登革病毒诱导血管渗漏相关分子机制研究
发布时间：2021-05-08 05:39
登革病毒属于黄病毒科黄病毒属的一个血清型亚群,根据其抗原性的不同可以分为5个不同的血清型。同一血清型中又可因为抗原性的差异分为不同的基因型。登革病毒是一种虫媒病毒,其主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊进行传播。登革病毒主要流行于热带和亚热带地区,在亚洲,太平洋群岛及中、南美洲等许多国家均已造成严重的威胁。登革病毒感染人体后主要引起登革热以及发病率和死亡率都很高的登革出血热和登革休克综合征。其中登革热的症状主要是发热,头痛,皮疹以及肌肉和关节疼痛,人体在感染同一血清型之后会获得终生免疫。但是不同血清型所造成的二次感染却会造成严重危及生命的登革出血热和登革休克综合征,这种现象被称作“抗体依赖性增强作用”。其主要的临床症状是低血压,血容量减少及血管通透性的改变。其中血管通透性的改变是其主要的研究热点,但是具体的机制还不是太清楚。临床研究发现登革病毒感染会诱导产生的大量的炎症因子,并且和登革疾病的严重程度呈正相关。在登革病毒感染的过程中,炎症因子参与调节宿主的体内稳态平衡以及参与疾病的发生。IL-1β,是宿主体内产生的一类非常重要的炎症因子,其主要由炎性小体激活产生。NLRP3炎性小体在宿主天然免疫系...
【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：131 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 研究背景
1.1 登革病毒概述
1.1.1 登革病毒的流行病毒学
1.1.2 登革病毒的分子病毒学
1.1.3 登革病毒的临床症状和致病机制
1.1.4 登革的早期诊断和治疗
1.1.5 登革疫苗的研发和展望
1.2 炎性小体概述
1.2.1 NLRP1 炎性小体
1.2.2 NLRC4 炎性小体
1.2.3 AIM2 炎性小体
1.2.4 NLRP3 炎性小体
1.2.5 非经典的炎性小体
第二章 实验材料和实验方法
2.1 实验材料
2.1.1 病毒
2.1.2 细胞系、细胞培养和细胞因子
2.1.3 抗体
2.1.4 表达载体
2.1.5 生化试剂
2.1.6 核酸操作及检测试剂盒
2.1.7 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 登革病毒的扩增和检测
2.2.2 细胞系培养和转染实验
2.2.3 THP-1 细胞刺激分化为巨噬细胞
2.2.4 克隆构建
2.2.5 RNA提取和qRT-PCR实验
2.2.6 Western-blot
2.2.7 免疫共沉淀实验(CO-IP)
2.2.8 GST pull-down实验
2.2.9 免疫荧光实验
2.2.10 ASC多聚化检测
2.2.11 HEK293T体外构建NLRP3 炎性小体体系
2.2.12 MMP-9 明胶酶活检测
2.2.13 跨内皮细胞电阻检测(TEER)
2.2.14 小鼠器官血管渗漏检测
2.2.15 酶联免疫吸附实验(ELISA)
第三章 登革病毒M蛋白通过激活NLRP3 炎性小体诱导血管渗漏机制的研究
3.1 研究背景与立项依据概述
3.2 实验结果
3.2.1 登革病毒通过激活NLRP3 炎性小体来诱导IL-1β的分泌
3.2.2 登革病毒M蛋白通过和NLRP3 相互作用促进NLRP3 炎性小体的组装
3.2.3 登革病毒通过上调器官中的IL-1β水平来诱导小鼠器官中的血管渗漏
3.2.4 登革病毒M蛋白通过激活NLRP3 炎性小体诱导小鼠器官中的血管渗漏
3.2.5 IL-1β可以直接诱导小鼠器官中的血管渗漏的发生
3.3 本章小结和讨论
第四章 登革病毒NS1 蛋白通过招募MMP-9 蛋白诱导血管渗漏机制的研究
4.1 研究背景与立项依据概述
4.2 实验结果
4.2.1 登革病毒感染诱导MMP-9 的产生和分泌
4.2.2 登革病毒NS1 蛋白可以和MMP-9 相互作用
4.2.3 登革病毒NS1 蛋白通过激活NF-κB信号通路来促进MMP-9 的分泌
4.2.4 登革病毒NS1 蛋白通过招募MMP-9 蛋白来诱导内皮细胞通透性改变
4.2.5 登革病毒NS1 蛋白通过招募MMP-9 蛋白来破坏内皮细胞间的交联
4.2.6 登革病毒NS1 蛋白促进MMP-9 和交联分子的相互作用
4.2.7 MMP-9 蛋白在NS1 诱导小鼠血管渗漏过程中发挥重要作用
4.3 本章小结和讨论
参考文献
