Toll样受体7激活对胰腺癌细胞株（BxPC-3）增殖、迁移与凋亡的影响及机制研究

发布时间：2017-05-10 17:02

  本文关键词：Toll样受体7激活对胰腺癌细胞株（BxPC-3）增殖、迁移与凋亡的影响及机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：近年来,胰腺癌在恶性肿瘤中的发病率及死亡率均呈现明显上升趋势。由于其起病隐匿、临床早期表现缺乏特征性,目前筛查还缺乏有效手段,大多数胰腺癌确诊时已属于中晚期,具有恶性程度高、手术切除率较低、易于复发、预后差、生存率低等特点。故针对胰腺癌的发病原因、肿瘤发生发展及侵袭、转移机制方面的基础研究取得了一定进展的同时,在外科手术、辅助与新辅助治疗及靶向治疗等方面不断有新技术、新方法及新药物问世。寻找胰腺癌的基因治疗靶点,一直是胰腺癌研究领域中的热点。在分子靶向治疗中,仍存在许多问题有待解决。目前的研究表明,Toll蛋白受体(Toll-like receptors,TLRs)作用:启动先天性免疫,以及桥接天然免疫与获得性免疫;在慢性炎症促进肿瘤的演进过程中,特别注意的是发现TLRs在一些肿瘤细胞胞膜内外表达,并且对于肿瘤的发生、演进及治疗上等方面,均起着重要作用。tlr7是tlrs家族的重要成员之一,近来研究发现,更多表明tlr7主要表达于某些类型肿瘤细胞,包括肺癌、肾脏癌、膀胱癌、皮肤癌、结直肠癌细胞,原因可能涉及有关于肿瘤细胞的来源和其所处的微环境。在这些细胞内,tlr7作为病原体的识别受体在于它结合其配体如单链rna(single-strandedrna,ssrna)或某些小干扰rna;tlr7结合其配体被激活后通过激发干扰素-Ⅰ型、细胞因子和化学增活素等产物,从而启动先天性和适应性的抗病毒免疫,主要识别病毒单链rna和一些人工合成的抗病毒小分子咪唑喹啉衍生物,包括gardiquimod、imiquimod、resiquimod等。tlr7激动剂已经应用实验与临床研究上,但其对肿瘤的作用仍存在争议;tlr7激动剂在肿瘤细胞免疫治疗中的应用,还需要进一步的研究。目前,尚无文献报道有关gardiquimod与胰腺癌关系的研究。本课题通过观察tlr7激动剂gardiquimod对胰腺癌细胞株(bxpc-3)增殖、迁移与凋亡的作用,旨意探究gardiquimod与胰腺癌之间的相互关系,并循证其可能存在作用的分子机制,tlr7激动剂gardiquimod可能对胰腺癌的靶向治疗提供一种新的策略。目的:tlr7的激活对胰腺癌细胞株(bxpc-3)增殖、迁移与凋亡的影响及其机制研究。方法:培养人原位胰腺腺癌bxpc-3细胞,通过实时荧光定量(real-time)pcr和westernblot分析,检测tlr7受体在mrna和蛋白水平上的表达。以不同剂量(0μg/ml、1.5μg/ml、3.0μg/ml、5.0μg/ml)的tlr7配体gardiquimod经不同的时间(1d、2d、3d、4d、5d)体外刺激bxpc-3细胞,mts及流式细胞术分析tlr7的激活对bxpc-3细胞增殖的影响。tlr7配体gardiquimod(3μg/ml)处理bxpc-3细胞(1-6d),划痕实验方法分析,检测其对bxpc-3细胞的迁移影响。tlr7配体gardiquimod(3μg/ml)经不同的时间(1-5d),体外刺激bxpc-3细胞,流式细胞术分析其对bxpc-3细胞的凋亡影响。培养bxpc-3细胞,tlr7配体gardiquimod(3μg/ml)经不同的时间(0min、12min、30min、1h、3h、6h、12h、24h、48h),体外刺激bxpc-3细胞,作用12h后,通过westernblot的方法分析,从而探讨细胞周期蛋白cyclinb1、cycline、bcl-2及bax在gardiquimod对人胰腺癌BxPC-3细胞增殖、迁移及凋亡调控中的作用。结果:Real-time PCR和Western blot分析证实,在人原位胰腺腺癌BxPC-3细胞中,mRNA及蛋白水平检查到TLR7表达,TLR7受体表达量低于人外周血单核细胞,表达相差20.12±7.254倍,差异有统计学意义(P0.01)。MTS、流式细胞术及划痕试验分析结果显示:TLR7配体Gardiquimod抑制BxPC-3细胞增殖,且具有时间及剂量依赖性(P0.05);Gardiquimod诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡,且具有时间依赖性(P0.05);Gardiquimod能够抑制胰腺癌BxPC-3细胞迁移,6天后伤痕愈合度仅达到60%,且具有时间依赖性依赖性(P0.01)。机制研究发现:通过western-blotting的方法来分析,TLR7受体激动剂Gardiquimod能够降低cyclin B1、cyclin E和Bcl-2,同时,Gardiquimod能够上调Bax,6h后可出现明显升高。结论:TLR7受体在人原位胰腺腺癌Bx PC-3细胞存在表达;TLR7激动剂Gardiquimod能够抑制胰腺癌BxPC-3细胞的增殖、迁移和诱导细胞凋亡。Gardiquimod对胰腺癌BxPC-3细胞增殖抑制及细胞凋亡诱导可能依赖细胞周期蛋白cyclin B1、cyclin E、Bcl-2及Bax的调控。
【关键词】：BxPC-3细胞 TLR7 Gardiquimod 增殖 迁移 凋亡
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.9
【目录】：

• 中英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 1 前言14-18
• 2 材料与方法18-43
• 2.1 实验材料18-22
• 2.2 主要器材和仪器设备22-24
• 2.3 方法24-43
• 2.4 统计学处理43
• 3 结果43-52
• 3.1 TLR7在Bx PC-3 细胞中m RNA及蛋白质的表达43-45
• 3.2 Gardiquimod抑制Bx PC-3 细胞增殖45-48
• 3.3 Gardiquimod诱导Bx PC-3 细胞凋亡48-49
• 3.4 Gardiquimod对Bx PC-3 细胞增殖抑制与诱导凋亡机制49-51
• 3.5 Gardiquimod对胰腺癌Bx PC-3 细胞迁移能力的影响51-52
• 4 讨论52-57
• 5 结论57
• 参考文献57-65
• 附录65-67
• 致谢67-68
• 综述68-104
• 参考文献92-104

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3 李非;刘大川;孙家邦;;生长激素对胰腺癌细胞株增殖活性的调控[J];中华肝胆外科杂志;2005年10期

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本文编号：355156