３细胞中敲低ＥＮ１后，基质胶３Ｄ??培养１１天后，评估细胞球伪足数量（放大倍数２００Ｘ，Ｂａｒ２００ｕｍ）。＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１，??＊＊＊ｐ＜〇＿〇〇ｌ，ｎｓ：?ｎｏｎ－ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ?／ｔｅｓｔ）。??３８??


本文编号：3101685