靶向EGFRvⅢ的分离式受体修饰的T细胞（ssCAR-T）有效性和可调控性的实验研究
发布时间：2021-06-23 06:03
研究背景过继细胞免疫治疗（adoptive cell immunotherapy,ACT）是肿瘤免疫治疗非常有潜力的治疗手段。基于CAR修饰的T细胞（chimeric antigen receptor engineered T cell,CAR-T）的ACT是近年来肿瘤免疫治疗的新突破。临床前和临床研究的观察结果显示CAR-T在血液系统恶性肿瘤和部分实体瘤治疗中取得了显著疗效。然而,该治疗策略却存在一些固有的局限性。CAR是由组成型启动子启动表达的,这种类型启动子不受外界影响而持续表达,没有组织和时空特异性。一旦CAR-T输入患者体内,就像被打开的“开关”一直处于“ON”的状态,无法通过外界因素调控CAR-T细胞活性。目前,已提出若干策略来改善CAR-T安全性。其中一个策略是加入诱导型自杀基因开关（iCaspase 9）,以消除输注的T细胞。一旦被激活,这种开关可以迅速消除90%以上的iCas9转导的T细胞。其他方法集中于通过“非致命”开关调控T细胞活性,这对于需要长期治疗的患者可能是有益的。胶质母细胞瘤（GBM）是成人最常见的恶性脑瘤,也是最致命的癌症之一。根治性手术、放疗和化疗后,...
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：122 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
EGFRvIII基因结构
vIII 基因结构。（A）EGFRvIII 结构示意图。（B）质粒 pCDH-C分测序结果。霉素最低有效浓度的结果转导 U87MG 细胞的转染效率不足 100%，需要将未被转以提高转导效率，从而能够更高效的利用 96 孔板有限稀我们利用载体 pCDH-CMV-EGFRvIII-EF1-puro 自身具有行上述筛选过程。因此，需要先确定嘌呤霉素杀死未转染效浓度。如图 1.2 所示（A-F），加入嘌呤霉素 72h 后，随胞死亡增加。图 D（1ug/ml）细胞大部分死亡，图 E（2，图 F（5ug/ml）细胞也已全部死亡。因此，确定嘌呤霉素有效浓度为 2ug/ml。
FRvIII 表达的检测及验证结果2ug/ml嘌呤霉素筛选后，我们进一步采用96孔板稀释法挑选单续 30 天的扩大培养，然后对构建的稳定表达 EGFRvIII 的 U8定。流式细胞术结果显示：表达 EGFRvIII 的 U87MG 能够达.3A-B）。Western blot 结果显示：EGFRvIII U87MG 组和 SMM大小约为 130KD 处出现条带，对照 MG63 和 U87MG 组无条系 SMMC7721 内源性表达 EGFRvIII[55]。在我们的结果中，UFRvIII 蛋白明显高于SMMC7721 组。此外，各组在分子量大小约带，为内参 β-actin（图 3C）。上述结果证明细胞株构建成功。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PiggyBac转座子介导的嵌合抗原受体修饰T细胞研究[J]. 郜宁,付玉龙,郑岩,张炳勇,李修岭,陈金秀,韩双印. 中华实验外科杂志. 2018 (12)
[2]γc家族细胞因子对体外培养T细胞表型的影响[J]. 赵静静,雷舒婷,郑岩,李修岭,韩双印. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2018(05)
[3]Phase 1 clinical trial demonstrated that MUC1 positive metastatic seminal vesicle cancer can be effectively eradicated by modified Anti-MUC1 chimeric antigen receptor transduced T cells[J]. Fengtao You,Licui Jiang,Bozhen Zhang,Qiang Lu,Qiao Zhou,Xiaoyang Liao,Hong Wu,Kaiqi Du,Youcai Zhu,Huimin Meng,Zhishu Gong,Yunhui Zong,Lei Huang,Man Lu,Jirong Tang,Yafen Li,Xiaochen Zhai,Xiangling Wang,Sisi Ye,Dan Chen,Lei Yuan,Lin Qi,Lin Yang. Science China（Life Sciences）. 2016(04)
