组成性活化DNMT1沉默miR-34a-5p对肝癌干细胞特性的影响
发布时间：2021-07-19 16:04
有研究表明表观遗传调控在促进和维持肿瘤干细胞（CSC）特性中发挥重要作用。然而,在肝细胞癌（HCC）中,促进肝癌干细胞（LCSCs）特性的表观遗传调控机制以及靶向表观遗传调控的药物作用机制尚未完全阐明。本文的预实验结果表明,SMMC-7721细胞系LCSCs较亲本细胞有更高DNMT1活性,更低miR-34a-5p表达。此外,抗肿瘤活性药效学筛选实验发现蔓荆子总黄酮（FVTF）有效抑制LCSCs球形成和DNMT1活性,上调miR-34a-5p水平。计算机模拟发现miR-34a-5p与FoxM1 3′端非翻译区有特异结合位点。据此,我们假设:DNMT1/miR-34a-5p/FoxM1信号轴在促进LCSCs特性中起重要作用;同时,FVTF通过抑制DNMT1活性和表达、上调miR-34a-5p表达、直接靶向抑制FoxM1,从而抑制LCSCs特性。为了验证该科学假设,本研究以SMMC-7721细胞系CD133+肝癌球细胞作为LCSCs模型。分别应用ELISA、蛋白质印迹、定量逆转录PCR（qRT-PCR）和甲基化特异性PCR（MSP）比较SMMC-7721细胞与LCSCs...
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：151 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
本学位论文研究思路
miR-34a是重要的肿瘤抑制因子,是miR-34家族主要成员之一,其在多种人癌症中被表观沉默[21,23]。如图2-1所示,miR-34a基因位于1号染色体p36位点;通过RNA聚合酶II(pol II)将miR-34a基因从位于CpG岛的转录起始位点转录成初级转录物(pri-mir-34a)。pre-mir-34a通过输出蛋白5被运输到细胞质中,随后被核糖体内切酶Dicer切割成成熟的miR-34a,然后,miR-34a参与装配RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)。miR-34a/RISC复合物通过与靶基因m RNAs(如CD44)3"端非翻译区部分互补序列结合,抑制特定的基因产物翻译,或通过完全互补的序列结合引起靶基因m RNA降解[22]。在本学位课题的研究中,我们试图利用miR-34a-5p模拟物(miR-34a-5p mimic)或miR-34a-5p抑制物(miR-34a-5p inhibitor)转染分别干预肝癌SMMC-7721细胞或其源性LCSC。对比检测miR-34a-5p表达、LCSC特性,验证miR-34a-5p能否抑制LCSC特性。再联合miR-34a-5p mimic与DNMT1过表达处理SMMC-7721源性LCSC,分析组成性活化DNMT1表观沉默miR-34a-5p能否促进SMMC-7721源性LCSC特性。2.2 材料与方法
免疫磁微球(MACS)分选的CD133-和CD133+细胞群的CD133阳性细胞百分率分别是0.27±0.05%和99.0±1.0%。单层贴壁生长的SMMC-7721细胞CD133+细胞群的百分率是4.3±0.14%(图2-2);这些结果说明,MACS分选有效纯化CD133+细胞群。按照先前发表文献[125]的描述,我们定义CD133+肝癌球细胞为LCSC。2.3.1.2 LCSCs DNMT1组成性活化
【参考文献】：
期刊论文
[1]2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J]. 郑荣寿,孙可欣,张思维,曾红梅,邹小农,陈茹,顾秀瑛,魏文强,赫捷. 中华肿瘤杂志. 2019 (01)
[2]FoxM1 overexpression promotes epithelial-mesenchymal transition and metastasis of hepatocellular carcinoma[J]. Fan-Di Meng,Ji-Chao Wei,Kai Qu,Zhi-Xin Wang,Qi-Fei Wu,Ming-Hui Tai,Hao-Chen Liu,Rui-Yao Zhang,Chang Liu. World Journal of Gastroenterology. 2015(01)
[3]8-bromo-7-methoxychrysin inhibits properties of liver cancer stem cells via downregulation of β-catenin[J]. Mei-Fang Quan,Li-Hong Xiao,Zhi-Hong Liu,Hui Guo,Kai-Qun Ren,Fei Liu,Jian-Guo Cao,Xi-Yun Deng. World Journal of Gastroenterology. 2013(43)
[4]Casticin induces caspase-mediated apoptosis via activation of mitochondrial pathway and upregulation of DR5 in human lung cancer cells[J]. Yuan Zhou,Yi Peng,Qi-Qi Mao,Xia Li,Ming-Wu Chen,Ting Su,Li Tian,Nai-Quan Mao,Ling-Zhi Long,Mei-Fang Quan,Fei Liu,Su-Fang Zhou,Yong-Xiang Zhao. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2013(05)
