补中益气汤中用红芪替换黄芪的免疫调节作用比较及红芪多糖的抗免疫老化机制研究
发布时间：2022-09-17 16:55
研究背景:红芪是豆科植物多序岩黄芪的干燥根,有野生和栽培品种,主产于甘肃。在红芪所含的多种活性物质研究中,红芪多糖的抗衰老作用的深入研究为我们应对中国老龄化带来的挑战打开了一扇窗。在中医众多延缓衰老方中,补中益气汤以黄芪为君药,重在补益中气,调节机体的后天之本,而红芪和黄芪都具有“补气升阳、固表止汗……”等多方面功效。红芪主销广东、福建等地并出口,常被认为是黄芪的优质品种。本论文希望通过研究红芪/黄芪为君药的补中益气汤对免疫衰老的免疫调节作用差异;通过对红芪中具有抗衰老作用的红芪多糖对免疫衰老的影响研究,为合理开发甘肃道地药材红芪以及红芪的临床科学使用提供依据。目的:比较红芪/黄芪为君药的补中益气汤对SAMP8小鼠免疫功能的调节作用,寻找红芪调节免疫功能的作用机制。研究红芪提取物红芪多糖-3（Hedysari polysaccharide 3,HPS-3）对SAMP8小鼠免疫功能的调节机制,为红芪的合理使用提供理论依据。方法:1.以等量红芪替代补中益气汤中的君药黄芪,分别制备红芪补中益气汤和黄芪补中益气汤。取10只昆明小鼠做为青龄模型组,40只SAMP8小鼠随机分成衰老模型组、胸腺肽阳...
【文章页数】：143 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略词表
第一章 绪论
1.1 前言
1.2 补中益气汤应用概况
1.3 红芪与黄芪在种植(种质)、成分、功效方面的比较研究
1.4 红芪现代研究
1.4.1 红芪种植研究
1.4.2 红芪成分研究
1.4.3 红芪功效研究
1.5 红芪多糖研究
1.5.1 红芪多糖提取工艺研究
1.5.2 红芪多糖含量测定及多糖组分研究
1.5.3 红芪多糖功效及相关机制研究
1.6 Label free技术在中药作用机制研究中的作用
1.7 立题依据
1.8 技术路线图
第二章 用红芪替代补中益气汤中的君药黄芪对SAMP8小鼠抗免疫老化作用比较研究
2.1 材料
2.1.1 动物
2.1.2 试剂和仪器
2.1.3 药物
2.2 实验方法与步骤
2.2.1 分组及给药
2.2.2 小鼠脾淋巴细胞悬液制备
2.2.3 HE染色观察小鼠脾脏病理组织学变化
2.2.4 ELISA检测血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α的含量
2.2.5 流式细胞术检测T淋巴细胞亚群
2.2.6 实时荧光定量PCR检测脾淋巴细胞中p38MAPK mRNA表达量
2.2.7 Western Blot检测脾淋巴细胞中p38MAPK蛋白的表达
2.2.8 免疫组化法检测小鼠脾脏p38MAPK蛋白
2.2.9 统计学方法
2.3 实验结果
2.3.1 补中益气汤对SAMP8小鼠生命状态的影响
2.3.2 补中益气汤对SAMP8小鼠脾脏病理组织学变化的影响
2.3.3 补中益气汤对SAMP8小鼠血清细胞因子含量的影响
2.3.4 补中益气汤对SAMP8小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的影响
2.3.5 补中益气汤对SAMP8 小鼠脾淋巴细胞中的p38MAPK mRNA的影响
2.3.6 补中益气汤对SAMP8 小鼠淋巴细胞中的p38MAPK蛋白表达的影响
2.3.7 补中益气汤对SAMP8 小鼠脾脏p38MAPK蛋白表达的影响
2.4 讨论
2.5 结论
第三章 红芪多糖促进小鼠脾淋巴细胞增殖的实验研究
3.1 实验动物
3.2 试剂与仪器
3.2.1 试剂
3.2.2 仪器
3.3 实验过程
3.3.1 红芪多糖制备
3.3.2 小鼠脾淋巴细胞悬液的制备
3.3.3 MTT法测定HPS-3 对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
3.3.4 ELISA测定HPS-3 对淋巴细胞培养上清细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α和 IL-4 的影响
