流感病毒干扰素敏感突变的系统性筛选及溶瘤病毒的应用探索

发布时间：2021-05-11 13:28

　　研究背景与目的肿瘤的免疫治疗是近几年的研究热点。通过重新激活机体的抗肿瘤免疫,识别并杀伤肿瘤细胞,极大提高了部分病人的长期生存率。溶瘤病毒作为免疫治疗的一种方式,也受到众多关注。溶瘤病毒具有杀伤肿瘤细胞与激活免疫的双重作用,具有不可比拟的优势。但在大规模临床应用之前,其安全性与有效性仍有待进一步提高。在此研究中,我们提出了一种设计新型溶瘤病毒的思路:在不影响病毒复制能力的前提下,选择性突变病毒基因组内行使免疫抑制功能的核酸。这种设计将使病毒丧失抑制细胞免疫激活的能力,以达到同时增强溶瘤病毒的靶向性和有效性的目的。在此,我们集中关注了干扰素系统。干扰素系统不仅是固有免疫的重要组成,更是桥接固有免疫与适应性免疫的桥梁。肿瘤局部的干扰素表达可有效促进抗肿瘤免疫的激活。因此,我们希望开发一种新型的溶瘤病毒,可在体内安全使用,选择性靶向肿瘤组织,并有效的激活肿瘤微环境内干扰素的上调。研究方法与结果为系统性评估病毒中免疫抑制的位点,我们首创了一种结合高通量方法学、正向遗传学与反向遗传学的系统生物学方法,可同步研究所有病毒基因组中所有单核苷酸突变的表型。以流感病毒为例,我们构建了覆盖甲型流感病毒全基... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：116 页

【学位级别】：博士

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致谢
中文摘要
Abstract
中英文缩略词
引言
第一部分 全流感基因组突变文库的建立与抗干扰素位点的筛选
    1.1 材料和方法
        1.1.1 病毒和细胞系
        1.1.2 材料和试剂
        1.1.3 培养基及试剂的配制
        1.1.4 实验方法
    1.2 结果
        1.2.1 构建覆盖流感全基因组的单核苷酸突变体文库
        1.2.2 干扰素敏感位点的系统性筛选
        1.2.3 干扰素敏感位点的系统性验证
    1.3 讨论
第二部分 高干扰素敏感的多点突变病毒株(HIS)的构建及体内体外的功能验证
    2.1 材料和方法
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 材料和试剂
        2.1.3 培养基及试剂的配制
        2.1.4 实验动物
        2.1.5 实验方法
    2.2 结果
        2.2.1 HIS突变株可诱导上调干扰素通路
        2.2.2 HIS突变株在小鼠体内的表型
        2.2.3 HIS突变株可诱导强烈的抗病毒T细胞反应
    2.3 讨论
第三部分 HIS可有效抑制体内黑色素瘤的增殖
    3.1 材料和方法
        3.1.1 细胞系
        3.1.2 材料和试剂
        3.1.3 培养基及试剂的配制
        3.1.4 实验动物
        3.1.5 实验方法
    3.2 结果
        3.2.1 HIS可在黑色素细胞内复制并诱导细胞死亡
        3.2.2 HIS可在黑色素细胞内上调干扰素系统
        3.2.3 HIS抑制小鼠内黑素瘤成瘤的增殖
    3.3 讨论
全文总结
参考文献
综述
    参考文献
作者简历及在学期间所取得的科研成果



本文编号：3181485