牛膝多肽促施万细胞增殖作用及机制研究

发布时间：2021-08-05 01:45

　　目的:了解牛膝多肽加入不同时间后对原代培养及在体坐骨神经缺损修复时施万细胞增殖功能的促进作用,并探讨牛膝多肽促施万细胞增殖过程的作用机制及关键调控基因,进一步研究牛膝多肽对施万细胞的整体作用及机制分析,有助于周围神经损伤治疗靶点的探寻,为牛膝多肽用于临床治疗周围神经损伤提供更有针对性的思路。方法:1.体外培养原代施万细胞。分别加入完全培养基（Control组）、含牛膝多肽的完全培养基（ABPPk组）、含NGF的完全培养基（NGF组）,分别于加入后不同时间点（15min、0.5h、1h、2h、3h、6h、12h、24h）,通过 CCK8、细胞周期检测、EdU增殖检测、细胞增殖核抗原（PCNA、Ki67）的蛋白及免疫荧光检测等方法确定施万细胞的增殖变化。2.制备大鼠坐骨神经夹伤模型。大鼠坐骨神经夹伤后,分别在损伤神经外膜下显微注射生理盐水（Control组）、含牛膝多肽的生理盐水（ABPPk组）、含NGF的生理盐水（NGF组）,于术后不同时间点（1d、4d、7d）取大鼠损伤段坐骨神经,通过Western blot及冰冻切片-免疫组化-光镜观察施万细胞增殖情况及神经形态变化。3.全转录组测序... 

【文章来源】：苏州大学江苏省 211工程院校

【文章页数】：100 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．施万细胞培养图

牛膝多肽促施万细胞增殖作用及机制研宄?结果??为了鉴定施万细胞纯度，采用施万细胞特异性标记Ｓ１００进行免疫荧光细胞化??学染色，Ｈ〇ｅｃｈＳｅ３３３４２标记细胞核。标记结果显示，纯化后大部分施万细胞呈现??Ｓ１００阳性。结果提示，体外培养的施万细胞纯度较高，可达９５％以上，可用于后??续细胞实验（图２）。??Ｈ＾ＩＨＩ??图２．施万细胞免疫荧光鉴定。绿色为ＳＩＯＯ染色的施万细胞，蓝色为??Ｈｏｅｃｈｓｅ３３３４２染色的细胞核，Ｍｅｒｇｅ为两者共同标记的部分。Ｂａｒ＝５０ｐｍ。??２．?ＡＢＰＰｋ对正常培养施万细胞活力的影响??采用Ｃ＇ＣＫ－８法观察ＡＢＰＰｋ处理不同时间对正常培奍施万细胞活力的影响。??分别给予〇．５Ｈｇ／ｍｌ?ＡＢＰＰｋ及Ｏ．ｌｐｇ／ｍｌ?ＮＧＦ处理施万细胞不同时间，ＤＭＥＭ完全??培养基为阴性对照组，培养不同时间（１５ｍｉｎ，?０．５ｈ，ｌｈ，?２ｈ，３ｈ，６ｈ，．．１２ｈ，２４ｈ）??进行细胞活力检测。结果发现ＡＢＰＰｋ及ＮＧＦ处理不Ｍ时间后对正常施万细胞活??力有不同程度的增殖影响（图３）。??２．０－，??ｔ?ＥＳ３?Ｃｏｎｔｒｏｌ??百?＊＊?＊?，?＊?＊?＊?，?＊?＊?ＥＥ３?ＡＢＰＰｋ?０．５［ｊｇ／ｍｌ??＾?１５＂?ｗ?＾?＊｜?Ｘ?：?＇?ｉ?：?＾?□?ＮＧＦ?０．１ｐｇ／ｍｌ??５１．０－?Ｊ；?ｉ：?ｊ１１：：?＾?｜ｎ?ｉｎ??！〇ｌ?ｈ?ｉｈｌｉｎｌ！??＾?＾?＾?＾?＾?ｎｆ??图３．?ＡＢＰＰｋ及ＮＧＦ对施万细胞的活力的影响（＊ｐ＜０．０５）。??１９??

牛膝多肽促施万细胞增殖作用及机制研宄?结果??为了鉴定施万细胞纯度，采用施万细胞特异性标记Ｓ１００进行免疫荧光细胞化??学染色，Ｈ〇ｅｃｈＳｅ３３３４２标记细胞核。标记结果显示，纯化后大部分施万细胞呈现??Ｓ１００阳性。结果提示，体外培养的施万细胞纯度较高，可达９５％以上，可用于后??续细胞实验（图２）。??Ｈ＾ＩＨＩ??图２．施万细胞免疫荧光鉴定。绿色为ＳＩＯＯ染色的施万细胞，蓝色为??Ｈｏｅｃｈｓｅ３３３４２染色的细胞核，Ｍｅｒｇｅ为两者共同标记的部分。Ｂａｒ＝５０ｐｍ。??２．?ＡＢＰＰｋ对正常培养施万细胞活力的影响??采用Ｃ＇ＣＫ－８法观察ＡＢＰＰｋ处理不同时间对正常培奍施万细胞活力的影响。??分别给予〇．５Ｈｇ／ｍｌ?ＡＢＰＰｋ及Ｏ．ｌｐｇ／ｍｌ?ＮＧＦ处理施万细胞不同时间，ＤＭＥＭ完全??培养基为阴性对照组，培养不同时间（１５ｍｉｎ，?０．５ｈ，ｌｈ，?２ｈ，３ｈ，６ｈ，．．１２ｈ，２４ｈ）??进行细胞活力检测。结果发现ＡＢＰＰｋ及ＮＧＦ处理不Ｍ时间后对正常施万细胞活??力有不同程度的增殖影响（图３）。??２．０－，??ｔ?ＥＳ３?Ｃｏｎｔｒｏｌ??百?＊＊?＊?，?＊?＊?＊?，?＊?＊?ＥＥ３?ＡＢＰＰｋ?０．５［ｊｇ／ｍｌ??＾?１５＂?ｗ?＾?＊｜?Ｘ?：?＇?ｉ?：?＾?□?ＮＧＦ?０．１ｐｇ／ｍｌ??５１．０－?Ｊ；?ｉ：?ｊ１１：：?＾?｜ｎ?ｉｎ??！〇ｌ?ｈ?ｉｈｌｉｎｌ！??＾?＾?＾?＾?＾?ｎｆ??图３．?ＡＢＰＰｋ及ＮＧＦ对施万细胞的活力的影响（＊ｐ＜０．０５）。??１９??


本文编号：3322811