[5]Casticin-induced apoptosis involves death receptor 5 upregulation in hepatocellular carcinoma cells[J]. Jun Yang,Department of Pathology,The Third Xiangya Hospital of Central South University,Changsha 410013,Hunan Province,China Yun Yang,Li Tian,Xi-Feng Sheng,Fei Liu,Jian-Guo Cao,Laboratory of Medical Engineering,Medical College,Hunan Normal University,Changsha 410013,Hunan Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2011(38)
本文编号：3290997
【文章来源】：湖南师范大学湖南省 211工程院校
【文章页数】：151 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
本学位论文研究思路
miR-34a是重要的肿瘤抑制因子,是miR-34家族主要成员之一,其在多种人癌症中被表观沉默[21,23]。如图2-1所示,miR-34a基因位于1号染色体p36位点;通过RNA聚合酶II(pol II)将miR-34a基因从位于CpG岛的转录起始位点转录成初级转录物(pri-mir-34a)。pre-mir-34a通过输出蛋白5被运输到细胞质中,随后被核糖体内切酶Dicer切割成成熟的miR-34a,然后,miR-34a参与装配RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)。miR-34a/RISC复合物通过与靶基因m RNAs(如CD44)3"端非翻译区部分互补序列结合,抑制特定的基因产物翻译,或通过完全互补的序列结合引起靶基因m RNA降解[22]。在本学位课题的研究中,我们试图利用miR-34a-5p模拟物(miR-34a-5p mimic)或miR-34a-5p抑制物(miR-34a-5p inhibitor)转染分别干预肝癌SMMC-7721细胞或其源性LCSC。对比检测miR-34a-5p表达、LCSC特性,验证miR-34a-5p能否抑制LCSC特性。再联合miR-34a-5p mimic与DNMT1过表达处理SMMC-7721源性LCSC,分析组成性活化DNMT1表观沉默miR-34a-5p能否促进SMMC-7721源性LCSC特性。2.2 材料与方法
免疫磁微球(MACS)分选的CD133-和CD133+细胞群的CD133阳性细胞百分率分别是0.27±0.05%和99.0±1.0%。单层贴壁生长的SMMC-7721细胞CD133+细胞群的百分率是4.3±0.14%(图2-2);这些结果说明,MACS分选有效纯化CD133+细胞群。按照先前发表文献[125]的描述,我们定义CD133+肝癌球细胞为LCSC。2.3.1.2 LCSCs DNMT1组成性活化
【参考文献】：
期刊论文
[1]2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J]. 郑荣寿,孙可欣,张思维,曾红梅,邹小农,陈茹,顾秀瑛,魏文强,赫捷. 中华肿瘤杂志. 2019 (01)
[2]FoxM1 overexpression promotes epithelial-mesenchymal transition and metastasis of hepatocellular carcinoma[J]. Fan-Di Meng,Ji-Chao Wei,Kai Qu,Zhi-Xin Wang,Qi-Fei Wu,Ming-Hui Tai,Hao-Chen Liu,Rui-Yao Zhang,Chang Liu. World Journal of Gastroenterology. 2015(01)
[3]8-bromo-7-methoxychrysin inhibits properties of liver cancer stem cells via downregulation of β-catenin[J]. Mei-Fang Quan,Li-Hong Xiao,Zhi-Hong Liu,Hui Guo,Kai-Qun Ren,Fei Liu,Jian-Guo Cao,Xi-Yun Deng. World Journal of Gastroenterology. 2013(43)
[4]Casticin induces caspase-mediated apoptosis via activation of mitochondrial pathway and upregulation of DR5 in human lung cancer cells[J]. Yuan Zhou,Yi Peng,Qi-Qi Mao,Xia Li,Ming-Wu Chen,Ting Su,Li Tian,Nai-Quan Mao,Ling-Zhi Long,Mei-Fang Quan,Fei Liu,Su-Fang Zhou,Yong-Xiang Zhao. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2013(05)
[5]Casticin-induced apoptosis involves death receptor 5 upregulation in hepatocellular carcinoma cells[J]. Jun Yang,Department of Pathology,The Third Xiangya Hospital of Central South University,Changsha 410013,Hunan Province,China Yun Yang,Li Tian,Xi-Feng Sheng,Fei Liu,Jian-Guo Cao,Laboratory of Medical Engineering,Medical College,Hunan Normal University,Changsha 410013,Hunan Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2011(38)
本文编号：3290997
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