NLRC5通过NF-κB与TGF-β1/Smad通路调控肝星状细胞炎症因子分泌和纤维化的功能及其机制研究
发布时间:2021-07-11 00:54
肝脏具有重要的生理功能,近年来的研究显示多种细胞因子参与病毒性肝炎、酒精性肝损伤、脂肪肝、肝细胞肝癌等慢性肝病的发病过程。其重要发生过程是:在损伤因子作用下,激活肝脏Kupffer细胞(KC)释放大量细胞因子,通过调控肝星状细胞(HSC)中相应信号通路,促进HSC细胞的活化增殖,合成以胶原为主的ECM过度沉积于肝脏,引起肝脏发生病理改变,发展成肝硬化,甚至肝癌。研究发现HSC在肝脏的炎症反应过程中可能会发挥重要的作用。在多种因素如病毒感染药物作用等导致肝损伤后,HSC等肝脏细胞分泌多种细胞因子,如IL-1,IL-6及IL-10等。HSC膜上特异性受体可以识别这些细胞因子,进一步将信号通过细胞内的信号转导通路传递到核内,激活核内存在的某些关键性的转录因子,最终达到促进相关靶基因的转录和表达的目的。在此过程中,激活后的HSC可产生大量的促炎因子和促纤维化因子并通过旁分泌和自分泌作用,进一步刺激未激活转化的HSC转变为肌成纤维细胞,使肝纤维化形成正反馈。炎症反应作为肝纤维化形成和启动因素,是促其形成肝纤维的原因,减轻炎症有助于阻止肝纤维化的发生。而HSC作为肝纤维化主要的效应细胞,其在炎症反...
【文章来源】:安徽医科大学安徽省
【文章页数】:145 页
【学位级别】:博士
【文章目录】:
中英文缩写词对照
中文摘要
ABSTRACT
1 前言
2 实验材料
2.1 实验取材
2.2 实验动物
2.3 药品与试剂
2.4 仪器与设备
2.5 溶液和试剂的配制
3 实验方法
3.1 质粒的制备和转化
3.2 动物造模、分组
3.3 肝组织病理学染色
3.4 免疫组织化学检测
3.5. 免疫荧光制片
3.6 免疫荧光双染
3.7 免疫沉淀
3.8 细胞培养
3.8.1 细胞复苏
3.8.2 细胞培养
3.8.3 细胞传代
3.8.4 细胞计数
3.8.5 冻存细胞
3.9 细胞转染
3.10 PDTC处理细胞
3.11 RT-PCR
3.12 实时荧光定量PCR
3.13 MTT比色法测细胞增殖
3.14 流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡
3.15 Western blot
3.16 ELISA法检测IL-1β 和IL-6 的释放水平
3.17 双荧光素酶报告试验
3.18 统计学分析
4.实验结果
4.1 NLRC5在纤维化组织中的表达
4.1.1 病理组织学检测
4.1.2 NLRC5、α-SMA在人肝纤维化组织中的表达
4.1.3 在肝纤维化组织中NLRC5、α-SMA共定位于活化的肝星状细胞
4.2 过表达和沉默NLRC5生物学效果检测
4.3 NLRC5对LX-2 细胞活化及炎症因子分泌的影响
4.3.1NLRC5对LX-2 细胞活化的调控作用
4.3.1.1 TGF-β1 对LX-2 细胞中NLRC5、α-SMA的表达影响
4.3.2 NLRC5对LX-2 细胞中炎症因子分泌的调控
4.4 NLRC5对LX-2 细胞增殖、周期及凋亡的的影响
4.4.1 MTT法检测沉默NLRC5对TGF-β1 诱导的LX-2 细胞增殖的影响
4.4.2 流式细胞术检测沉默NLRC5对TGF-β1 诱导的LX-2 细胞周期及凋亡的影响
4.4.3 沉默NLRC5对TGF-β1 诱导的LX-2 细胞中凋亡蛋白表达的影响
4.5 NLRC5对NF-κB与TGF-β1/Smad信号通路的作用研究
4.5.1 NLRC5对TGF-β1 诱导LX-2 细胞中NF-κB信号通路的调控作用
4.5.2 NLRC5对TNF-α 诱导LX-2 细胞中NF-κB信号通路的调控作用
4.5.3 NLRC5对TGF-β1 诱导LX-2 细胞中TGF-β1/Smad信号通路的调控作用
5.讨论
6.结论
参考文献
附录
致谢
综述
References
本文编号:3277000
【文章来源】:安徽医科大学安徽省
【文章页数】:145 页
【学位级别】:博士
【文章目录】:
中英文缩写词对照
中文摘要
ABSTRACT
1 前言
2 实验材料
2.1 实验取材
2.2 实验动物
2.3 药品与试剂
2.4 仪器与设备
2.5 溶液和试剂的配制
3 实验方法
3.1 质粒的制备和转化
3.2 动物造模、分组
3.3 肝组织病理学染色
3.4 免疫组织化学检测
3.5. 免疫荧光制片
3.6 免疫荧光双染
3.7 免疫沉淀
3.8 细胞培养
3.8.1 细胞复苏
3.8.2 细胞培养
3.8.3 细胞传代
3.8.4 细胞计数
3.8.5 冻存细胞
3.9 细胞转染
3.10 PDTC处理细胞
3.11 RT-PCR
3.12 实时荧光定量PCR
3.13 MTT比色法测细胞增殖
3.14 流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡
3.15 Western blot
3.16 ELISA法检测IL-1β 和IL-6 的释放水平
3.17 双荧光素酶报告试验
3.18 统计学分析
4.实验结果
4.1 NLRC5在纤维化组织中的表达
4.1.1 病理组织学检测
4.1.2 NLRC5、α-SMA在人肝纤维化组织中的表达
4.1.3 在肝纤维化组织中NLRC5、α-SMA共定位于活化的肝星状细胞
4.2 过表达和沉默NLRC5生物学效果检测
4.3 NLRC5对LX-2 细胞活化及炎症因子分泌的影响
4.3.1NLRC5对LX-2 细胞活化的调控作用
4.3.1.1 TGF-β1 对LX-2 细胞中NLRC5、α-SMA的表达影响
4.3.2 NLRC5对LX-2 细胞中炎症因子分泌的调控
4.4 NLRC5对LX-2 细胞增殖、周期及凋亡的的影响
4.4.1 MTT法检测沉默NLRC5对TGF-β1 诱导的LX-2 细胞增殖的影响
4.4.2 流式细胞术检测沉默NLRC5对TGF-β1 诱导的LX-2 细胞周期及凋亡的影响
4.4.3 沉默NLRC5对TGF-β1 诱导的LX-2 细胞中凋亡蛋白表达的影响
4.5 NLRC5对NF-κB与TGF-β1/Smad信号通路的作用研究
4.5.1 NLRC5对TGF-β1 诱导LX-2 细胞中NF-κB信号通路的调控作用
4.5.2 NLRC5对TNF-α 诱导LX-2 细胞中NF-κB信号通路的调控作用
4.5.3 NLRC5对TGF-β1 诱导LX-2 细胞中TGF-β1/Smad信号通路的调控作用
5.讨论
6.结论
参考文献
附录
致谢
综述
References
本文编号:3277000
本文链接:https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/3277000.html