大鼠角膜缘微环境细胞诱导口腔黏膜上皮干细胞转分化为角膜样上皮细胞治疗角膜缘干细胞缺乏症的研究
发布时间：2022-01-03 13:20
目的:培养的口腔黏膜上皮细胞因其可以用作眼表重建植片,而广泛应用于角膜缘干细胞缺乏症（Limbal stem cell deficiency,LSCD）的治疗。作为角膜缘微环境的重要组成部分,角膜缘微环境细胞（Limbal niche cells,LNCs）在成体干细胞分化的方向上起着关键作用。在本研究中,本课题组研究了LNCs在体外诱导大鼠口腔黏膜上皮细胞（OMECs）向角膜上皮样细胞的转分化的能力。方法:分别采用中性蛋白酶II和胶原酶A从大鼠体内分离了OMECs和LNCs,建立了由它们组成的三维或Transwell共培养体系。3T3和更新的LNCs也被用作Transwell系统的滋养层细胞,以比较它们支持OMECs的能力。采用气液交换法培养,获得复层上皮片。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质印迹（Western blot）、H-E染色和免疫荧光等方法对共培养的上皮片进行了表型检测。结果:在大多数共培养体系中,共培养的OMECs表现出角膜上皮样的铺路石形态,并表达角膜上皮特异性标记物CK12和Pax6。此外,本研究发现,与其他组相比,通过更新Transwell中的LNCs...
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
口腔黏膜上皮和角膜缘微环境细胞的分离和共培养
华中科技大学博士学位论文31图2：口腔黏膜、角膜中央和边缘的免疫荧光。大鼠口腔黏膜、角膜中央和角膜缘的CK3、CK12、Pax6或ΔNP63α（红色荧光）为单染，或ΔNp63α（绿色荧光）和Vim（红色荧光）为双染。核被dapi染色。比例尺=100μm。
华中科技大学博士学位论文32图3:角膜缘微环境细胞的分子表型特征。（A）对P0代LNC进行Vim（红色荧光）、CK12（绿色荧光）、ΔNP63α（绿色荧光）和Pax6（绿色荧光）双重染色。（B）对P3代ME-LNCs和DF-LNCs进行Vim（红色荧光）和CK12（绿色荧光）、ΔNP63α（绿色荧光）或Pax6（绿色荧光）双重染色。此外，对N-cadherin、Oct4或Sox2（比例尺=100μm）进行了染色。（C）在P3代DF-LNC和ME-LNC中表达的Oct4和Sox2的相对mRNA水平（**p<0.01）。（D）用Westernblot分析P3DF-LNC和ME-LNC中oct4和sox2的表达；用GAPDH作为内参。
本文编号：3566346
【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：76 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
口腔黏膜上皮和角膜缘微环境细胞的分离和共培养
华中科技大学博士学位论文31图2：口腔黏膜、角膜中央和边缘的免疫荧光。大鼠口腔黏膜、角膜中央和角膜缘的CK3、CK12、Pax6或ΔNP63α（红色荧光）为单染，或ΔNp63α（绿色荧光）和Vim（红色荧光）为双染。核被dapi染色。比例尺=100μm。
华中科技大学博士学位论文32图3:角膜缘微环境细胞的分子表型特征。（A）对P0代LNC进行Vim（红色荧光）、CK12（绿色荧光）、ΔNP63α（绿色荧光）和Pax6（绿色荧光）双重染色。（B）对P3代ME-LNCs和DF-LNCs进行Vim（红色荧光）和CK12（绿色荧光）、ΔNP63α（绿色荧光）或Pax6（绿色荧光）双重染色。此外，对N-cadherin、Oct4或Sox2（比例尺=100μm）进行了染色。（C）在P3代DF-LNC和ME-LNC中表达的Oct4和Sox2的相对mRNA水平（**p<0.01）。（D）用Westernblot分析P3DF-LNC和ME-LNC中oct4和sox2的表达；用GAPDH作为内参。
本文编号：3566346
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