靶向CD123的CAR-T治疗AML的临床及机制研究
发布时间：2021-09-19 17:22
目的:验证靶向CD123的CAR-T的临床前抗白血病效果及可控性,探索靶向CD123的CAR-T作为预处理方案治疗复发难治性AML的临床应用方案并开展临床试验,探索CD123 CAR-T治疗副反应发生机制。方法:1.通过流式细胞术检测CAR表达效率,体外杀伤及CAR-T去除效率。进行体外细胞因子释放实验并通过ELISA或CBA检测。2.招募移植后复发FUS-ERG+AML患者1例,进行供者来源CD123 CAR-T细胞作为预处理方案治疗allo-HSCT。3.构建体外共孵育模型模拟CD123 CAR-T接受刺激后释放细胞因子水平以及对不同细胞CD123表达的影响。4.通过活细胞工作站观察并记录CD123 CAR-T对HUVEC在体外的杀伤。5.通过集落形成实验评价CD123 CAR-T对动员后外周血CD34+细胞髓系及红系分化潜能的影响。结果:一,1.制备CD123 CAR-T并通过体外功能实验证明CD123 CAR-T对CD123+AML细胞系及原代细胞显示出特异性杀伤并且IFN-γ释放增多。2.低剂量DAC处理MOLM-13及THP-1细胞后增强CD123 CAR-T对其杀伤敏感性...
【文章来源】：军事科学院北京市
【文章页数】：159 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
CD123CAR结构示意图
军事科学院博士学位论文图 1.2 分选后 CD3 阳性率及 CAR-T 转染后 CAR 表达效率2.3 AML 肿瘤细胞系及原代 AML 细胞 CD123 表达检测为了开展下一步的功能实验，我们检测了了 5 种 AML 细胞系以及原代 AML细胞。其中U937及K562为CD123阴性细胞，CD123阳性率分别为0.15%和0.30%KG-1a，MOLM-13，THP-1 及 AML-2 为 CD123 阳性，表达效率分别为 98.4%，97.9%99.8%和 90.1%（图 1.3）。
图 1.4 流式检测 CD123 CAR-T 细胞对 CD123+ AML 细胞的杀伤作用两样本之间比较采用 t 检验，数据表示为 X ±SEM（n=3），*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001和****P<0.0001。（2）LDH 释放实验同样，我们进行了 4 小时 LDH 释放试验对 CAR-T 的杀伤功能进行验证。对CD123 阴性 U937 细胞的没有显示特异性杀伤，效靶比从低到高分别为-3.068±4.016vs -7.139±3.402、-6.024±3.626 vs -2.119±1.729，对 CD123 阳性 AML 细胞 KG-1a，MOLM-13 和 CD123 阴性 U937 细胞的杀伤从效靶比从低到高分别为-2.319±4.450vs -2.019±2.580、19.294±2.281 vs 6.132±0.337；14.427±2.453 vs -1.347±5.627、91.849±14.090 vs 3.415±4.521（图 1.5）。CD123 CAR-T 显示出对 CD123+ AML 细胞 KG-1a 和 MOLM-13 杀伤更强的趋势。
【参考文献】：
期刊论文
[1]rhIFN-γ对白血病K562细胞CD123表达的影响[J]. 吕超绍,张进萍,宋建新,蒋雅先,沈涛,杨同华,撒亚莲. 昆明医科大学学报. 2016(08)
[2]人血管内皮细胞体外培养模型的建立[J]. 张淑雅,陈昕,单园园,颜贝,芦晓红,裴秀英. 宁夏医科大学学报. 2013(11)
本文编号：3402024
【文章来源】：军事科学院北京市
【文章页数】：159 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
CD123CAR结构示意图
军事科学院博士学位论文图 1.2 分选后 CD3 阳性率及 CAR-T 转染后 CAR 表达效率2.3 AML 肿瘤细胞系及原代 AML 细胞 CD123 表达检测为了开展下一步的功能实验，我们检测了了 5 种 AML 细胞系以及原代 AML细胞。其中U937及K562为CD123阴性细胞，CD123阳性率分别为0.15%和0.30%KG-1a，MOLM-13，THP-1 及 AML-2 为 CD123 阳性，表达效率分别为 98.4%，97.9%99.8%和 90.1%（图 1.3）。
图 1.4 流式检测 CD123 CAR-T 细胞对 CD123+ AML 细胞的杀伤作用两样本之间比较采用 t 检验，数据表示为 X ±SEM（n=3），*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001和****P<0.0001。（2）LDH 释放实验同样，我们进行了 4 小时 LDH 释放试验对 CAR-T 的杀伤功能进行验证。对CD123 阴性 U937 细胞的没有显示特异性杀伤，效靶比从低到高分别为-3.068±4.016vs -7.139±3.402、-6.024±3.626 vs -2.119±1.729，对 CD123 阳性 AML 细胞 KG-1a，MOLM-13 和 CD123 阴性 U937 细胞的杀伤从效靶比从低到高分别为-2.319±4.450vs -2.019±2.580、19.294±2.281 vs 6.132±0.337；14.427±2.453 vs -1.347±5.627、91.849±14.090 vs 3.415±4.521（图 1.5）。CD123 CAR-T 显示出对 CD123+ AML 细胞 KG-1a 和 MOLM-13 杀伤更强的趋势。
【参考文献】：
期刊论文
[1]rhIFN-γ对白血病K562细胞CD123表达的影响[J]. 吕超绍,张进萍,宋建新,蒋雅先,沈涛,杨同华,撒亚莲. 昆明医科大学学报. 2016(08)
[2]人血管内皮细胞体外培养模型的建立[J]. 张淑雅,陈昕,单园园,颜贝,芦晓红,裴秀英. 宁夏医科大学学报. 2013(11)
本文编号：3402024
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