血小板膜糖蛋白去唾液酸化效应与ITP一线治疗疗效关系的研究

发布时间：2017-04-24 05:10

  本文关键词：血小板膜糖蛋白去唾液酸化效应与ITP一线治疗疗效关系的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景原发免疫性血小板减少症(ITP)是一种临床常见的出血性疾病,目前对难治性ITP的发病机制尚未明确,且无有效的治疗方法。。ITP虽不是血液系统恶性疾病,但对于反复出现血小板重度减低,疗效不佳的患者来说,生存质量极差,而且死亡风险也是极大的。ITP病理生理机制是多方面的,至今仍未完全明晰,目前得到公认的是,绝大多数的ITP的产生都是由体液免疫和细胞免疫共同介导的血小板破坏。ITP的一线治疗药物有糖皮质激素和静脉注射免疫球蛋白(IVIG),其产生治疗作用的主要机理包括抑制自身抗体的产生,封闭Fc受体的信号传导通路,抑制巨噬细胞的吞噬功能,促进巨核细胞产生血小板等,最终达到提升患者的血小板计数水平。近年不同的研究组均发现,对于抗GPⅡb/Ⅲa抗体介导的ITP,应用糖皮质激素和IVIG的一线治疗效果尚可,但是,若患者体内存在抗GPⅠb-Ⅴ-Ⅸ复合物抗体,治疗上给予上述一线治疗效果往往较差。在目前较为明确的血小板清除的Fc受体依赖途径外,是否存在其他的途径导致血小板的清除呢?最新的体外及体内的实验研究确认了是存在非FcR依赖的血小板清除途径的。血小板膜上的糖蛋白在神经氨酸酶作用下去唾液酸化而暴露乙酰葡糖胺及半乳糖等残基,这些去唾液酸化后的血小板通过表面血管性血友病因子(VWF)受体复合物的聚集,改变了信号传导,并结合到肝脏枯否氏细胞的MAC-1受体或肝细胞的去唾液酸糖蛋白受体(Ashwell-Morell受体),在肝脏枯否细胞和肝细胞内清除,这不同于以往的血小板在脾脏清除的过程。然而在ITP患者体内血小板的变化如何,是否也存在这种非Fc受体依赖的血小板清除途径,导致一部分ITP患者应用常规的一线治疗效果不佳,目前尚未得到证实。研究目的本课题旨在研究：(1)比较ITP患者血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化标记物鸡冠刺桐凝集素(ECL)、蓖麻凝集素(RCA-1)的结合水平与正常人的差异,分析ITP患者血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化的状况；(2)血小板膜表面膜表面糖蛋白去唾液酸化效应与ITP一线治疗疗效关系,间接为血小板清除的非Fc受体依赖途径的存在提供依据,以利于进一步探索有效的治疗方法；(3)研究抗GPIba抗体与ITP患者血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化相关性；(4)ITP与其他疾病对照组的血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化水平的比较,探讨在不同疾病中,去唾液酸化致血小板减少的发病机制存在的可能性。研究方法1.自2013年3月至2015年1月收集安徽医科大学第二附属医院住院ITP患者作为研究对象,并以伴血小板减少的初诊风湿免疫系统疾病、骨髓增生异常综合征(MDS)、再生障碍性贫血(AA)和急性髓系白血病(AML)患者作为其他疾病对照组,安徽医科大学第二附属医院体检中心20例健康成年人作为正常对照组。2.流式细胞术(FCM)分析我们通过流式细胞仪检测血小板表面ECL及RCA-1标记的情况确定其膜表面糖蛋白去唾液酸化水平,ITP患者、其他疾病对照组及正常对照组的血小板分别与ECL和RCA-1孵育后上机检测,测得ECL及RCA-1结合百分比为去唾液酸化水平。3.改良单克隆抗体特异性俘获血小板抗原法(MAIPA)分析检测ITP患者主要抗体类型,包括抗GPⅡbⅢa及GPⅠba特异性自身抗体,对ITP患者进行分类选择。4.患者治疗方法：61例ITP患者主要接受一线治疗：首先地塞米松,剂量为40mg/d,3～5 d,不联合或联合大剂量静脉丙种球蛋白,剂量为0.4 g·kg·1-d-1,3～5d,后改为口服泼尼松,剂量为1mg·kg-1·d-1,并据疗效逐步减量,维持治疗一个月以上,期间监测血常规,观察疗效。疗效的具体判断标准为：①完全反应(CR)：治疗后血小板数_100x109/L且没有出血；②有效(R)：治疗后血小板数≥30×109/L,并且至少比基础血小板数增加两倍,且没有出血；③无效(NR)：治疗后血小板数30x109/L或者血小板数增加不到基础值的两倍或者有出血。按疗效对患者分成CR、R、NR三组。研究结果1.正常人与ITP患者这两组在性别、年龄上的差异无统计学意义(性别：χ2=2.796,P=0.094；年龄：t=-0.352,P=0.726),但两组血小板计数的差异有显著的统计学意义,t=21.914,P0.001,ITP患者的血小板水平是明显减低的。2.正常人及ITP患者血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化水平(ECL, RCA-1)的差异有着显著的统计学意义(P0.001),ITP患者血小板的膜表面糖蛋白去唾液酸化水平是明显增高的。3.61例ITP患者按疗效分成CR、R、NR三组,运用Kruskal-Wallis秩和检验方法分析,上述三组ECL、RCA-1水平的比较,差异具有显著的统计学意义,P0.01。血小板去唾液酸化水平与ITP一线治疗疗效的spearman相关系数分析提示二者是相关的,ECL (r=0.391, P=0.002), RCA-1 (r=0.395, P=0.002),提示去唾液酸化的指标越高,疗效越差。4.因标本留置问题,本实验中的61例ITP患者中仅29例患者进行了改良MAIPA方法检测,对这29例ITP患者按照抗GPⅠbα抗体阳性组、抗GPⅡb /Ⅲa抗体单阳性组及双抗体阴性组分为3组,运用Kruskal-Wallis秩和检验方法分析,各组ECL及RCA-1的差异无统计学意义,P0.05。5.其他疾病对照组患者血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化水平分析：风湿免疫系统疾病、MDS、AA和AML其他疾病对照组的血小板膜表面糖蛋白去唾液酸化水平与正常对照组比较均有不同程度的升高(P0.05),而AML组的去唾液酸化水平与正常对照组比较无显著差异(P0.05)。包括ITP在内的五个疾病组之间去唾液酸化水平存在差异(P0.05)。其中ITP、风湿病及MDS去唾液酸化水平均较高。结论1.ITP患者血小板膜糖蛋白去唾液酸化水平较正常人明显升高；2.ITP患者血小板膜糖蛋白去唾液酸化水平与一线治疗疗效相关,随着ITP患者血小板膜糖蛋白去唾液酸化水平的提高,患者的一线治疗疗效越差,肝脏内的血小板破坏在ITP的发病机制中占有重要地位,支持了ITP患者血小板清除的非Fc受体依赖途径,利于对患者病情的判断,治疗方案的考虑选择,为应用神经氨酸酶抑制剂治疗ITP的提供了可能性；3.由于进行抗GPⅠbα抗体与ITP患者血小板膜糖蛋白去唾液酸化相关性分析的病例数较少,各抗体分组的ITP患者去唾液酸化水平无差异,但是在两组去唾液酸化水平的统计图上可以看到存在抗GPⅠbα抗体组的去唾液酸化水平有略高的趋势,由于这组数据较少,抗GPⅠbα抗体与去唾液酸化水平以及最终一线治疗疗效的关系有待后续扩大样本量进行研究。4.风湿病组、MDS组、AA组的血小板膜糖蛋白去唾液酸化水平与正常对照组比较均有不同程度的升高,而AML组的去唾液酸化水平与正常对照组比较无显著差异。ITP组的去唾液酸化水平与其他疾病对照组中的风湿病组、MDS组及AA组的去唾液酸化水平相当,与AL组比较存在差异,需要考虑风湿病、MDS及AA这三组疾病在血小板减少的发病机制中的相似性,可能都存在去唾液酸化作用导致的血小板破坏清除过程。
【关键词】：免疫性血小板减少症 糖蛋白 Ibα 去唾液酸化 自身抗体
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R558.2
【目录】：

