UNC93B1调控cGAS-STING信号通路的机制的研究

发布时间：2021-05-15 07:55

　　天然免疫系统是宿主用来抵抗微生物、毒素、过敏原及损伤信号的一种防御系统,主要通过辨别“自我”-“非我”来实现。在天然免疫系统作用模式的分子水平上,模式识别受体（PRR）作为天然免疫受体最先接触上述这些危险信号,并可通过诱导各种炎性细胞因子,趋化因子和干扰素来启动一系列宿主防御体系。双链DNA（dsDNA）主要作为许多生物体中的遗传密码而存在,因而对宿主和许多入侵的微生物都至关重要,也正因如此,dsDNA的暴露通常指向危险信号。但由于dsDNA结构复杂度低且在环境中几乎无所不在,生物体便进化出了对自身dsDNA的区室化,典型的有真核生物中的细胞核和线粒体,以规避这“自我”的成分被宿主自身的免疫监察锁定为“非我”。胞质内的dsDNA可以被多个蛋白识别,但多细胞生物中最主要的可以识别dsDNA的PRR当属“环状鸟苷单磷酸-腺苷单磷酸合成酶”（cGAS,又名MB21D1）。cGAS在识别dsDNA后催化生成“环状鸟苷单磷酸-腺苷单磷酸”（cGAMP）,后者则激活STING-TBK1-IRF3通路而诱导干扰素的表达（STING:“干扰素基因诱导因子”,又名STING1,TMEM173,MITA,... 

【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院上海巴斯德研究所)上海市

【文章页数】：79 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 天然免疫系统
    1.2 模式识别受体
    1.3 识别细胞内DNA的受体
    1.4 cGAS-STING通路的调控
    1.5 UNC93B1 与核酸识别型TLR
    1.6 自噬
    1.7 本研究的目的
第2章 材料与方法
    2.1 试剂与抗体
    2.2 引物及其它寡核苷酸
    2.3 细胞培养
    2.4 质粒构建
    2.5 转染
    2.6 慢病毒包装和感染
    2.7 以shRNA来实行的RNA干扰
    2.8 以CRISPR/Cas9 来实行的基因敲除
    2.9 细胞单克隆的分离
    2.10 流式细胞术
    2.11 RNA抽提和逆转录-定量PCR
    2.12 SDS-PAGE和免疫印迹
    2.13 免疫共沉淀
    2.14 免疫荧光和激光共聚焦成像
    2.15 数据及统计
    2.16 其它
第3章 结果
    3.1 UNC93B1 表达缺陷可增强由胞质内双链DNA引起的天然免疫反应
    3.2 UNC93B1 表达缺陷所造成的天然免疫反应的增强有赖于STING
    3.3 UNC93B1与STING在内质网及溶酶体上有相互作用
    3.4 UNC93B1 不影响STING出内质网的过程
    3.5 UNC93B1 可影响STING蛋白的表达水平
    3.6 UNC93B1 影响了STING通过自噬体-溶酶体进行的降解
第4章 讨论
    4.1 STING的降解
    4.2 UNC93B1 的生物学功能
    4.3 总结与展望
参考文献
致谢
作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果
文献综述
    参考文献



本文编号：3187262