孕期维生素A缺乏对子代肠神经系统发育的影响及机制初探

发布时间：2021-07-05 17:54

　　第一部分大鼠孕期维生素A缺乏损伤仔鼠肠神经系统的发育和胃肠运动目的:研究孕期母体维生素A缺乏（VAD）对仔鼠肠神经系统发育及胃肠运动功能的影响,并探讨其可能涉及的信号通路。方法:选取3周龄SD雌鼠,分别构建VA正常（VAN,>1.05μmol/L）、VA缺乏（VAD,<0.7μmol/L）以及孕早期VA补充（VAS,孕鼠E3.5d开始灌胃补充VA一周）动物模型;高效液相色谱法（HPLC）检测血清VA水平;免疫荧光染色观察三组仔鼠E12.5d和E14.5d胚肠中肠神经元TUJ1迁移情况;Western blot方法检测三组仔鼠E14.5d胎肠中视黄酸核受体（RARs）、肠神经元（PGP9.5）、肠胶质细胞（S100β）及肠神经系统（enteric nervous system,ENS）发育过程中关键基因SOX10和Ret的蛋白表达水平;待三组仔鼠成长至8w龄时,观察大便性状,检测大便含水量、总的胃肠传输时间和结肠蠕动力以评估胃肠功能;同时,还用Western blot检结肠组织中胆碱能（ChAT）和氮能（nNOS）肠神经元表达情况;分离结肠肌间神经丛,免疫荧光染色ChAT

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：126 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

RA代谢及信号转导模式图

重庆医科大学博士研究生学位论文20基于以上所述，本研究依据当前国内外研究现状及课题组前期研究基础，提出以下的科学假设（图2）：母孕期VAD降低子代RARs的表达，可能通过影响SOX10的表达，损伤子代ENS发育，出现GI功能异常；而母孕早期补充VA能减轻孕期VAD对子代ENS的损害。图2课题假设示意图Figure2Aschematicdiagramofresearchhypothesis.针对以上的科学假设，我们设计了相关的体内外实验。首先，我们构建母孕期VA正常、VA缺乏、VA补充的SD大鼠模型，在胚胎期12.5天和14.5天检测子代鼠RARs、SOX10、Ret的表达情况，并且评估ENS的发育情况；在仔鼠成年期检测胃肠功能及亚型肠神经元发育情况；然后，在E14.5d胎鼠中提取并培养原代肠神经球，RA处理肠神经球，检测其对增殖及分化的影响；最后，利用siRNA和过表达技术干预肠神经球中RARβ基因的表达，初步探讨RA影响ENS发育可能涉及的分子机制。技术路线图：第一部分大鼠孕期VAD对仔鼠ENS发育及胃肠动力功能的影响

重庆医科大学博士研究生学位论文21图3技术路线一Figure3Technicalrouteone.第二部分通过体外培养肠神经球，进一步探讨RA对肠神经干祖细胞增殖和亚型肠神经元分化的影响及其可能涉及的分子机制图4技术路线二Figure4Technicalroutetwo.


本文编号：3266541