Imjin和SFTS病毒感染正常人和肾综合征出血热临床诊断病人的研究

发布时间：2021-05-09 14:33

　　Imjin20virus（MJNV）是一种感染鼩鼱的新型汉坦病毒,于2009年首次在韩国发现。MJNV是否感染人在本研究之前尚不明确。2017年,MJNV在我国山东青岛地区的鼩鼱中也被检测到,且阳性率高达10%。在MJNV之前,该地区报道的流行的汉坦病毒有汉滩（HNTV）和汉城（SEOV）两种,这两种病毒都能感染人且引起肾综合征出血热（HFRS）。本研究旨在通过检测健康人和HFRS病人血清中MJNV的特异性抗体以验证MJNV是否感染人及是否引起HFRS。该研究在原核系统中克隆表达了MJNV的核衣壳蛋白（NP）的部分片段,通过建立双抗原夹心酶联免疫吸附实验（ELISA）、IgM捕获法ELISA和斑点印迹法（Dot20blot）来检测人血清中的抗体。目标人群是HFRS病人和鼩鼱中MJNV流行地区的健康人群。病人血清标本来自山东省淄博市和青岛市临床诊断的急性期HFRS病人。健康人血清来自青岛MJNV流行地区的易感人群。本研究总共收集了227份病人血清和385份疫区健康人血清。因为该疫区已知的引起HFRS的病毒为汉滩和汉城病毒,因此,收集的227份HFRS病人血清首先检测了汉滩或汉城抗体,其中... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：115 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
论文创新点
中文摘要
ABSTRACT
引言
    1.汉坦病毒概述
    2.Imjin virus概述
    3.中国肾综合征出血热及Imjin virus流行情况
    4.发热伴血小板减少综合征概述
    5.研究地区发热伴血小板减少综合征流行情况
    6.研究目的和意义
第一章 鼩鼱汉坦病毒Imjin virus可以感染人的研究
    一、材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 蛋白表达材料
            1.1.2 蛋白纯化材料
            1.1.3 小鼠免疫材料
            1.1.4 ELISA材料
            1.1.5 斑点印迹材料
            1.1.6 核酸检测材料
            1.1.7 主要实验仪器
        1.2 研究人群
            1.2.1 肾综合征出血热病人
            1.2.2 疫区健康人群
        1.3 抗体检测
            1.3.1 抗原预测
            1.3.2 抗原表达载体的构建
            1.3.3 抗原表达质粒的转化与克隆
            1.3.4 抗原蛋白的试表达
            1.3.5 抗原蛋白的大量表达
            1.3.6 抗原蛋白的提取与纯化
            1.3.7 MJNV NP全长蛋白的表达
            1.3.8 小鼠免疫
            1.3.9 酶联免疫吸附实验(ELISA)
        1.4 核酸检测
        1.5 伦理学声明
    二、结果
        2.1 MJNV NP抗原片段筛选
        2.2 NP N端蛋白的表达及纯化
            2.2.1 MJNV NP小片段及全长的载体构建
            2.2.2 MJNV NP小片段及全长的表达
            2.2.3 MJNV NP小片段的纯化
        2.3 NP N端蛋白的有效性
        2.4 酶联免疫吸附实验的建立及工作条件
        2.5 实验方法的特异度及交叉反应
            2.5.1 特异度
            2.5.2 交叉性
        2.6 人群抗体流行情况
            2.6.1 Imjin virus总抗体
            2.6.2 IgM检测
        2.7 RT-PCR
    三、讨论
        3.1 实验设计策略讨论
        3.2 感染发生的可能原因
        3.3 NP片段的选择
        3.4 MJNV致病的可能性
        3.5 不足之处
    四、本章小结
第二章 临床诊断肾综合症出血热中发热伴血小板减少综合症的研究
    一、材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 研究人群
        1.3 临床诊断HFRS中汉坦病毒Ig M抗体的检测
        1.4 临床诊断HFRS中 SFTSV IgM抗体的检测
        1.5 HFRS与 SFTS症状分析
        1.6 伦理学声明
    二、结果
        2.1 临床诊断HFRS病例的特征
        2.2 HFRS中的SFTS病例
        2.3 HFRS与 SFTS的临床症状比较(本研究数据)
        2.4 HFRS与 SFTS的临床症状比较(文献数据)
    三、讨论
        3.1 流行病学暴露史对诊断的讨论
        3.2 研究结果的公共卫生意义
        3.3 本研究检测方法的表现
        3.4 样本量问题的解决
        3.5 不足之处
    四、本章小结
总结
参考文献
附录 、附图
攻读博士期间已发表的科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]Current20status20of20severe20fever20with20thrombocytopenia20syndrome20in20China[J]. Jianbo Zhan,Qin Wang,Jing Cheng,Bing Hu,Jing Li,Faxian Zhan,Yi Song,Deyin Guo.  Virologica Sinica. 2017(01)



本文编号：3177476