LBH对胃癌细胞增殖转移能力的影响及与临床预后的相关性研究
发布时间：2021-04-29 22:58
目的:胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤,仅2012年,全世界约新发胃癌989,600例、死亡738,000例,这分别占新发癌症病例数和癌症死亡人数的6.7%和8.8%。尽管改进了手术和辅助治疗方法,但大约1/3的胃癌患者仍会复发;且患者一旦复发,5年总生存率低于25%。因此,鉴定用于诊断和治疗该疾病的新标志物和治疗靶标十分重要。我科既往的研究中鉴定出了一系列对胃癌预后具有预测能力的分子,本研究所涉及的LBH是其中之一。Limb bud and heart development（LBH）是脊椎动物中高度保守的组织特异性转录辅助因子,其调节胚胎发育过程中的多个关键基因的表达。它位于染色体2p23.1,编码一个含有105个氨基酸的小核蛋白。除胚胎组织外,LBH还在成人器官中表达,包括脾,肠,肾,脑和外周神经系统。在心脏发育期间异常表达LBH可导致先天性心脏病,例如部分三体性2p综合征。Rieger等人在2010年首次发现了LBH在癌症中的作用,他们观察到LBH作为Wnt途径的靶基因,抑制乳腺上皮分化并促进Wnt通路介导的肿瘤形成。Chen等人的研究发现,在肝透明细胞癌中LBH的过表达导致了患者...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要试剂与仪器
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 在线数据集的下载及预处理
2.2.2 在线数据集的临床病理特征和生存分析
2.2.3 Gene Set Enrichment Analysis(GSEA)分析
2.2.4 Gene Ontology(GO)和Kyoto Encyclopedia of Gene and Genomics(KEGG)分析
2.2.5 Nomogram(列线图)及其验证
2.2.6 临床病例的入选与排除
2.2.7 免疫组化染色
2.2.8 免疫组化评估
2.2.9 细胞培养
2.2.10 细胞计数
2.2.11 RNA提取
2.2.12 RNA反转录
2.2.13 实时定量PCR(qRT-PCR)
2.2.14 Western Blot检测蛋白水平
2.2.15 慢病毒稳转细胞系的建立
2.2.16 MTT法检测细胞增殖
2.2.17 集落形成
2.2.18 细胞伤口愈合实验
2.2.19 Transwell法检测细胞迁移和侵袭
2.2.20 悬滴细胞聚集测定
2.2.21 腹膜转移的小鼠模型
2.2.22 免疫共沉降技术检测蛋白质相互结合
2.2.23 统计学分析
3 结果
3.1 生物信息学分析发现LBH为胃癌的独立预后因子
3.1.1 在TCGA和 GSE29272 队列中,LBH的表达水平在胃癌中升高
3.1.2 在TCGA-STAD,GSE15459和GSE62254 数据集中,LBH的上调与患者不良预后密切相关
3.1.3 LBH表达与TCGA-STAD,GSE15459和GSE62254 数据集中不良的临床病理特征相关
3.1.4 LBH mRNA表达可作为TCGA-STAD,GSE15459和GSE62254 数据集中OS的独立预测因子
3.1.5 列线图及其验证
3.2 胃癌患者中的LBH表达升高预示着较差的预后
3.2.1 患者的免疫组化分析显示胃癌组织中LBH表达升高
3.2.2 胃癌患者LBH表达与临床病理参数的相关性
3.2.3 高表达LBH蛋白预示着GC患者的预后不良
3.2.4 LBH蛋白可作为GC患者的独立预后标志物
3.3 LBH促进胃癌细胞的增殖
3.3.1 胃癌细胞系中LBH的 mRNA和蛋白表达水平
3.3.2 稳定敲减或过表达LBH细胞株的建立
3.3.3 MTT实验发现LBH促进胃癌细胞的增殖
3.3.4 集落形成实验证实LBH可增加胃癌细胞的集落形成能力
3.4 LBH促进胃癌细胞的侵袭和迁移
3.4.1 伤口愈合实验发现LBH可以促进细胞的迁移
3.4.2 Transwell实验证实LBH可促进胃癌细胞的迁移和侵袭
3.5 LBH抑制了胃癌细胞的聚集和粘附
3.5.1 LBH抑制了胃癌细胞的聚集
3.5.2 敲减LBH抑制了HGC-27 粘附于HMrSV5 细胞
3.6 LBH促进胃癌的腹膜转移
3.6.1 在线数据集提示LBH可能与胃癌的腹膜转移有关
3.6.2 MKN-45P细胞系中LBH的表达上调
3.6.3 敲减LBH后降低了MKN-45 细胞系的腹膜转移
3.6.4 过表达LBH后增加了BGC-823细胞的腹膜转移
