利用小鼠体外全胚胎培养模型评估神经管畸形发生的机制

发布时间：2021-12-28 02:20

　　目的:神经管畸形（neural tube defects,NTDs）是一种由多种因素引发的疾病,给社会和家庭带来沉重的经济和精神负担,严重影响着人口质量,但其发生机制并未完全阐明。体外全胚胎培养（Whole embryo culture,WEC）是可以实现高度模拟子宫内胚胎暴露于特定环境的一项技术,通过精准控制遗传和环境因素、精确定位神经管闭合相对狭窄的窗口期、缩小与母婴遗传相关敏感性差异等优势,为研究神经管畸形发病机制提供了便利途径。卵黄囊血循环建立早于神经系统和心血管系统形成,它的发育程度决定着胚胎发育速度,有研究表明卵黄囊发育与胚胎畸形率呈负相关,课题组拟利用WEC平台研究NTDs的发生机制,为干预神经管畸形发生提供新思路。本研究目的主要内容有:1利用小鼠体外WEC平台将E（embryo,E）7.0胎鼠体外培养5天,并在神经管闭合阶段详尽研究其形态学发生。2利用小鼠体外WEC平台分别建立丙戊酸、酒精、stavudine致NTDs模型并研究其发生机制;3利用小鼠体外WEC平台建立高糖诱导NTDs模型并探讨二甲双胍干防效果及机制。方法:1将E 7.0胎鼠体外培养5天和E 8.5胎鼠体... 

【文章来源】：山西医科大学山西省

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

提取大鼠即可离心血清注：A：大鼠腹主动脉采血术；B：采血管收集大鼠血清；C：血液离心；D：挤压纤维凝块；E：取上清；F：溶血血清；G：血清再次离心；H：箭头示冻存后的溶血血清

山西医科大学博士学位论文6E7.0的孕鼠通过颈椎脱臼处死，入75%酒精浸泡5min[50-51]。以下所有操作均需保持无菌程序。剖开孕鼠的腹部，取出子宫，无菌生理盐水冲洗，去除渗出的血液，并修剪多余的脂肪及子宫动脉，转移到室温无菌培养皿中，体式显微镜下用5号精细钟表镊对胚胎进行小心剥离：将镊子插入子宫壁和蜕膜之间的缝隙，用力撕开一个小口，然后一点点机械力撕，直到剥去全部子宫壁。全程使用机械力量撕除子宫，避免将胚胎挤出。定位蜕膜：从胚胎颜色较红、较宽的部分（胎盘）插入镊子，向两侧钝性分离，逐步将胚胎从蜕膜组织中分离出来，请注意保护胚胎顶端的外胎盘锥完整性，撕去卵黄囊表面的Reichert’s膜，需要保持卵黄囊、羊膜以及胚胎的完整性以及外胎盘锥和卵黄囊的连接性（见图1-2）。透过卵黄囊可以清晰的看到胚胎，选取具有完整外胎盘锥和卵黄囊的胚胎进行培养，E10.5之后的胚胎需要打开卵黄囊以及羊膜开放培养，详见本方法1.3.2.3部分。图1-2E7.0胚胎的提取注：A：从孕鼠腹腔取出子宫；B：将胚胎从子宫中剥出；C：将胚胎从脱膜组织内剥出；D：具有完整的外胎盘锥以及卵黄囊胚胎，可用于体外WEC。A和B标尺为500μm，C为200μm,D标尺为100μm。1.4.2.2E8.5胚胎的提取E8.5的孕鼠通过颈椎脱臼处死，入75%酒精浸泡5min[52]。以下所有操作详见1.3.2.1。简述为：剖开腹部，取出子宫（见图1-3A），清理子宫表面多余脂肪血管（见图1-3B）体式显微镜撕开蜕膜组织，外胎盘锥顶端血红色，似帽子覆盖于

E8.5胚胎的提取注：A：取出子宫；B：去除子宫周围多余的脂肪以及血管；C：将胚胎从子宫中剥出后将胚胎从脱膜组织内剥出一半；D：具有完整的外胎盘锥以及卵黄囊的胚胎，可用于体外WEC；；E：由


本文编号：3553209