大叶蛇葡萄不同生长期黄酮类化合物的生物合成机制研究
发布时间：2021-11-19 07:59
大叶蛇葡萄（Ampelopsis megalophylla Diels et Gilg）为葡萄科蛇葡萄属植物,其主要药用部位为叶,临床上可用于治疗高血压等。课题组前期研究表明,黄酮类化合物为其主要活性成分,包括二氢杨梅素（蛇葡萄素）、杨梅苷、杨梅素和槲皮素等。这些黄酮类次生代谢产物在不同时期的叶中含量差异显著。本研究采用双向电泳技术对大叶蛇葡萄进行了蛋白组学研究,采用Illumina测序技术对其不同季节的叶片进行了转录组测序,获得了丰富的基因功能注释信息。同时基于不同季节叶片之间基因表达量的差异性,探讨了相关功能基因在该植物黄酮类化合物生物合成中发挥的作用。具体研究如下:1.采用高效液相色谱法分别同时测定了5月、8月及10月采收的大叶蛇葡萄叶中二氢杨梅素和杨梅苷两种活性成分的含量。结果表明,二氢杨梅素:5月>8月>10月;杨梅苷:5月>10月>8月。2.采用酚抽提法提取了5月、8月及10月大叶蛇葡萄叶片中的蛋白质,并进行了双向电泳分析。用考马斯亮蓝G-250染色,蛋白质在水平和垂直两个方向均得到了较好的分离,获得了背景清晰、分辨率和重复性均较好的图谱。选用了pH...
【文章来源】：湖北中医药大学湖北省
【文章页数】：157 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
混合对照品及样品色谱图
湖北中医药大学2020届博士学位论文6按照表1-5配制胎牛血清测定溶液。表1-5不同比例标准溶液的配制Table1-5Thepreparationofstandardsolutionwithdifferentproportion蛋白质浓度（μg/mL）5101520253035BSA（μL）1234567ddH2O（μL）9876543Bradford试剂（μL）1,0001,0001,0001,0001,0001,0001,000将以上各溶液混合于1.5mLEppendorf离心管中，涡旋振荡20s，充分混匀后用酶标仪测定最大吸收值，测定波长为595nm，根据测定结果绘制标准曲线（图1-2）。图1-2BSA标准曲线图Fig.1-2TheBSAstandardcurve2.1.3.2含量测定蛋白质团块溶解干燥后的蛋白质团块中加入200μL裂解液（表1-6），后反复吹打，直至蛋白质全部分散均匀。超声（80W，0.8s开，0.8s关）助溶后于冰上冷却。重复操作一次。后于4℃，12,000rpm，离心20min，吸取上清，转移至另一新的Eppendorf管中，备用。含量测定为了减小误差，使所测的数值准确，蛋白质进行两次定量：初步定量计算得到各样品的浓度，依据结果将所有样品的浓度尽量调整至接近；后进行第二次定量，结果见表1-7。
大叶蛇葡萄不同生长期黄酮类化合物的生物合成机制研究15图1-3电泳扫描图Fig.1-3Theelectrophoreticscanninggraph注：A、B、C分别代表N1、N2、N3样品的两次扫描结果，N1、N2、N3分别为5月、8月、10月采集的样品。样品等电点分布特点：5月和8月的大叶蛇葡萄叶片中蛋白质等电点主要在5.0~5.5之间，分别占21.38%、22.97%，而10月的样品蛋白质等电点ABC
【参考文献】：
期刊论文
[1]组学技术在人参皂苷活性研究中的应用进展[J]. 刘迪,陈佳伟,张聪,孙宏宇,冯宪敏. 食品工业. 2019(10)
[2]转录组测序技术的研究和应用进展[J]. 崔凯,吴伟伟,刁其玉. 生物技术通报. 2019(07)
[3]基于UPLC-QTOF-MSE的代谢组学方法研究三七皂苷提取物及注射液的化学组分（英文）[J]. 赵一懿,郭洪祝,陈有根,傅欣彤. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences. 2017(05)
[4]大叶蛇葡萄提取物对SMMC-7721细胞增殖抑制作用的研究[J]. 黄静,桂春,答国政,尚祥伟,明小芳,张秀桥. 中国现代中药. 2017(04)
[5]霉茶总黄酮提取物对自发性高血压大鼠胸主动脉重构的影响[J]. 刘静,郑国华,吴勇,谭永霞,张宝徽,田先翔. 中南药学. 2017(03)
[6]霉茶总黄酮对自发性高血压大鼠心脏的保护作用及机制研究[J]. 刘佩,郑国华,吴勇,谭永霞,张宝徽. 中国药房. 2016(34)
[7]筛选大叶蛇葡萄体外抗肿瘤活性物质[J]. 桂春,黄静,程佩佩,方玉,夏叶,张秀桥. 中成药. 2015(07)
[8]白芨查尔酮合成酶基因的克隆与分析[J]. 田爱梅,许忠民,张恩慧. 西北农业学报. 2014(07)