3.7 生物信息学预测LBH调控胃癌增殖和转移的可能机制
3.7.1 基因富集分析(GSEA)
3.7.2 基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析
3.8 LBH参与调节Integrin/FAK/Akt通路
3.8.1 在TCGA STAD数据集中LBH与整合素家族分子呈正相关
3.8.2 Western Blot结果证实LBH可调控整合素家族多个分子的表达
3.8.3 Western Blot结果证实LBH参与调控Integrin/FAK/Akt通路
3.9 LBH通过调控c-jun的转录活性参与调控NRP1 的表达
3.9.1 在线数据集显示NRP1为LBH相关生物过程中的关键分子
3.9.2 Western Blot研究证实LBH可以调控NRP1 的表达
3.9.3 LBH作为辅助转录因子可以通过调控c-JUN对 NRP-1 的转录活性调控NRP1 的表达
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]Recent advances in the molecular diagnostics of gastric cancer[J]. Mitsuro Kanda,Yasuhiro Kodera. World Journal of Gastroenterology. 2015(34)
[2]Role of cancer-associated fibroblasts in invasion and metastasis of gastric cancer[J]. Yu Yan,Li-Feng Wang,Rui-Fen Wang. World Journal of Gastroenterology. 2015(33)
[3]Role of epithelial-mesenchymal transition in gastric cancer initiation and progression[J]. Zhao Peng,Chen-Xiao Wang,Er-Hu Fang,Guo-Bin Wang,Qiang Tong. World Journal of Gastroenterology. 2014(18)
[4]Pathophysiology and biology of peritoneal carcinomatosis[J]. Shigeki Kusamura,Dario Baratti,Nadia Zaffaroni,Raffaella Villa,Barbara Laterza,Maria Rosaria Balestra,Marcello Deraco. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2010(01)
本文编号：3168337
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
1 前言
2 材料与方法
2.1 主要试剂与仪器
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器
2.2 实验方法
2.2.1 在线数据集的下载及预处理
2.2.2 在线数据集的临床病理特征和生存分析
2.2.3 Gene Set Enrichment Analysis(GSEA)分析
2.2.4 Gene Ontology(GO)和Kyoto Encyclopedia of Gene and Genomics(KEGG)分析
2.2.5 Nomogram(列线图)及其验证
2.2.6 临床病例的入选与排除
2.2.7 免疫组化染色
2.2.8 免疫组化评估
2.2.9 细胞培养
2.2.10 细胞计数
2.2.11 RNA提取
2.2.12 RNA反转录
2.2.13 实时定量PCR(qRT-PCR)
2.2.14 Western Blot检测蛋白水平
2.2.15 慢病毒稳转细胞系的建立
2.2.16 MTT法检测细胞增殖
2.2.17 集落形成
2.2.18 细胞伤口愈合实验
2.2.19 Transwell法检测细胞迁移和侵袭
2.2.20 悬滴细胞聚集测定
2.2.21 腹膜转移的小鼠模型
2.2.22 免疫共沉降技术检测蛋白质相互结合
2.2.23 统计学分析
3 结果
3.1 生物信息学分析发现LBH为胃癌的独立预后因子
3.1.1 在TCGA和 GSE29272 队列中,LBH的表达水平在胃癌中升高
3.1.2 在TCGA-STAD,GSE15459和GSE62254 数据集中,LBH的上调与患者不良预后密切相关
