PARP抑制剂与土木香内酯所致DNA氧化损伤在肿瘤细胞中形成的合成致死作用研究

发布时间：2021-05-19 12:43

　　近年来,DNA损伤反应（DNA damage response,DDR）和DNA修复机制已成为开发癌症治疗新方法的热门靶点。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（poly[ADP-ribose]polymerase,PARP）家族成员PARP1和PARP2是重要的DNA损伤分子感受器。活化的PARP1/2催化ADP-核糖（ADP-ribose）单元从烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD⁺）转移至受体蛋白,进而启动DNA单链断裂（single-strand break,SSB）的修复,并调控DNA双链断裂（double-strand break,DSB）的修复以及DNA复制叉（replication fork）的稳定和重启。因此,PARP1/2在维持基因组稳定性以及细胞正常生命活动中起着非常重要的作用。PARP抑制剂是第一种成功利用“合成致死”（synthetic lethality）概念获得批准在临床使用的抗癌药物。临床数据表明PARP抑制剂对存在同源重组介导的修复（homologous recombination-directed repair,HDR）功能缺陷的肿瘤（如BRCA1或... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：119 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩写对照表
第一章 前言
    1.1 肿瘤与治疗
        1.1.1 肿瘤简介
        1.1.2 肿瘤治疗
    1.2 DNA损伤应答
    1.3 DNA损伤与修复
    1.4 DDR与合成致死
    1.5 PARP生物学作用
        1.5.1 PARP参与DNA单链断裂损伤修复
    1.6 PARP抑制剂合成致死作用机理
        1.6.1 PARP抑制剂靶向BRCAness癌细胞的合成致死作用
        1.6.2 PARP抑制剂作为化疗药物的增敏剂
        1.6.3 PARP-DNA复合物的捕获(PARP Trapping)机制
    1.7 PAPR抑制剂研究进展
    1.8 PARP抑制剂展望
    1.9 土木香内酯
    1.10 本文研究内容及意义
        1.10.1 研究意义
        1.10.2 研究内容
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株与载体
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器与耗材
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 细胞支原体检测
        2.2.3 基因Knock down载体构建
        2.2.4 基因编辑细胞系的筛选
        2.2.5 蛋白免疫印迹
        2.2.6 细胞增殖检测
        2.2.7 药物联合指数CI值计算
        2.2.8 细胞免疫荧光染色
        2.2.9 细胞复制与损伤检测
        2.2.10 彗星电泳实验
        2.2.11 细胞内活性氧检测
        2.2.12 同源重组功能检测
        2.2.13 细胞凋亡检测
        2.2.14 细胞周期检测
        2.2.15 肿瘤异移植实验
        2.2.16 免疫组织化学染色
        2.2.17 HE染色
    2.3 溶液与试剂配制
第三章 实验结果
    3.1 土木香内酯特异性地在癌细胞中引起DNA氧化损伤并激活PARP
        3.1.1 木香内酯引起肿瘤细胞中ROS迅速上调
        3.1.2 土木香内酯引起DNA氧化损伤和DNA断裂
        3.1.3 土木香内酯激活癌细胞中的PARP
    3.2 土木香内酯和奥拉帕尼在癌细胞中具有合成致死作用
        3.2.1 土木香内酯联合奥拉帕尼特异性抑制癌细胞的克隆存活
        3.2.2 土木香内酯与奥拉帕尼在癌细胞中具有合成致死作用
        3.2.3 土木香内酯未引起同源重组功能异常
    3.3 DNA氧化损伤修复和PARP捕获是合成致死作用的主要机制
        3.3.1 ROS引起的DNA氧化损伤是合成致死作用的关键因素
        3.3.2 OGG1 介导的BER是 ATL与奥拉帕尼产生协同细胞毒性的基础
        3.3.3 PARP捕获是ATL与奥拉帕尼合成致死作用的主要机制
    3.4 被捕获的DNA-PARP复合物引起强烈的复制压力和DSB
        3.4.1 土木香内酯与奥拉帕尼联合引起DNA复制压力
        3.4.2 土木香内酯与奥拉帕尼联合激活DDR
        3.4.3 土木香内酯与奥拉帕尼联合引起DNA复制阻滞
        3.4.4 土木香内酯与奥拉帕尼联合在癌细胞中产生DSB
    3.5 DDR的激活导致G2 期阻滞进而触发细胞凋亡
        3.5.1 土木香内酯和奥拉帕尼引起S和 G2/M期阻滞
        3.5.2 土木香内酯和奥拉帕尼联合诱发细胞凋亡
    3.6 ATL和奥拉帕尼联合用药抑制体内肿瘤生长
第四章 讨论与结论
    4.1 讨论
    4.2 结论
参考文献
作者简介及科研成果
致谢



本文编号：3195791