STIM2通过NFAT1/TGF-β1通路促进乳腺癌细胞EMT过程进而增强乳腺癌细胞的转移能力

发布时间：2024-07-07 04:50

　　Stromal interaction molecule(STIM)1 和 STIM2 分子是一种位于内质网膜上的钙离子感受分子,其主要作用在内质网中钙离子清空后,通过SOCE(Store-operated Ca2+entry)等手段,介导胞外钙离子内流,从而调整和维持细胞内部的钙离子稳态。而钙离子作为细胞内重要的二级信使,参与了众多的生命活动,其中包括了肿瘤的发生发展过程。这一点提示了 STIM1和STIM2对于钙离子的调控作用可能与肿瘤转移有关。揭示STIM1和STIM2与肿瘤细胞转移能力之间的关系,有利于深入了解肿瘤细胞转移的调控机制,为临床治疗提供潜在治疗靶点,从而促进肿瘤治疗,改善病人预后。本研究采用组织芯片、慢病毒、IPA分析、PCR、免疫荧光和细胞内动态钙离子浓度检测等手段,研究在正常乳腺组织以及不同类型乳腺癌组织中STIM1和STIM2分子的表达丰度,以及改变STIM2蛋白的表达丰度后,对乳腺癌细胞EMT过程的影响。研究发现:乳腺癌组织中STIM1和STIM2分子的表达丰度均高于正常乳腺组织,提示二者能够促进乳腺癌的转移。不同的是,改变STIM2在乳腺癌细胞中的表达丰度...

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1. 前言
    1.1. EMT在肿瘤转移中的作用及调控机制
    1.2. STIM1和STIM2参与细胞内Ca²⁺稳态的调节
    1.3. STIM1和STIM2参与细胞内Ca²⁺稳态调节的同时,影响肿瘤细胞转移
    1.4. 探究胞内钙依赖转录因子在STIM2与乳腺癌EMT中间的桥梁作用
2. 材料与方法
    2.1. 材料
        2.1.1. 细胞获取
        2.1.2. 主要试剂
        2.1.3. 主要溶液配制
        2.1.4. 主要仪器设备和耗材
    2.2. 方法
        2.2.1. 细胞培养
        2.2.2. 网络数据库查询
        2.2.3. 细胞蛋白质提取
        2.2.4. 细胞核蛋白与胞浆蛋白提取
        2.2.5. 临床样本的采集和处理
        2.2.6. 免疫蛋白印迹
        2.2.7. Transwell实验
        2.2.8. RNA抽提(TRIZOL法)
        2.2.9. 逆转录合成cDNA
        2.2.10. 荧光定量PCR扩增
        2.2.11. 慢病毒转染
        2.2.12. 胞内钙浓度测定
        2.2.13. 免疫荧光实验
        2.2.14. 全细胞膜片钳记录方法与电流采集
        2.2.15. Affymetrix基因表达谱芯片筛选
        2.2.16. IPA分析
        2.2.17. 细胞上清液TGF-β1含量ELISA检测
        2.2.18. 双荧光素酶报告实验
        2.2.19. 工程菌扩增提取质粒
        2.2.20. ChIp染色质免疫沉淀技术
        2.2.21. 动物实验
        2.2.22. 数据处理和图表制作
3. 结果
    3.1. STIM1和STIM2在不同程度乳腺癌组织的表达情况
    3.2. 细胞系水平研究STIM1和STIM2分子与肿瘤细胞迁移的能力的关系
    3.3. 构建STIM1和STIM2慢病毒干扰和过表达稳转细胞株
    3.4. 不同于STIM1,STIM2促使细胞发生EMT
    3.5. STIM2分子对于细胞迁移能力的作用
    3.6. 动物实验验证STIM2对乳腺癌细胞系增殖和转移的作用
    3.7. STIM1与STIM2分子不同的生物学功能
    3.8. 筛选参与STIM2调控EMT过程的中间分子
    3.9. NFAT1在乳腺癌细胞中的作用
    3.10. NFAT1分子调控乳腺癌细胞EMT过程
    3.11. 筛选NFAT1调控EMT过程中的中间分子
    3.12. 验证转录因子NFAT1在乳腺癌细胞中对细胞因子TGF-β1的调节作用
4. 全文主要结论
5. 讨论
6. 本研究的创新点和下一步研究方向
    6.1. 创新点
    6.2. 下一步研究方向
参考文献
英文缩略词表
博士期间主要成果
致谢



本文编号：4003180