• 英文缩略词表6-9
• 中文摘要9-13
• ABSTRACT13-20
• 1 引言20-34
• 1.1 原发免疫性血小板减少症(ITP)概述20-24
• 1.1.1 ITP简介20-22
• 1.1.2 ITP发病机制22-24
• 1.2 血小板膜糖蛋白(GP)概述24-29
• 1.2.1 GP简介24-25
• 1.2.2 血小板膜GP的结构、种类和分布25-28
• 1.2.3 血小板膜GP与ITP28-29
• 1.3 抗血小板膜GP抗体概述29-31
• 1.3.1 抗血小板膜GP抗体种类30
• 1.3.2 抗血小板膜GP抗体和ITP30-31
• 1.4 神经氨酸酶(NEU)概述31-33
• 1.4.1 NEU132
• 1.4.2 NEU1与ITP32-33
• 1.5 本研究的立项与意义33-34
• 2 材料与方法34-42
• 2.1 主要仪器和设备34
• 2.2 主要试剂及耗材34-35
• 2.3 研究对象的选择及分组35-37
• 2.4 实验方法及步骤37-40
• 2.4.1 标本采集37
• 2.4.2 流式细胞术(FCM)分析37-39
• 2.4.3 改良单克隆抗体特异性俘获血小板抗原法(MAIPA)分析39-40
• 2.5 统计学处理40-42
• 3 结果42-51
• 4 讨论51-63
• 5 结论63-65
• 6 参考文献65-76
• 7 附录76-78
• 致谢78-79
• 综述79-85
• 参考文献83-85