博士期间发表和待发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Dengue in China: not a passing problem[J]. QIN Cheng Feng,SHI Pei Yong. Science China（Life Sciences）. 2014(12)
[2]19782014年我国登革热的流行病学分析[J]. 熊益权,陈清. 南方医科大学学报. 2014(12)
[3]中国登革热的流行现状[J]. 毛祥华,张再兴. 中国病原生物学杂志. 2007(05)
本文编号：3174779
【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：131 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 研究背景
1.1 登革病毒概述
1.1.1 登革病毒的流行病毒学
1.1.2 登革病毒的分子病毒学
1.1.3 登革病毒的临床症状和致病机制
1.1.4 登革的早期诊断和治疗
1.1.5 登革疫苗的研发和展望
1.2 炎性小体概述
1.2.1 NLRP1 炎性小体
1.2.2 NLRC4 炎性小体
1.2.3 AIM2 炎性小体
1.2.4 NLRP3 炎性小体
1.2.5 非经典的炎性小体
第二章 实验材料和实验方法
2.1 实验材料
2.1.1 病毒
2.1.2 细胞系、细胞培养和细胞因子
2.1.3 抗体
2.1.4 表达载体
2.1.5 生化试剂
2.1.6 核酸操作及检测试剂盒
2.1.7 实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 登革病毒的扩增和检测
2.2.2 细胞系培养和转染实验
2.2.3 THP-1 细胞刺激分化为巨噬细胞
2.2.4 克隆构建
2.2.5 RNA提取和qRT-PCR实验
2.2.6 Western-blot
2.2.7 免疫共沉淀实验(CO-IP)
2.2.8 GST pull-down实验
2.2.9 免疫荧光实验
2.2.10 ASC多聚化检测
2.2.11 HEK293T体外构建NLRP3 炎性小体体系
2.2.12 MMP-9 明胶酶活检测
2.2.13 跨内皮细胞电阻检测(TEER)
2.2.14 小鼠器官血管渗漏检测
2.2.15 酶联免疫吸附实验(ELISA)
第三章 登革病毒M蛋白通过激活NLRP3 炎性小体诱导血管渗漏机制的研究
3.1 研究背景与立项依据概述
3.2 实验结果
3.2.1 登革病毒通过激活NLRP3 炎性小体来诱导IL-1β的分泌
3.2.2 登革病毒M蛋白通过和NLRP3 相互作用促进NLRP3 炎性小体的组装
3.2.3 登革病毒通过上调器官中的IL-1β水平来诱导小鼠器官中的血管渗漏
3.2.4 登革病毒M蛋白通过激活NLRP3 炎性小体诱导小鼠器官中的血管渗漏
3.2.5 IL-1β可以直接诱导小鼠器官中的血管渗漏的发生
3.3 本章小结和讨论
第四章 登革病毒NS1 蛋白通过招募MMP-9 蛋白诱导血管渗漏机制的研究
4.1 研究背景与立项依据概述
4.2 实验结果
4.2.1 登革病毒感染诱导MMP-9 的产生和分泌
4.2.2 登革病毒NS1 蛋白可以和MMP-9 相互作用
4.2.3 登革病毒NS1 蛋白通过激活NF-κB信号通路来促进MMP-9 的分泌
4.2.4 登革病毒NS1 蛋白通过招募MMP-9 蛋白来诱导内皮细胞通透性改变
4.2.5 登革病毒NS1 蛋白通过招募MMP-9 蛋白来破坏内皮细胞间的交联
4.2.6 登革病毒NS1 蛋白促进MMP-9 和交联分子的相互作用
4.2.7 MMP-9 蛋白在NS1 诱导小鼠血管渗漏过程中发挥重要作用
4.3 本章小结和讨论
参考文献
博士期间发表和待发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]Dengue in China: not a passing problem[J]. QIN Cheng Feng,SHI Pei Yong. Science China（Life Sciences）. 2014(12)
[2]19782014年我国登革热的流行病学分析[J]. 熊益权,陈清. 南方医科大学学报. 2014(12)
[3]中国登革热的流行现状[J]. 毛祥华,张再兴. 中国病原生物学杂志. 2007(05)
本文编号：3174779
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3174779.html
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