乙醛脱氢酶功能与酒精性肝损伤相关性的机制研究

发布时间：2021-04-21 17:55

　　酒精滥用是一项世界范围高致残率和致死率的严重健康问题。肝脏不仅是机体负责代谢酒精的重要器官,也同时是受酒精毒害的主要靶点。肝细胞线粒体中的ALDH2是酒精代谢的重要一环,负责清除具有强烈毒性和致癌性的酒精代谢中间产物乙醛。ALDH2在人群中存在基因多态性,携带失活等位基因的个体一旦饮酒后将出现乙醛堆积,且表现出细胞免疫层面的差异。目前,ALDH2和乙醛与T细胞及相关肝炎的关系仍不明确;并且肝脏损伤和炎症本身对肝脏酒精代谢的能力的影响也有待探索,因为基础肝脏疾病与过量饮酒行为本身在临床非常常见。第一部分:病毒性肝炎和酒精滥用常常共存并协同导致慢性肝脏疾病的发展,但其背后的发病机制并不明确。病毒性肝炎的一个特征表现是T细胞激活,以对抗、清除病原。ALDH2对于整体酒精代谢过程非常重要;约40%的东亚人群携带有ALDH2缺陷,可导致的饮酒后机体内乙醛堆积和其他不良反应。由于ALHD2缺陷可加剧酒精的毒性作用,探索其是否可增加机体对T细胞肝炎的敏感性很意义。本研究利用Con A诱导T细胞激活,联合慢性酒精喂养,在ALDH2敲除小鼠和WT小鼠建立T细胞肝炎模型;利用血液生化检查和免疫组化比较两组... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：123 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
前言
中文摘要
Abstract
中英文缩略词表
第1章 绪论
    1.1 酒精性肝病研究的必要性
        1.1.1 酒精性肝病的流行与疾病负担
        1.1.2 酒精性肝病的发病机制
    1.2 酒精代谢与ALDH2基因多态性
    1.3 ALDH2与肝脏疾病
        1.3.1 ALDH2与酒精性肝病
        1.3.2 ALDH2与非酒精性脂肪肝
        1.3.3 ALDH2与病毒性肝炎
        1.3.4 ALDH2与肝癌
第2章 酒精抑制乙醛脱氢酶缺陷型个体的T细胞糖代谢及肝炎
    2.1 实验材料
        2.1.1 动物
        2.1.2 主要试剂和药品
        2.1.3 主要仪器
        2.1.4 引物序列
        2.1.5 抗体
    2.2 实验方法
        2.2.1 组织处理和切片制备
        2.2.2 HE染色
        2.2.3 免疫组化和免疫荧光染色
        2.2.4 TUNEL染色
        2.2.5 小鼠原代肝细胞的分离
        2.2.6 小鼠原代淋巴细胞的分离
        2.2.7 人外周血单个核细胞（PBMC）和 T 淋巴细胞分离
        2.2.8 蛋白免疫印迹 （Western blotting）
        2.2.9 组织及细胞总 RNA 提取（Trizol 法）
        2.2.10 q RT-PCR检测
        2.2.11 流式细胞术
        2.2.12 统计学分析
    2.3 实验结果
        2.3.1 慢性酒精损伤可加剧小鼠Con A所致肝脏炎症
        2.3.2 ALDH2基因缺陷可消除慢性酒精损伤对小鼠Con A肝炎的加剧作用
        2.3.3 ALDH2基因缺陷可抑制慢性酒精损伤基础上Con A所致细胞因子分泌及下游信号激活
        2.3.4 乙醛可抑制Con A对小鼠脾细胞的刺激作用
        2.3.5 乙醛可抑制小鼠T细胞体外有氧糖酵解
        2.3.6 乙醛可抑制人T细胞体外有氧糖酵解
        2.3.7 皮质酮降低慢性酒精饮食ALDH2缺陷型小鼠对Con A肝损伤的敏感性
    2.4 讨论
第3章 肝脏炎症及损伤对酒精代谢和饮酒行为的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 动物和细胞
        3.1.2 主要试剂和仪器
        3.1.3 引物序列
        3.1.4 抗体
    3.2 实验方法
        3.2.1 m RNA及蛋白分析
        3.2.2 肝损伤模型及酒精灌胃
        3.2.3 双瓶选择试验
        3.2.4 黑夜饮酒试验
        3.2.5 乙醇及乙醛水平测量
        3.2.6 ADH和ALDH2酶活性测定
        3.2.7 统计学分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 CCl4导致的急性和慢性肝损伤对酒精代谢的影响
        3.3.2 LPS导致的急性肝损伤和炎症对酒精代谢的影响
        3.3.3 肝脏炎症和损伤对小鼠饮酒行为的影响
        3.3.4 炎症和氧化应激调控ADH1和ALDH2的表达及酶活性
    3.4 讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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[2]Hepatocellular carcinoma in non-cirrhotic liver: A comprehensive review[J]. Aakash Desai,Sonia Sandhu,Jin-Ping Lai,Dalbir Singh Sandhu.  World Journal of Hepatology. 2019(01)
[3]基因多态性、饮酒种类与乙醇代谢的相关性[J]. 叶懿,陈帆,卢翔,吴昊,卢颀,施蕾,颜有仪,杨林,廖林川.  法医学杂志. 2018(02)
[4]Clinical epidemiology and disease burden of nonalcoholic fatty liver disease[J]. Brandon J Perumpail,Muhammad Ali Khan,Eric R Yoo,George Cholankeril,Donghee Kim,Aijaz Ahmed.  World Journal of Gastroenterology. 2017(47)
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[6]Alcoholic hepatitis: The pivotal role of Kupffer cells[J]. Duminda B Suraweera,Ashley N Weeratunga,Robert W Hu,Stephen J Pandol,Richard Hu.  World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology. 2015(04)
[7]Research progress and prospects of markers for liver cancer stem cells[J]. Cheng-Pei Zhu,An-Qiang Wang,Hao-Hai Zhang,Xue-Shuai Wan,Xiao-Bo Yang,Shu-Guang Chen,Hai-Tao Zhao.  World Journal of Gastroenterology. 2015(42)
[8]ALDH2和CYP2E1基因多态性及饮酒习惯与肝细胞癌易感性的关系[J]. 叶新平,彭涛,刘唐威,苏智雄,肖开银,尚丽明,苏铭,黎乐群.  卫生研究. 2010(01)



本文编号：3152216