矽肺中ZC3H4参与间质转化影响肺纤维化的作用机制研究
发布时间：2022-02-14 07:25
目的:矽肺是因持久、大量吸入游离二氧化硅（Silicon dioxide,SiO2）粉尘颗粒而导致的以肺部矽结节形成,伴有大量胶原沉积等病理表现为显著特点的全身性疾病。肺巨噬细胞吞噬SiO2后释放致纤维化因子作用于成纤维细胞,使其过度增殖、迁移致不可逆性肺纤维化。通过上皮细胞、内皮细胞间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT/endothelial-mesenchymal transition,EndoMT）而来的肌成纤维细胞参与了这一病理过程。课题组前期研究结果发现CCCH型锌指蛋白家族成员-MCPIP1在矽肺EndoMT中扮演了重要角色,ZC3H4作为MCPIP1同家族成员在矽肺间质转化中的作用不明。此外近年来研究发现干细胞治疗肺纤维化具有促进肺实质再上皮化、抑制肺部炎症反应、延缓肺纤维化等优势,但关于其对间质转化,尤其是对EndoMT这一病理过程的影响未见报道。因此本研究着重探讨在矽肺肺纤维化中ZC3H4对间质转化的调控作用,以及人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mese...
【文章来源】：东南大学江苏省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
SiO2诱导小鼠肺EMT现象（A）天狼猩红染色检测SiO2刺激对小鼠肺部胶原沉积的影响，图中的标尺为20μm
东南大学博士学位论文48图3ZC3H4在矽肺肺上皮组织中高表达（A）组织免疫荧光染色检测肺纤维化组小鼠与对照组小鼠肺组织上皮标志物E-cad和靶蛋白ZC3H4的表达和分布。图中的标尺为20μm。（B）组织免疫荧光染色检测健康捐献者和矽肺病人肺组织中上皮标志物E-cad和靶蛋白ZC3H4的表达和分布。图中的标尺为20μm。1.3.4SiO2促进上皮细胞中ZC3H4的表达升高为了进一步验证体内试验的结果，我们在体外实验中检测SiO2对肺上皮细胞ZC3H4表
第一章ZC3H4参与矽肺上皮间质转化的作用机制探索49达的影响，结果如图4A-B所示，SiO2刺激下，上皮细胞中ZC3H4表达升高。为了探究ZC3H4的调控效应，利用CRISPR/Cas9技术对ZC3H4的表达进行调控，WesternBlot结果显示，转染ZC3H4NIC质粒后肺上皮细胞MLE12中的ZC3H4被特异性地敲除（图4C-D）。图4SiO2促进上皮细胞中ZC3H4的表达升高（A）Westernblot检测SiO2对肺上皮细胞MLE-12中ZC3H4表达的影响。（B）统计学结果。n=5，和对照组0小时相比，*P<0.05。（C）Westernblot检测在MLE-12中用ZC3H4NIC质粒敲除蛋白ZC3H4的效率。（D）统计学结果。n=5，和Con-NIC组相比，*P<0.05。1.3.5ZC3H4调控SiO2诱导的EMT为了验证ZC3H4对EMT的影响，在上皮细胞中转染ZC3H4NIC质粒后，WesternBlot结果显示，敲除ZC3H4能显著抑制SiO2诱导的E-cad的下调，及间质蛋白COL1、COL3和α-SMA表达的升高，提示ZC3H4调控EMT（图5A-B）。细胞免疫荧光实验也进一步验证了这一现象（图5C）。由于上皮细胞在发生间质转化时伴有细胞骨架重排，因此EMT过程中可同时伴随细胞形态的变化，如图所示，SiO2刺激同时引起上皮细胞形态发生改变，细胞变为长梭形，扁平形，类似于间质细胞样形态，而敲除ZC3H4部分抑制细胞形态变化。
【参考文献】：
期刊论文
[1]2017年全国职业病报告情况[J]. 中国职业医学. 2018(03)
[2]Epithelial-mesenchymal, mesenchymal-epithelial, and endothelial-mesenchymal transitions in malignant tumors: An update[J]. Simona Gurzu,Sabin Turdean,Attila Kovecsi,Anca Otilia Contac,Ioan Jung. World Journal of Clinical Cases. 2015(05)
[3]A Biochemical Study on Combined Treatment of Experimental Silicosis with Tetradrine-PVNO and Tetradrine-QOHP in Rats[J]. YU LAN; ZOU CHANG-QI; LI YU-RUI; QU LEI; XING KANG-JI AND DU QING-CHENG (Institute of Occupational Medicine, Chinese Academy of Preventive Medicine, Beijing 100050, China). Biomedical and Environmental Sciences. 1995(03)
