基于反义lncRNA顺式竞争机制靶向乳腺癌IGF1R通路的研究

发布时间：2021-11-15 15:03

　　研究背景:类胰岛素生长因子信号轴（IGF/IGF1R）在乳腺癌发生发展、耐药、肿瘤干细胞自我更新中,起到至关重要的作用。其中,IGF1R在肿瘤中表达上调,并可作为肿瘤药物治疗的靶点。我们前期在探讨IGF1R通路调控时,采用“RNA介导染色质空间构象捕获”（R3C）技术,发现了一条与IGF1R顺式竞争、呈遗传印记表达的反义 lncRNA-IRAIN（IGF1R antisense imprinted noncoding RNA）。研究显示IRAIN为肿瘤抑制基因,在乳腺癌中表达下调,而IGF1R呈高表达,导致IGF1R/IRAIN 比例失常,促进肿瘤生长。为精准靶向乳腺癌这一IGF1R信号通路失控,我们创建了一种“反义lncRNA顺式竞争”（antisense lncRNAin situ cis-competition,ALIC）的全新靶向方法,在乳腺癌细胞中精准修正IGF1R/IRAIN 产物表达异常,达到肿瘤靶向治疗的目的。基于反义lncRNA-IRAIN与IGFIR启动子-外含子1区在序列上反方向重叠、在转录水平相互竞争的内源性基因调控原理,我们提出通过CRISPR Cas9技术在... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：88 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

IGF1R在肿瘤中过表达Figure1.1OverexpressionofIGF1Rintumors

吉林大学博士学位论文 0.6 体积的异丙醇，在-40℃条件下放置 30 min，在-80。此后在 4℃条件下用 12000 rpm 离心 20 min。并用 500 。残留乙醇充分晾干后，加入 20 ul 的 DEPC 水溶解 DNA，孵育 10 min 促进其溶解，测浓度，并进行进一步的 PCR

第 3 章 结 果第 3 章 结 果3.1 IRAIN 的靶向激活3.1.1 靶位点的选择根据靶基因序列设计，在靶基因启动子下游序列选择PAM前间区序列临近基序CRISPR Cas9-gRNA复合物特异性识别并结合的靶位点，包含由三个核苷酸NGG组成的PAM并可与gRNA分子互补结合。如图3.1.1

【参考文献】：
期刊论文
[1]CRISPR/Cas系统:RNA靶向的基因组定向编辑新技术[J]. 李君,张毅,陈坤玲,单奇伟,王延鹏,梁振,高彩霞.  遗传. 2013(11)
[2]IGF-1R as an anti-cancer target—trials and tribulations[J]. Helen X. Chen,Elad Sharon.  Chinese Journal of Cancer. 2013(05)
[3]乳腺癌诊治进展——多学科与个体化[J]. 沈坤炜,李宏为.  中国实用外科杂志. 2011(10)



本文编号：3497003