3.1.3 LBH表达与TCGA-STAD,GSE15459和GSE62254 数据集中不良的临床病理特征相关
3.1.4 LBH mRNA表达可作为TCGA-STAD,GSE15459和GSE62254 数据集中OS的独立预测因子
3.1.5 列线图及其验证
3.2 胃癌患者中的LBH表达升高预示着较差的预后
3.2.1 患者的免疫组化分析显示胃癌组织中LBH表达升高
3.2.2 胃癌患者LBH表达与临床病理参数的相关性
3.2.3 高表达LBH蛋白预示着GC患者的预后不良
3.2.4 LBH蛋白可作为GC患者的独立预后标志物
3.3 LBH促进胃癌细胞的增殖
3.3.1 胃癌细胞系中LBH的 mRNA和蛋白表达水平
3.3.2 稳定敲减或过表达LBH细胞株的建立
3.3.3 MTT实验发现LBH促进胃癌细胞的增殖
3.3.4 集落形成实验证实LBH可增加胃癌细胞的集落形成能力
3.4 LBH促进胃癌细胞的侵袭和迁移
3.4.1 伤口愈合实验发现LBH可以促进细胞的迁移
3.4.2 Transwell实验证实LBH可促进胃癌细胞的迁移和侵袭
3.5 LBH抑制了胃癌细胞的聚集和粘附
3.5.1 LBH抑制了胃癌细胞的聚集
3.5.2 敲减LBH抑制了HGC-27 粘附于HMrSV5 细胞
3.6 LBH促进胃癌的腹膜转移
3.6.1 在线数据集提示LBH可能与胃癌的腹膜转移有关
3.6.2 MKN-45P细胞系中LBH的表达上调
3.6.3 敲减LBH后降低了MKN-45 细胞系的腹膜转移
3.6.4 过表达LBH后增加了BGC-823细胞的腹膜转移
3.7 生物信息学预测LBH调控胃癌增殖和转移的可能机制
3.7.1 基因富集分析(GSEA)
3.7.2 基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析
3.8 LBH参与调节Integrin/FAK/Akt通路
3.8.1 在TCGA STAD数据集中LBH与整合素家族分子呈正相关
3.8.2 Western Blot结果证实LBH可调控整合素家族多个分子的表达
3.8.3 Western Blot结果证实LBH参与调控Integrin/FAK/Akt通路
3.9 LBH通过调控c-jun的转录活性参与调控NRP1 的表达
3.9.1 在线数据集显示NRP1为LBH相关生物过程中的关键分子
3.9.2 Western Blot研究证实LBH可以调控NRP1 的表达
3.9.3 LBH作为辅助转录因子可以通过调控c-JUN对 NRP-1 的转录活性调控NRP1 的表达
4 讨论
5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]Recent advances in the molecular diagnostics of gastric cancer[J]. Mitsuro Kanda,Yasuhiro Kodera. World Journal of Gastroenterology. 2015(34)
[2]Role of cancer-associated fibroblasts in invasion and metastasis of gastric cancer[J]. Yu Yan,Li-Feng Wang,Rui-Fen Wang. World Journal of Gastroenterology. 2015(33)
[3]Role of epithelial-mesenchymal transition in gastric cancer initiation and progression[J]. Zhao Peng,Chen-Xiao Wang,Er-Hu Fang,Guo-Bin Wang,Qiang Tong. World Journal of Gastroenterology. 2014(18)
[4]Pathophysiology and biology of peritoneal carcinomatosis[J]. Shigeki Kusamura,Dario Baratti,Nadia Zaffaroni,Raffaella Villa,Barbara Laterza,Maria Rosaria Balestra,Marcello Deraco. World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2010(01)
本文编号：3168337
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3168337.html
教材专著
