LncRNA-GAS5调控胶质瘤恶性生物学行为的作用和机制研究

发布时间：2021-05-10 22:42

　　胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤,侵袭能力极强,具有发病率高、复发率高、病死率高和治愈率低“三高一低”的特点,且预后很差,术后中位生存时间仅14.6个月。目前,新的药物及治疗手段的发展并未能被证明可显著延长患者的生存时间。因此,寻找新的治疗靶点和策略是改善胶质瘤患者预后的重要思路。在此临床治疗现状下,本研究拟通过探索新的对胶质瘤恶性行为学具有重要调控作用的分子,并通过离体及在体实验的方法证明其对胶质瘤细胞恶性行为学调控的具体作用,且进一步对其调控胶质瘤恶性行为学的可能机制进行初步的探索,为寻找新的胶质瘤治疗的潜在靶点打下基础。本研究通过四个部分的实验对长链非编码RNA（Long noncoding RNAs,LncRNAs）LncRNA-GAS5参与对胶质瘤恶性行为学的调控作用及可能机制进行了证明和阐述:包括收集临床肿瘤标本,检测其中GAS5的表达,并与临床及预后资料进行Cox回归分析及生存分析以明确GAS5与胶质瘤患者临床预后的相关性;在不同的胶质瘤细胞系中过表达GAS5,使用CCK-8、流式细胞、划痕实验、Transwell迁移实验等方法检测细胞的增殖、凋亡和迁移;进行原代胶质瘤干细胞... 

【文章来源】：西北大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：116 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语对照表
第一章 绪论
    1.1 胶质瘤的临床特点
        1.1.1 胶质瘤的流行病学特征
        1.1.2 胶质瘤的病理分型
        1.1.3 胶质瘤的分子分类及其临床意义
        1.1.4 胶质瘤的治疗现状和发展方向
    1.2 胶质瘤干细胞
        1.2.1 GSCs的来源
        1.2.2 GSCs的分子标记
        1.2.3 GSCs与胶质瘤的行为
    1.3 长链非编码RNA与胶质瘤
        1.3.1 LncRNA的分类
        1.3.2 LncRNAs的功能
        1.3.3 LncRNAs与肿瘤
        1.3.4 LncRNAs与胶质瘤
        1.3.5 LncRNA-GAS5 在肿瘤中的作用
        1.3.6 LncRNA-GAS5 与胶质母细胞瘤的预后密切相关
第二章 LncRNA-GAS5与GBM恶性程度及预后相关性分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 临床样本及数据来源
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 临床标本的收集及处理
        2.2.2 病例资料的来源
        2.2.3 RNA的提取、纯度检测、定量及完整性检测
        2.2.4 反转录PCR
        2.2.5 实时荧光定量PCR
        2.2.6 统计方法
    2.3 实验结果
        2.3.1 LncRNA-GAS5 在高病理级别胶质瘤中的表达较低级别胶质瘤显著下降
        2.3.2 LncRNA-GAS5 的表达与患者术后生存时间显著相关
        2.3.3 LncRNA-GAS5 的表达及胶质瘤的病理分级是胶质瘤预后的相关危险因素
    2.4 讨论
第三章 LncRNA-GAS5 对胶质瘤恶性表型的调控作用研究
    3.1 实验材料
        3.1.1 所用细胞及脑组织
        3.1.2 所用主要试剂
        3.1.3 所用主要仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 胶质瘤细胞的培养
        3.2.2 提取胶质瘤细胞及胶质瘤或正常脑组织的RNA
        3.2.3 反转录PCR
        3.2.4 实时荧光定量扩增PCR
        3.2.5 LncRNA-GAS5 过表达慢病毒载体的构建及细胞感染
        3.2.6 肿瘤细胞增殖及凋亡的检测
        3.2.7 肿瘤细胞迁移能力的检测
        3.2.8 统计分析
    3.3 实验结果
        3.3.1 GAS5 在胶质瘤细胞中的表达显著降低,不同胶质瘤细胞系间其表达水平不同
        3.3.2 GAS5 过表达病毒可有效感染U87、SHG-44、A172 胶质瘤细胞系
        3.3.3 LncRNA-GAS5 过表达可显著抑制胶质瘤细胞的增殖能力
        3.3.4 LncRNA-GAS5 过表达可诱导胶质瘤细胞的凋亡
        3.3.5 过表达LncRNA-GAS5 可显著抑制胶质瘤细胞的迁移能力
        3.3.6 Transwell实验再次证实过表达GAS5 可显著抑制胶质瘤细胞的迁移能力
    3.4 讨论
第四章 LncRNA-GAS5 在胶质瘤干细胞中的表达及作用
    4.1 实验材料
        4.1.1 主要实验试剂
        4.1.2 主要实验设备
    4.2 实验方法
        4.2.1 原代胶质瘤干细胞的培养及鉴定
        4.2.2 LncRNA-GAS5 过表达病毒感染胶质瘤干细胞实验
        4.2.3 实时荧光定量PCR检测干细胞标志物的表达
        4.2.4 克隆球形成实验
        4.2.5 胶质瘤干细胞的诱导分化培养
        4.2.6 CCK-8 检测细胞增殖实验
        4.2.7 Edu细胞增殖检测
        4.2.8 统计方法
    4.3 实验结果
        4.3.1 胶质瘤干细胞的成功分离及鉴定
        4.3.2 GAS5 过表达病毒可有效感染胶质瘤干细胞,过表达GAS5 可降低干细胞标记物的表达
        4.3.3 过表达LncRNA-GAS5 后可抑制胶质瘤干细胞的增殖能力
    4.4 讨论
第五章 GAS5 对胶质瘤恶性增殖调控的分子机制研究
    5.1 实验材料
        5.1.1 主要成品试剂
        5.1.2 主要实验设备
        5.1.3 PCR引物
    5.2 实验方法
        5.2.1 RAP实验
        5.2.2 报告基因
        5.2.3 Westernblot
        5.2.4 裸鼠皮下成瘤实验
        5.2.5 荧光实时定量PCR(同前)
    5.3 实验结果
        5.3.1 RAP实验发现GAS5 通过与SPACA6 相结合,保护SPACA6 不被降解
        5.3.2 SPACA6、Let-7e、miR-125a在胶质瘤及胶质瘤干细胞中表达低于正常胶质细胞
        5.3.3 Let-7e/miR-125a可抑制胶质瘤的增殖及迁移能力
        5.3.4 靶基因预测Let-7e、miR-125a可能通过共同下游分子机制IL-6/IL-6R发挥抑癌基因的作用
        5.3.5 Let-7e可同时抑制IL-6和IL-6R的表达,miR-125a可抑制IL-6R的表达
        5.3.6 报告基因证实Let-7e对 IL-6 以及Let-7e和 miR-125a对其共同下游靶基因IL-6R的表达的调控作用
        5.3.7 表型挽救实验证明GAS5 通过Let-7e、miR-125 发挥其抑制胶质瘤的作用
        5.3.8 IL-6/IL-6R/STAT3 通路参与了GAS5 作为抑癌基因的分子机制
    5.4 讨论
结论与展望
参考文献
致谢
攻读博士学位期间取得的科研成果
作者简介



本文编号：3180191