自吞噬在食管鳞癌发生发展中的作用及其体外调控化疗敏感性的机制研究
发布时间：2021-09-29 00:30
背景与目的:食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）是中国食管癌中首要的病理亚型,我国食管癌发病率及死亡率均居世界首位。目前认为食管鳞癌的发生与发展是一个涉及多个癌基因在时间和空间上的激活或/和抑癌基因的失活为基础的多步骤过程。自吞噬作为II型程序性细胞死亡和肿瘤的发生、发展及对肿瘤细胞的化疗敏感性等均具有极其重要的关系,为肿瘤治疗提供了新的方向,已成为国际上肿瘤研究中的热点之一。本课题分为三个部分,通过对自吞噬特异性标志物Beclin 1在食管鳞癌发生、发展的变化及其对化疗敏感性的机制作了研究,为自吞噬作为食管鳞癌治疗的潜在靶点及其对患者预后的预测提供理论依据。方法:免疫组化对不同食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的Beclin 1及Bcl-2进行定量分析;采用吖啶橙及MDC染色荧光显微镜对自吞噬进行定性观察;CCK8检测细胞的增殖率;Transwell小室实验检测肿瘤细胞的侵袭能力;细胞转染及小干扰RNA构建稳定高表达和低表达Beclin1的细胞;Annexin V和PI双染流式细胞检测细胞凋亡率及细胞周期;Kaplan-Meier...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
正常食管组织及食管鳞
上海交通大学医学院博士学位论文25图3食管鳞癌组织及正常食管组织中Beclin1基因、蛋白水平的表达及其与临床病理提特征的关系（A）食管鳞癌组织及正常食管组织中Beclin1mRNA基因水平的表达；（B）食管鳞癌组织中Beclin1蛋白水平的表达与临床病理特征的关系；a：正常食管组织，b：食管鳞癌组织，c：高-中分化食管鳞癌组织，d：低分化食管鳞癌组织，e：早期食管鳞癌组织（I/II期），f：中晚期食管鳞癌组织（III/IV期），g：淋巴结阴性食管鳞癌组织，h：淋巴结阳性食管鳞癌组织Figure3.ExpressionofBeclin1mRNAandproteininESCCtumorandadjacentnormalesophagealtissues,anditsassociationwithclinicopathologicalfactors4.3Beclin1的表达调控EC9706细胞的侵袭力为了进一步明确Beclin1是否可以促进食管鳞癌细胞的侵袭力，我们通过质粒转染和小干扰RNA筛选获得Beclin1高表达及低表达的EC9706细胞，并经吖啶橙和WesternBlot定性定量验证（见图4）后与正常对照组EC9706细胞一起进行Transwell
上海交通大学医学院博士学位论文26小室实验，观察Beclin1表达升高和降低后食管鳞癌EC9706细胞的侵袭能力。我们的实验结果表明：与正常食管鳞癌细胞EC9706组相比，Beclin1高表达组的侵袭细胞数目显著减少（40.65±15.24vs243.32±38.23，P<0.01）；而Beclin1低表达组的侵袭细胞数目进一步增加（382.36±45.7vs243.32±38.23，P<0.01）见表3图4吖啶橙和WesternBlot定性定量验证Beclin1过表达及低表达A：WesternBlot验证转染和干扰就Beclin1过表达及低表达情况B:吖啶橙染色对自吞噬进行定性检测C：红绿荧光比对吖啶橙染色后自噬泡进行定量分析Figure4.ConfirmationofBeclin1overexpressionorknockdownABC
本文编号：3412841
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
正常食管组织及食管鳞
上海交通大学医学院博士学位论文25图3食管鳞癌组织及正常食管组织中Beclin1基因、蛋白水平的表达及其与临床病理提特征的关系（A）食管鳞癌组织及正常食管组织中Beclin1mRNA基因水平的表达；（B）食管鳞癌组织中Beclin1蛋白水平的表达与临床病理特征的关系；a：正常食管组织，b：食管鳞癌组织，c：高-中分化食管鳞癌组织，d：低分化食管鳞癌组织，e：早期食管鳞癌组织（I/II期），f：中晚期食管鳞癌组织（III/IV期），g：淋巴结阴性食管鳞癌组织，h：淋巴结阳性食管鳞癌组织Figure3.ExpressionofBeclin1mRNAandproteininESCCtumorandadjacentnormalesophagealtissues,anditsassociationwithclinicopathologicalfactors4.3Beclin1的表达调控EC9706细胞的侵袭力为了进一步明确Beclin1是否可以促进食管鳞癌细胞的侵袭力，我们通过质粒转染和小干扰RNA筛选获得Beclin1高表达及低表达的EC9706细胞，并经吖啶橙和WesternBlot定性定量验证（见图4）后与正常对照组EC9706细胞一起进行Transwell
上海交通大学医学院博士学位论文26小室实验，观察Beclin1表达升高和降低后食管鳞癌EC9706细胞的侵袭能力。我们的实验结果表明：与正常食管鳞癌细胞EC9706组相比，Beclin1高表达组的侵袭细胞数目显著减少（40.65±15.24vs243.32±38.23，P<0.01）；而Beclin1低表达组的侵袭细胞数目进一步增加（382.36±45.7vs243.32±38.23，P<0.01）见表3图4吖啶橙和WesternBlot定性定量验证Beclin1过表达及低表达A：WesternBlot验证转染和干扰就Beclin1过表达及低表达情况B:吖啶橙染色对自吞噬进行定性检测C：红绿荧光比对吖啶橙染色后自噬泡进行定量分析Figure4.ConfirmationofBeclin1overexpressionorknockdownABC
本文编号：3412841
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