微管抑制剂MT189的新生血管抑制作用及机制研究

发布时间：2021-10-20 13:09

　　肿瘤的持续生长依赖于新生血管的生成,肿瘤的血管网络已是当今肿瘤治疗的一个重要靶点。微管抑制剂是一类临床应用范围较广的抗肿瘤药物,具有潜在的血管生成抑制作用。MT系列化合物MT189是靶向秋水仙碱位点的新型微管抑制剂,MT189对肿瘤细胞的增殖抑制作用具有广谱性且对多药耐药细胞有同等程度的增殖抑制效应。MT189通过激活JNK通路,下调MCL-1蛋白水平,诱导凋亡发挥其抗肿瘤作用。本课题以已有的研究结果为基础,进一步研究MT189抑制血管新生的作用并深入解析其抑制血管新生的机制。本研究应用多个体内外血管生成模型对微管抑制剂MT189进行了系统的考察,确证其新生血管生成抑制作用。体外增殖抑制实验表明MT189能够有效抑制血管内皮细胞的增殖,呈现出明显的时间和浓度依赖性;在非细胞毒性作用条件下,Transwell及管腔形成实验阐明MT189对血管内皮细胞迁移与管腔形成两个环节具有很强的抑制作用;采用大鼠动脉环和鸡胚脲囊膜两个模型对MT189半体内及体内的血管新生抑制作用进行评价显示,MT189抑制大鼠动脉环微血管生成,并降低鸡胚脲囊膜上的血管密度,且均具有浓度依赖性。机制研究发现,MT189... 

【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院上海药物研究所)上海市

【文章页数】：112 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第1章 引言
    1.1 血管生成
        1.1.1 肿瘤血管生成的方式
        1.1.2 调控肿瘤血管生成的分子机制
        1.1.3 调控肿瘤血管生成的细胞机制
        1.1.4 提高靶向肿瘤治疗的策略
    1.2 血管生成抑制剂
        1.2.1 直接血管生成抑制剂
        1.2.2 间接血管生成抑制剂
    1.3 微管抑制剂
        1.3.1 微管抑制剂的抗血管生成机制
        1.3.2 微管抑制剂MT189
    1.4 存在问题与研究意义
    1.5 研究思路与方案
        1.5.1 MT189的新生血管抑制作用
        1.5.2 MT189抑制血管新生的分子机制
第2章 MT189新生血管生成抑制作用
    2.1 实验材料
        2.1.1 药品与试剂
        2.1.2 耗材与仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 SRB法
        2.2.3 Cell Counting Kit（CCK-8）法
        2.2.4 细胞迁移试验
        2.2.5 细胞管腔形成试验
        2.2.6 大鼠动脉环试验
        2.2.7 鸡胚脲囊膜血管生成实验
    2.3 实验结果
        2.3.1 MT189对内皮细胞增殖抑制作用
        2.3.2 MT189对内皮细胞增殖抑制作用的时效和量效关系
        2.3.3 MT189抑制内皮细胞迁移
        2.3.4 MT189抑制血管内皮细胞管腔形成
        2.3.5 MT189抑制大鼠动脉环微血管生成
        2.3.6 MT189抑制鸡胚脲囊膜血管生成
    2.4 讨论
第3章 MT189抑制VEGF刺激的血管生成和VEGF的转录与分泌
    3.1 实验材料
        3.1.1 药品与试剂
        3.1.2 耗材与仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 SRB法
        3.2.3 细胞迁移试验
        3.2.4 细胞管腔形成试验
        3.2.5 荧光定量PCR（Real-time PCR）
        3.2.6 ELISA法测定VEGF分泌
        3.2.7 Western blot实验
    3.3 实验结果
        3.3.1 MT189抑制VEGF刺激的血管内皮细胞增殖
        3.3.2 MT189抑制VEGF刺激的血管内皮细胞迁移
        3.3.3 MT189抑制VEGF刺激的血管内皮细胞管腔形成
        3.3.4 MT189抑制缺氧条件下肿瘤细胞VEGF的转录和分泌
        3.3.5 MT189抑制缺氧诱导的HIF-1α蛋白水平
        3.3.6 MT189抑制常氧条件下肿瘤细胞VEGF的转录和分泌
        3.3.7 MT189抑制内皮细胞VEGF的转录和分泌
        3.3.8 MT189对VEGF受体及磷酸化水平的影响
    3.4 讨论
第4章 MT189增强血管内皮细胞间连接的稳定性
    4.1 实验材料
        4.1.1 药品与试剂
        4.1.2 耗材与仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞培养
        4.2.2 Western blot实验
        4.2.3 免疫荧光共聚焦实验
    4.3 实验结果
        4.3.1 MT189对HUVEC细胞骨架蛋白和胞间连接蛋白的影响
        4.3.2 MT189处理导致细胞骨架微丝发生重构
        4.3.3 MT189引起Vinculin蛋白在细胞中分布的变化
        4.3.4 MT189对 β-Catenin蛋白的影响
        4.3.5 MT189增强VE-Cadherin与Vinculin及 β-Catenin蛋白的共定位
        4.3.6 MT189对肿瘤细胞骨架蛋白和胞间连接蛋白的影响
    4.4 讨论
第5章 MT189抑制黏着斑重塑
    5.1 实验材料
        5.1.1 药品与试剂
        5.1.2 耗材与仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 细胞培养
        5.2.2 Western blot实验
        5.2.3 免疫荧光共聚焦实验
    5.3 实验结果
        5.3.1 MT189对FAK和Paxillin蛋白量的影响
        5.3.2 MT189对Paxillin蛋白分布的影响
        5.3.3 MT189促进Vinculin与Paxillin的结合
        5.3.4 MT189抑制肿瘤细胞中Src、FAK及Paxillin蛋白的磷酸化
        5.3.5 MT189抑制缺氧诱导肿瘤细胞中Src及FAK蛋白的磷酸化
    5.4 讨论
第6章 MT189经由JNK-VEGF通路抑制血管新生
    6.1 实验材料
        6.1.1 药品与试剂
        6.1.2 耗材与仪器
    6.2 实验方法
        6.2.1 细胞培养
        6.2.2 细胞迁移实验
        6.2.3 细胞管腔形成实验
        6.2.4 Western blot实验
        6.2.5 荧光定量PCR
        6.2.6 ELISA法测定VEGF分泌
    6.3 实验结果
        6.3.1 JNK抑制剂减弱MT189对HUVEC细胞迁移抑制作用
        6.3.2 JNK抑制剂逆转MT189对HUVEC细胞分泌VEGF的抑制作用
        6.3.3 JNK抑制剂逆转MT189对肿瘤细胞分泌VEGF的抑制作用
        6.3.4 SP600125部分逆转MT189引起的JNK、c-Jun、Src及FAK变化
        6.3.5 MT189在缺氧条件下激活JNK通路及转录因子c-Jun
        6.3.6 MT189在缺氧条件下抑制Src和FAK的磷酸化
        6.3.7 JNK抑制剂减弱MT189对HUVEC细胞管腔形成的抑制作用
        6.3.8 JNK抑制剂减弱MT189抑制肿瘤细胞VEGF转录作用
        6.3.9 JNK抑制剂部分逆转MT189增加JNK和c-Jun磷酸化的作用
    6.4 讨论
第7章 总结与展望
参考文献
致谢
附录Ⅰ 作者简历及研究生在读期间发表的学术论文与研究成果
附录Ⅱ 发表论文全文或首页
附录Ⅲ 研究生在学期间参加的学术会议



本文编号：3446961