[9]霉茶黄酮对大鼠离体胸主动脉环的影响[J]. 王桂红,曾晶,田先翔,谭永霞,吴勇,朱(王献),郑国华. 天然产物研究与开发. 2014(06)
[10]大叶蛇葡萄乙醇提取物对2215细胞HBsAg、HBeAg表达抑制作用的实验研究[J]. 陈梅玲,陈夏静,李果,张秀桥. 中国中医药科技. 2012(04)
硕士论文
[1]大叶蛇葡萄不同器官黄酮类化合物代谢路径差异表达基因研究[D]. 答国政.湖北中医药大学 2017
[2]大叶蛇葡萄质量标准及其降压作用机理初步研究[D]. 张秋琼.湖北中医药大学 2011
本文编号：3504621
【文章来源】：湖北中医药大学湖北省
【文章页数】：157 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
混合对照品及样品色谱图
湖北中医药大学2020届博士学位论文6按照表1-5配制胎牛血清测定溶液。表1-5不同比例标准溶液的配制Table1-5Thepreparationofstandardsolutionwithdifferentproportion蛋白质浓度（μg/mL）5101520253035BSA（μL）1234567ddH2O（μL）9876543Bradford试剂（μL）1,0001,0001,0001,0001,0001,0001,000将以上各溶液混合于1.5mLEppendorf离心管中，涡旋振荡20s，充分混匀后用酶标仪测定最大吸收值，测定波长为595nm，根据测定结果绘制标准曲线（图1-2）。图1-2BSA标准曲线图Fig.1-2TheBSAstandardcurve2.1.3.2含量测定蛋白质团块溶解干燥后的蛋白质团块中加入200μL裂解液（表1-6），后反复吹打，直至蛋白质全部分散均匀。超声（80W，0.8s开，0.8s关）助溶后于冰上冷却。重复操作一次。后于4℃，12,000rpm，离心20min，吸取上清，转移至另一新的Eppendorf管中，备用。含量测定为了减小误差，使所测的数值准确，蛋白质进行两次定量：初步定量计算得到各样品的浓度，依据结果将所有样品的浓度尽量调整至接近；后进行第二次定量，结果见表1-7。
大叶蛇葡萄不同生长期黄酮类化合物的生物合成机制研究15图1-3电泳扫描图Fig.1-3Theelectrophoreticscanninggraph注：A、B、C分别代表N1、N2、N3样品的两次扫描结果，N1、N2、N3分别为5月、8月、10月采集的样品。样品等电点分布特点：5月和8月的大叶蛇葡萄叶片中蛋白质等电点主要在5.0~5.5之间，分别占21.38%、22.97%，而10月的样品蛋白质等电点ABC
【参考文献】：
期刊论文
[1]组学技术在人参皂苷活性研究中的应用进展[J]. 刘迪,陈佳伟,张聪,孙宏宇,冯宪敏. 食品工业. 2019(10)
[2]转录组测序技术的研究和应用进展[J]. 崔凯,吴伟伟,刁其玉. 生物技术通报. 2019(07)
[3]基于UPLC-QTOF-MSE的代谢组学方法研究三七皂苷提取物及注射液的化学组分（英文）[J]. 赵一懿,郭洪祝,陈有根,傅欣彤. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences. 2017(05)
[4]大叶蛇葡萄提取物对SMMC-7721细胞增殖抑制作用的研究[J]. 黄静,桂春,答国政,尚祥伟,明小芳,张秀桥. 中国现代中药. 2017(04)
[5]霉茶总黄酮提取物对自发性高血压大鼠胸主动脉重构的影响[J]. 刘静,郑国华,吴勇,谭永霞,张宝徽,田先翔. 中南药学. 2017(03)
[6]霉茶总黄酮对自发性高血压大鼠心脏的保护作用及机制研究[J]. 刘佩,郑国华,吴勇,谭永霞,张宝徽. 中国药房. 2016(34)
[7]筛选大叶蛇葡萄体外抗肿瘤活性物质[J]. 桂春,黄静,程佩佩,方玉,夏叶,张秀桥. 中成药. 2015(07)
[8]白芨查尔酮合成酶基因的克隆与分析[J]. 田爱梅,许忠民,张恩慧. 西北农业学报. 2014(07)
[9]霉茶黄酮对大鼠离体胸主动脉环的影响[J]. 王桂红,曾晶,田先翔,谭永霞,吴勇,朱(王献),郑国华. 天然产物研究与开发. 2014(06)
[10]大叶蛇葡萄乙醇提取物对2215细胞HBsAg、HBeAg表达抑制作用的实验研究[J]. 陈梅玲,陈夏静,李果,张秀桥. 中国中医药科技. 2012(04)
硕士论文
[1]大叶蛇葡萄不同器官黄酮类化合物代谢路径差异表达基因研究[D]. 答国政.湖北中医药大学 2017
[2]大叶蛇葡萄质量标准及其降压作用机理初步研究[D]. 张秋琼.湖北中医药大学 2011
本文编号：3504621
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