新生大鼠耳蜗K?lliker器细胞ATP来源及调控机制的研究

发布时间：2021-10-28 05:30

　　第一部分新生大鼠耳蜗K?lliker器支持细胞的原代培养目的:本部分研究旨在建立K?lliker器支持细胞体外原代培养体系,探讨其在离体培养培养条件下的生物学特性,生长模式。方法:取出生1到3天的SD大鼠耳蜗,在高倍显微镜下通过机械分离和酶消化相结合的办法分离出纯K?lliker器,进行体外组织培养,并对分离的K?lliker器支持细胞通过免疫组化和RT-PCR扩增的办法进行鉴定。结果:免疫组化染色证明分离的K?lliker器是单一的上皮组织,K?lliker器组织块体外培养后显微镜下发现支持细胞呈现典型的铺路石样外观,细胞间连接紧密,具有明显的增殖能力,在含血清培养基中易形成贴壁细胞;对Hes1,Hes5以及Math1基因进行RT-PCR分析,分离并培养的K?lliker器支持细胞特异性表达Hes1基因。结论:利用酶消化和机械解剖结合的方法可以分离出纯粹的有活性的K?lliker器,K?lliker器支持细胞体外培养具有增殖能力,可得到纯度较高的新生大鼠耳蜗K?lliker器支持细胞,并用于进一步的实验研究。第二部分新生大鼠耳蜗K?lliker器支持细胞中ATP存在形式的研究目的:本... 

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【部分图文】：

新生大鼠耳蜗基底膜的解剖分离×100Fig1SeparationofCochlearbasilarmembraneinNeonatalRats×100

上海交通大学博士学位论文12图2新生大鼠耳蜗上皮薄层组织的解剖分离×100Fig2IsolationofCESofnewbornratcochlea×100经嗜热菌蛋白酶和DNA酶的D-Hanks’溶液消化后，耳蜗上皮组织与结缔组织之间变得较为宽松，在高倍显微镜下，通过显微钨丝针可以轻松从基底膜上将上皮组织掀起，便于进一步分离。CES：耳蜗薄层上皮组织片Mesenchyme：间质组织图3分离后的含Klliker器，IHC，OHC的CES×500Fig3TheCESwasmostlycomposedoftheGERandtheorganofCorti,whichcontainsIHCsandOHCs×500在高倍显微镜下，四排毛细胞隐约可见。内、外毛细胞之间有一条微弱的暗带。Klliker器则表现是一条白丝带。在IHC和Klliker器之间有一个相对较暗的条带，因为Klliker器比IHC有更多的细胞层，这就导致了由于两者厚度的不同，

图3分离后的含Klliker器，IHC，OHC的CES×500

【参考文献】：
期刊论文
[1]支持细胞在哺乳动物耳蜗发育及功能中的作用[J]. 陈佳瑞,杨军.  国际耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2017 (04)
[2]新生大鼠耳蜗Klliker器在体凋亡的研究[J]. 杨军,何圆圆.  听力学及言语疾病杂志. 2016(04)
[3]新生大鼠Klliker器支持细胞体外凋亡及增殖的研究[J]. 何圆圆,杨军.  临床耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2015(02)
[4]新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞中ATP存在的证据[J]. 陈洁,何珊,杨军.  临床耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2010(10)
[5]大鼠耳蜗大上皮嵴细胞体外培养的实验观察[J]. 张媛,孙建和,胡吟燕,郑贵亮,翟所强.  中华耳鼻咽喉头颈外科杂志. 2007(10)
[6]大鼠耳蜗大上皮嵴的分离和鉴定[J]. 宋巍,胡吟燕,郭维,郑贵亮,翟所强,高维强.  临床耳鼻咽喉科杂志. 2005(13)



本文编号：3462347