从氧化应激角度研究三才连梅颗粒对糖尿病小鼠睾丸生精细胞自噬及凋亡的影响

发布时间：2021-07-14 08:42

　　糖尿病生精功能障碍是男性糖尿病人的常见并发症,也是引起男性不育的重要原因。研究表明男性糖尿病患者不育的发病率约为35.1%,随着近年糖尿病发病率升高以及发病年龄年轻化,糖尿病不育已成为影响男性生育的重要原因,氧化应激损伤与其密切相关,但具体机制不甚明确,并缺乏有效防治方法。“消渴”是中医对糖尿病的称谓,阴虚燥热是其辨证基础,糖尿病人久病耗气伤阴,气虚精亏,气虚运化无力,表现为气阴两虚,阴损及阳,所谓“阳化气、阴成形”,阴虚内热炽盛,阴液不足以濡养精室,发展为阳萎疲乏,精冷不育。三才连梅颗粒由人参、天冬、生地黄、乌梅、肉桂、黄连六味药组方而成,其方义遵循养阴清热为本,调和阴阳,并能益气健脾,培土生精。前期实验证实三才连梅颗粒具有较好的降血糖及抗氧化作用,临床观察发现三才连梅颗粒能有效提高糖尿病患者性功能及精液质量,改善中医症候。本课题拟用三才连梅颗粒治疗糖尿病生精功能障碍小鼠,观察其对糖尿病小鼠生精功能的影响,并通过Nrf2/HO-1氧化应激信号通路探讨其对生精细胞线粒体自噬及凋亡的影响。本实验通过高脂饮食及腹腔注射链脲霉素（STZ）建立2型糖尿病（T2DM）小鼠模型。将小鼠分为4组,分... 

【文章来源】：成都中医药大学四川省

【文章页数】：133 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
中英文缩略词表
引言
    附 研究技术路线图
第一部分 三才连梅颗粒对糖尿病小鼠生精功能的影响
    1.前言
    2.实验药品及器材
        2.1 实验药品
        2.2 试验器材
        2.3 实验试剂
    3.实验方法
        3.1 实验动物及喂养
        3.2 2型糖尿病小鼠模型的建立
        3.3 实验分组
        3.4 标本的收集
        3.5 睾丸指数的测定
        3.6 精子参数的测定
        3.7 ELISA检测小鼠血清中FSH、LH及 T的含量
        3.8 睾丸组织切片及HE染色
        3.9 糖尿病相关指标的检测
        3.10 统计学分析
    4.结果
        4.1 三才连梅颗粒对糖尿病小鼠生精功能的影响
        4.2 三才连梅颗粒对2型糖尿病小鼠代谢相关指标的影响
    5.讨论
第二部分 三才连梅颗粒通过Nrf2/HO-1 信号通路对DM小鼠睾丸氧化应激损伤的影响
    1.前言
    2.实验器材及试剂
        2.1 实验器材
        2.2 实验试剂
    3.实验方法
        3.1 实验标本
        3.2 qPCR检测Nrf2及HO-1 mRNA的表达
        3.3 western blot检测睾丸组织中Nrf2及HO-1 蛋白的表达
        3.4 Elisa检测睾丸组织中MDA,SOD以及8-OHdG的含量
        3.5 统计学分析
    4.结果
        4.1 三才连梅颗粒对Nrf2/HO-1 信号通路的影响
        4.2 三才连梅颗粒对糖尿病小鼠氧化应激产物的影响
    5.讨论
第三部分 三才连梅颗粒对糖尿病小鼠生精细胞线粒体自噬及凋亡的影响
    1.前言
    2.实验器材及试剂
        2.1 实验器材
        2.2 实验药品及试剂
    3.实验方法
        3.1 实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qPCR)
        3.2 蛋白免疫印迹(Western Blot)
        3.3 电镜检测
        3.4 TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)
        3.5 统计学方法
    4.结果
        4.1 三才连梅颗粒对自噬相关蛋白Beclin-1、LC-3Ⅱ/Ⅰ、P62 表达水平的影响
        4.2 三才连梅颗粒对生殖细胞超微结构及自噬小体的影响
        4.3 三才连梅颗粒对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达水平的影响
        4.4 三才连梅颗粒对睾丸生精细胞凋亡的影响
    5.讨论
全文总结
参考文献
致谢
附件1:文献综述
    参考文献
附件2:在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果
附件3:在读期间立项课题


【参考文献】：
期刊论文
[1]糖尿病中医证候的现代方法研究[J]. 马小芬,毛新民,马晓丽,兰怡.  新疆医科大学学报. 2019(02)
[2]中医治疗糖尿病用药规律及效果的分析研究[J]. 刘榜劳.  中西医结合心血管病电子杂志. 2019(01)
[3]肥胖型少弱精子症的发病机制及中医调体防治[J]. 董阳,孟翔鹤,王鑫,郑燕飞,王济,赵蔚波,王琦.  中医学报. 2018(12)
[4]p62/Nrf2信号途径在细胞保护中的作用[J]. 李晓华,唐乃夫,厉永强,刘彬.  药学学报. 2018(12)
[5]细胞自噬与相关中医辨证体系的研究进展[J]. 胡朋言,王伟,梁雪,李蓓蕾,王思超,王仕衍,纪云西,谢博文.  中华中医药学刊. 2018(09)
[6]多种细胞自噬调节剂对自噬标记物LC3Ⅱ及p62表达的影响[J]. 魏砚明,任晋宏,栾智华,王永辉.  中国药科大学学报. 2018(03)
[7]氧化应激产物MDA与生育力和精子参数相关性的Meta分析[J]. 夏雨果,陈秋,汤志梅,陈慧臻,高坪,曾文彤,赵娟,陈岚.  海南医学. 2018(09)
[8]二甲双胍对肥胖大鼠睾丸生精功能的影响[J]. 闫文杰,穆杨,杨菁.  武汉大学学报(医学版). 2018(01)
[9]PINK1/Parkin通路在线粒体自噬氧化损伤中的作用[J]. 梁丹阳,戴汉川.  中国细胞生物学学报. 2018(01)
[10]基于阴阳五行学说探讨自噬对于脂质代谢内稳态的调节[J]. 王志丹,贾连群,杨关林.  中华中医药学刊. 2017(05)

博士论文
[1]三才连梅颗粒毒性研究与临床疗效评价[D]. 郭强.成都中医药大学 2017
[2]萝卜硫素通过上调Nrf2的表达和功能减少糖尿病小鼠睾丸细胞凋亡的研究[D]. 王永刚.吉林大学 2015
[3]氧化应激和慢性炎症影响睾丸间质细胞衰老的作用机制研究[D]. 赵秀军.河北医科大学 2013
[4]HO-1基因启动子微卫星多态与广东汉族湿热证易感性的相关性研究[D]. 路永坤.广州中医药大学 2010

硕士论文
[1]三才粉剂治疗初次诊断2型糖尿病机制探讨[D]. 罗宇磊.成都中医药大学 2015



本文编号：3283807