博士论文
[1]靶向抑制表皮生长因子受体（EGFR）逆转骨肉瘤恶性生物学行为的研究[D]. 罗庆.重庆医科大学 2010
硕士论文
[1]嵌合EGFRvⅢ scFv-CD137-CD3ζ质粒的构建及其所修饰T淋巴细胞的选择性杀伤作用[D]. 黄莹.河南大学 2013
本文编号：3244387
【文章来源】：郑州大学河南省 211工程院校
【文章页数】：122 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
EGFRvIII基因结构
vIII 基因结构。（A）EGFRvIII 结构示意图。（B）质粒 pCDH-C分测序结果。霉素最低有效浓度的结果转导 U87MG 细胞的转染效率不足 100%，需要将未被转以提高转导效率，从而能够更高效的利用 96 孔板有限稀我们利用载体 pCDH-CMV-EGFRvIII-EF1-puro 自身具有行上述筛选过程。因此，需要先确定嘌呤霉素杀死未转染效浓度。如图 1.2 所示（A-F），加入嘌呤霉素 72h 后，随胞死亡增加。图 D（1ug/ml）细胞大部分死亡，图 E（2，图 F（5ug/ml）细胞也已全部死亡。因此，确定嘌呤霉素有效浓度为 2ug/ml。
FRvIII 表达的检测及验证结果2ug/ml嘌呤霉素筛选后，我们进一步采用96孔板稀释法挑选单续 30 天的扩大培养，然后对构建的稳定表达 EGFRvIII 的 U8定。流式细胞术结果显示：表达 EGFRvIII 的 U87MG 能够达.3A-B）。Western blot 结果显示：EGFRvIII U87MG 组和 SMM大小约为 130KD 处出现条带，对照 MG63 和 U87MG 组无条系 SMMC7721 内源性表达 EGFRvIII[55]。在我们的结果中，UFRvIII 蛋白明显高于SMMC7721 组。此外，各组在分子量大小约带，为内参 β-actin（图 3C）。上述结果证明细胞株构建成功。
【参考文献】：
期刊论文
[1]PiggyBac转座子介导的嵌合抗原受体修饰T细胞研究[J]. 郜宁,付玉龙,郑岩,张炳勇,李修岭,陈金秀,韩双印. 中华实验外科杂志. 2018 (12)
[2]γc家族细胞因子对体外培养T细胞表型的影响[J]. 赵静静,雷舒婷,郑岩,李修岭,韩双印. 中国肿瘤生物治疗杂志. 2018(05)
[3]Phase 1 clinical trial demonstrated that MUC1 positive metastatic seminal vesicle cancer can be effectively eradicated by modified Anti-MUC1 chimeric antigen receptor transduced T cells[J]. Fengtao You,Licui Jiang,Bozhen Zhang,Qiang Lu,Qiao Zhou,Xiaoyang Liao,Hong Wu,Kaiqi Du,Youcai Zhu,Huimin Meng,Zhishu Gong,Yunhui Zong,Lei Huang,Man Lu,Jirong Tang,Yafen Li,Xiaochen Zhai,Xiangling Wang,Sisi Ye,Dan Chen,Lei Yuan,Lin Qi,Lin Yang. Science China（Life Sciences）. 2016(04)
博士论文
[1]靶向抑制表皮生长因子受体（EGFR）逆转骨肉瘤恶性生物学行为的研究[D]. 罗庆.重庆医科大学 2010
硕士论文
[1]嵌合EGFRvⅢ scFv-CD137-CD3ζ质粒的构建及其所修饰T淋巴细胞的选择性杀伤作用[D]. 黄莹.河南大学 2013
本文编号：3244387
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3244387.html
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