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 秦振庭,盛光耀;ITP(特发性血小板减少性紫癜)临床研究的倾向[J];中国小儿血液;2000年05期

2 吴振军,许雷,李蓓;治疗特发性血小板减少性紫癜(ITP)的方法探讨[J];青岛医药卫生;2000年06期

3 王祥财;刘礼平;刘海荣;许明君;李海亮;黄莉;万通;李树芳;;部分脾动脉栓塞术在ITP中的应用(附26例报告)[J];赣南医学院学报;2007年04期

4 罗贞;;药物联合治疗特发性血小板减少性紫癜(ITP)的临床观察[J];吉林医学;2011年21期

5 周家琴,弓开科,谢光潞,金敏琦;健康人和特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者血小板寿命的测定[J];科学通报;1987年03期

6 ;特发性血小板减少性紫癜（ITP）诊断标准[J];临床误诊误治;1995年04期

7 童浩,张雅贞;ITP转化为周期性血小板减少性紫癜一例[J];临床血液学杂志;1997年04期

8 张源慧;;原发性血小板减少性紫癜(ITP)血小板中度减少者的血小板动力学[J];国外医学.输血及血液学分册;1986年02期

9 张志梅;188例特发性血小板减少性紫癜(ITP)的常规血清学分析[J];国外医学.输血及血液学分册;2000年05期

10 李雁恩,陈丽蓉,王晓宏;脾部分栓塞治疗小儿难治性ITP[J];中国小儿血液;1999年06期

中国重要会议论文全文数据库 前9条

1 王兆钺;;非ITP性血小板减少性紫癜[A];中华医学会血液学分会第十三届全国血栓与止血学术会议暨“血栓栓塞性疾病（血栓与止血）基础与临床研究进展”论文摘要汇编及学习班讲义[C];2011年

2 许惠利;王萍;赵兰;;脾切除治疗难治性ITP的疗效观察[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年

3 褚雨霆;张雅月;侯丽;马薇;陈信义;;免疫性血小板减少性紫癜的免疫学发病机制研究[A];中华中医药学会第二届岐黄论坛——血液病中医药防治分论坛论文集[C];2014年

4 郜玉太;秦国祥;郎晓霞;杨继翔;;大剂量地塞米松短程冲击治疗初诊ITP的疗效观察[A];第十一届山西省血液病学术年会暨国家级及山西省继续医学教育学习班资料汇编[C];2010年

5 车艳丽;徐瑞荣;;三粉治疗ITP[A];全国中西医结合血液学学术会议论文汇编[C];2010年

6 王晓红;;大剂量地塞米松治疗ITP的观察及护理[A];全国内科护理学术交流暨专题讲座会议、全国心脏内、外科专科护理学术会议论文汇编[C];2007年

7 程艳娜;;4例LS治疗ITP护理体会[A];河南省外科创伤及灾难救治护理专科知识学术会议（外科护理学组）论文集[C];2011年

8 许勇钢;杨晓红;王馨婷;王洪志;麻柔;;金薯叶止血合剂治疗ITP药效学研究(摘要)[A];第七届全国中西医结合血液病学术会议论文集[C];2004年

9 白艳艳;王兆钺;白霞;赵益明;董宁征;阮长耿;;一种检测幽门螺杆菌感染的新方法在ITP诊疗中的应用[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 淄博市红十字会血液病医院医师 仇毅;中西医结合治疗ITP的优势[N];淄博日报;2008年

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 陶莉莉;血小板膜糖蛋白去唾液酸化效应与ITP一线治疗疗效关系的研究[D];安徽医科大学;2015年

2 奚亚军;叶片衰老抑制基因P_（SAG12）-ITP转化小麦的研究[D];西北农林科技大学;2002年

3 崔中光;大剂量地塞米松优化方案治疗ITP及双靶点联合干预的探索[D];山东大学;2014年

4 代喜平;凉血清热升板方配合糖皮质激素治疗血热型ITP及ITP调节性T细胞研究[D];广州中医药大学;2014年

中国硕士学位论文全文数据库 前7条

1 姚冬;新西兰ITP理工学院研究[D];中央民族大学;2007年

2 王灵洁;前瞻性随机对照地塞米松和泼尼松治疗成人新诊断ITP多中心临床研究[D];山东大学;2014年

3 王重阳;两种剂量丙种球蛋白联合甲泼尼龙治疗重症ITP的临床研究[D];延安大学;2014年

4 王雅军;血浆可溶性选择素在儿童ITP中的作用研究[D];郑州大学;2007年

5 葛金丽;大剂量地塞米松冲击治疗原发免疫性血小板减少症（ITP）疗效的回顾性分析[D];遵义医学院;2014年

6 杨水个;大剂量地塞米松冲击治疗初诊成人ITP的疗效和安全性观察[D];济南大学;2013年

7 翟慢慢;儿童新诊断的ITP血小板凋亡与Hp感染的关系[D];郑州大学;2013年

  本文关键词：血小板膜糖蛋白去唾液酸化效应与ITP一线治疗疗效关系的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：323632