[4]The Effects of Tetrandrine （TT） and Polyvinylpyridine-N-Oxide （PVNO） on Gene Expression of Type Ⅰand Type ⅢCollagens during Experimental Silicosis[J]. LIU BING-CI; HE YU-XIAN; MIAO QING; WANG HAI-HUA AND YOU BAO-RONG (Institute of Occupational Medicine, 29 Nan Wei Road,Beijing 100050, China). Biomedical and Environmental Sciences. 1994(03)
本文编号：3624248
【文章来源】：东南大学江苏省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
SiO2诱导小鼠肺EMT现象（A）天狼猩红染色检测SiO2刺激对小鼠肺部胶原沉积的影响，图中的标尺为20μm
东南大学博士学位论文48图3ZC3H4在矽肺肺上皮组织中高表达（A）组织免疫荧光染色检测肺纤维化组小鼠与对照组小鼠肺组织上皮标志物E-cad和靶蛋白ZC3H4的表达和分布。图中的标尺为20μm。（B）组织免疫荧光染色检测健康捐献者和矽肺病人肺组织中上皮标志物E-cad和靶蛋白ZC3H4的表达和分布。图中的标尺为20μm。1.3.4SiO2促进上皮细胞中ZC3H4的表达升高为了进一步验证体内试验的结果，我们在体外实验中检测SiO2对肺上皮细胞ZC3H4表
第一章ZC3H4参与矽肺上皮间质转化的作用机制探索49达的影响，结果如图4A-B所示，SiO2刺激下，上皮细胞中ZC3H4表达升高。为了探究ZC3H4的调控效应，利用CRISPR/Cas9技术对ZC3H4的表达进行调控，WesternBlot结果显示，转染ZC3H4NIC质粒后肺上皮细胞MLE12中的ZC3H4被特异性地敲除（图4C-D）。图4SiO2促进上皮细胞中ZC3H4的表达升高（A）Westernblot检测SiO2对肺上皮细胞MLE-12中ZC3H4表达的影响。（B）统计学结果。n=5，和对照组0小时相比，*P<0.05。（C）Westernblot检测在MLE-12中用ZC3H4NIC质粒敲除蛋白ZC3H4的效率。（D）统计学结果。n=5，和Con-NIC组相比，*P<0.05。1.3.5ZC3H4调控SiO2诱导的EMT为了验证ZC3H4对EMT的影响，在上皮细胞中转染ZC3H4NIC质粒后，WesternBlot结果显示，敲除ZC3H4能显著抑制SiO2诱导的E-cad的下调，及间质蛋白COL1、COL3和α-SMA表达的升高，提示ZC3H4调控EMT（图5A-B）。细胞免疫荧光实验也进一步验证了这一现象（图5C）。由于上皮细胞在发生间质转化时伴有细胞骨架重排，因此EMT过程中可同时伴随细胞形态的变化，如图所示，SiO2刺激同时引起上皮细胞形态发生改变，细胞变为长梭形，扁平形，类似于间质细胞样形态，而敲除ZC3H4部分抑制细胞形态变化。
【参考文献】：
期刊论文
[1]2017年全国职业病报告情况[J]. 中国职业医学. 2018(03)
[2]Epithelial-mesenchymal, mesenchymal-epithelial, and endothelial-mesenchymal transitions in malignant tumors: An update[J]. Simona Gurzu,Sabin Turdean,Attila Kovecsi,Anca Otilia Contac,Ioan Jung. World Journal of Clinical Cases. 2015(05)
[3]A Biochemical Study on Combined Treatment of Experimental Silicosis with Tetradrine-PVNO and Tetradrine-QOHP in Rats[J]. YU LAN; ZOU CHANG-QI; LI YU-RUI; QU LEI; XING KANG-JI AND DU QING-CHENG (Institute of Occupational Medicine, Chinese Academy of Preventive Medicine, Beijing 100050, China). Biomedical and Environmental Sciences. 1995(03)
[4]The Effects of Tetrandrine （TT） and Polyvinylpyridine-N-Oxide （PVNO） on Gene Expression of Type Ⅰand Type ⅢCollagens during Experimental Silicosis[J]. LIU BING-CI; HE YU-XIAN; MIAO QING; WANG HAI-HUA AND YOU BAO-RONG (Institute of Occupational Medicine, 29 Nan Wei Road,Beijing 100050, China). Biomedical and Environmental Sciences. 1994(03)
本文编号：3624248
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