氯喹抗肿瘤新机制探究：调动巨噬细胞依赖的抗肿瘤免疫

发布时间：2021-08-26 13:17

　　目的:2018年诺贝尔生理学与医学奖颁发给了将抑制免疫负向调控用于肿瘤治疗的研究,让肿瘤免疫治疗成为时代的新宠。当前肿瘤免疫疗法主要有针对免疫检查点的PD-1或者CTLA-4抗体、CAR-T细胞等,这些均是以激活T细胞诱导适应性免疫应答为基础。而肿瘤免疫微环境中存在着大量的固有免疫细胞,它们能第一时间识别和攻击肿瘤细胞,对这些固有免疫细胞进行研究有助于深入认识肿瘤免疫抑制,开发新型免疫治疗方式。这其中以巨噬细胞为代表,极其众多的巨噬细胞在肿瘤免疫微环境中不但不发挥其原始的吞噬肿瘤细胞、提呈肿瘤抗原以及杀伤肿瘤细胞的作用,反而被肿瘤细胞教育成为了所谓的M2型肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associated macrophages,TAMs）,促进肿瘤生长、转移以及免疫逃逸。因此,靶向M2型TAMs,使其成为抗肿瘤的M1型巨噬细胞,重塑肿瘤免疫微环境,促进T细胞等的抗肿瘤免疫,将为肿瘤免疫治疗开辟一条新的道路。方法:体外培养小鼠骨髓来源的巨噬细胞,分别运用LPS/IFN-γ极化诱导M1型巨噬细胞、IL-4极化诱导M2型巨噬细胞,分析两类巨噬细胞溶酶体pH值、数量等的差异;选取溶酶体特异性... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：120 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．?（Ａ）每天腹腔注射ＰＢＳ或者７５?ｍｇ／ｋｇ?ＣＱ治疗Ｃ５７ＢＬ／６皮下荷瘤??（Ｂ１６黑色素瘤）小鼠，治疗两周，测量肿瘤大小（ｎ＝６）；?（Ｂ）每天腹腔注射??？８５或者７５〇＾／１＾０（＾治疗０５７：８］７６皮下荷瘤（８１６黑色素瘤）小鼠，治疗两??

激以及添加小鼠ＩＬ－２１０ｎｇ／ｍＬ），分别加入０、５冲４、ｌｔＨｉＭＣＱ进行处理，７２小??时后，流式细胞技术结果显示，５ｐＭＣＱ组ＣＦＳＥ比例与对照组基本一致，而??ｌＯ＾ＭＣＱ组ＣＦＳＥ比例低于对照组（图３Ａ）。另外，我们分别给予正常野生型??Ｃ５７ＢＬ／６小鼠腹腔注射ＰＢＳ和７５ｍｇ／ｋｇ?ＣＱ，２４小时后处死小鼠，流式细胞技??术分析小鼠脾脏ＣＤ３＋Ｔ细胞的凋亡、活化、失能以及溶酶体状态。结果显示，??ＣＱ处理组Ｔ细胞活力与ＰＢＳ组没有差别（图３Ｂ）；?ＣＤ６９＋细胞占ＣＤ３＋Ｔ细胞??比例以及ＣＤ１３７＋细胞占ＣＤ３＋Ｔ细胞比例没有差别（图３Ｃ），ＰＤ－１＋细胞占ＣＤ３＋??Ｔ细胞比例以及ＣＴＬＡ－４＋细胞占ＣＤ３＋Ｔ细胞比例没有差别（图３Ｄ）；?ＣＤ１０７ａ＋??细胞占ＣＤ３＋Ｔ细胞比例也没有差别（图３Ｅ）。以上结果提示ＣＱ不直接影响Ｔ??细胞增殖，升高浓度甚至会抑制Ｔ细胞增殖；腹腔注射ＣＱ也不会影响小鼠Ｔ??细胞的凋亡、活化、失能以及溶酶体状态。这说明ＣＱ很可能不会通过直接激??活Ｔ细胞发挥抗肿瘤免疫效应。??４４??

膦酸盐脂质体以清除巨噬细胞，再用ＣＱ?（７５ｍｇ／ｋｇ）治疗，测量肿瘤大小。两??周后，结果显示，氯膦酸盐脂质体处理后再用ＣＱ治疗组肿瘤体积与单独用氯??膦酸盐脂质体处理组没有差别（图５Ｃ）。另外，我们对建立了?Ｈ２２肌肉瘤模型??的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔注射氯膦酸盐脂质体以清除巨噬细胞，再用ＣＱ（７５ｍｇ／ｋｇ）??治疗。一周后，测量肿瘤重量，结果显示，氯膦酸盐脂质体处理后再用ＣＱ治??疗组肿瘤重量与单独用氯膦酸盐脂质体处理组没有差别（图５Ｄ）。除以上两种??动物模型外，我们对建立了?Ｈ２２腹水模型的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔注射氯膦酸盐脂??质体以清除巨噬细胞，再用ＣＱ?（７５ｍｇ／ｋｇ）治疗。一周后，测量小鼠腹水体积??和腹水中肿瘤细胞数量（流式细胞技术计数ＣＤ４５－细胞）。结果显示，氯膦酸盐??脂质体处理后再用ＣＱ治疗组腹水体积与单独用氯膦酸盐脂质体处理组没有差??别（图５Ｅ），同时，氯膦酸盐脂质体处理后再用ＣＱ治疗组腹水中肿瘤细胞数??量与单独用氯膦酸盐脂质体处理组也没有差别（图５Ｆ）。以上动物实验提示，巨??噬细胞参与了?ＣＱ诱导的抗肿瘤作用。??Ａ?Ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ?Ｂ?Ｇａｔｅ?ｏｎ?ＣＤ３＊?ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ?Ｃ?＾－５．０－ｊ?＾?Ｃｉ〇＋ｃｑ?ｒ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ?ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ?ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ?名一￣?Ｃ丨０?ｒ??Ｏ?ｏ?ＣＱ?／??ｂ?＇?１．０３％?０．０７％?＇６７．３％?７２．３％?▽?＋?ｐｒｑ?／?：??＿＿?ｆ?隊－ｒ?Ｊ??ｊ?；?１??：?Ｗ???ｊ?！＿?


本文编号：3364311