3.3.5 FCM测定HPS-3 对小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的影响
3.3.6 透射电镜观察HPS-3对脾淋巴细胞超微结构的改变
3.4 统计学方法
3.5 实验结果
3.5.1 HPS-3对小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响
3.5.2 HPS-3 对小鼠脾淋巴细胞产生Th1/Th2 细胞因子的影响
3.5.3 HPS-3对小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的影响
3.5.4 HPS-3对脾淋巴细胞超微结构的改变
3.6 讨论
3.7 结论
第四章 Label Free蛋白质组学研究红芪多糖对衰老小鼠脾淋巴细胞作用的机制
4.1 实验材料
4.1.1 动物
4.1.2 试剂
4.1.3 仪器
4.1.4 软件工具和相关数据库
4.2 实验方法
4.2.1 样本制备
4.2.2 质谱数据采集
4.2.3 数据分析
4.2.4 生物信息分析
4.2.5 Western Blot验证差异蛋白的表达
4.3 结果
4.3.1 质谱分析数据总体情况
4.3.2 组间显著差异表达蛋白解析
4.3.3 差异蛋白GO分析
4.3.4 差异蛋白聚类分析
4.3.5 差异蛋白KEGG通路分析
4.3.6 STRING分析
4.3.7 上调差异蛋白Reactome Pathways通路分析
4.3.8 Western Blot验证上调的免疫调节相关的差异表达蛋白
4.4 讨论
4.5 结论
第五章 结论
附 质谱信息
参考文献
在学期间的研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]p38MAPK信号通路参与BMP2诱导MSCs的归巢效应研究[J]. 赵淦琳炜,杨毅. 中国临床研究. 2020(04)
[2]补中益气汤联合不同营养方式对肝癌切除术后大鼠免疫功能的影响[J]. 宋新梅,马晓勇,曹磊,吴煜龙,郭志学,王颖. 世界中医药. 2019(11)
[3]不同年龄SD大鼠脾脏组织显微结构观察[J]. 黄静,郭洋,项涛,吴大鹏,陈丹,杨正伟,李阳友. 实验动物与比较医学. 2019(05)
[4]香菇多糖的抗肿瘤作用机制研究进展[J]. 苏畅,李小江,贾英杰,张晶. 中草药. 2019(06)
[5]慢性乙型肝炎患者外周血CD8+CD28+T淋巴细胞百分比的变化及其临床意义探讨[J]. 周积云,马勇,丁体龙,涂远航,陈策. 实用肝脏病杂志. 2019(02)
[6]香菇多糖联合AdIRF3通过刺激IFN-β表达抑制乳腺癌生长[J]. 苏畅,贾英杰,李小江,刘宏根,张丽丽,邬明歆,李文杰,张晶. 中草药. 2019(05)
[7]衰老对于实验性小鼠结肠炎的影响及机制[J]. 刘爱玲,汪红英,吕红,钱家鸣. 中国医学科学院学报. 2019(01)
[8]甘肃红芪和黄芪血清移行成分对比研究[J]. 许京,叶迎,王瑞海,苗青,王震,聂颖兰,刘丽梅. 中国中医基础医学杂志. 2019(02)
[9]补中益气汤加减对糖尿病心肌病大鼠心功能及心肌细胞FABP3,PPARγ蛋白表达的影响[J]. 刘军彤,杨宇峰,王仁和,石岩. 中国实验方剂学杂志. 2019(12)
[10]微波提取红芪总多糖工艺及其抗氧化活性的研究[J]. 袁菊丽,王亚丽,黄钰芳. 应用化工. 2019(02)
博士论文
[1]白细胞介素1受体相关激酶（IRAK）家族在基于Toll样受体4信号通路介导的急性前葡萄膜炎发病中所起作用及红芪多糖干预机制的研究[D]. 余烁.首都医科大学 2017
[2]膀胱癌标志物的蛋白质组学研究[D]. 郭娇.中国科学院北京基因组研究所 2016
[3]黄芪及拆分组分对脾虚水湿不化模型大鼠的影响及分子机制研究[D]. 赵文晓.山东中医药大学 2015
[4]黑灵芝多糖的抗肿瘤活性及其分子机制初探[D]. 张莘莘.南昌大学 2014
[5]湖北麦冬多糖质量控制与抗糖尿病活性研究[D]. 肖作奇.华中科技大学 2014
[6]当归芍药散抗衰老活性的药效学和药代动力学研究[D]. 曾宇.广州中医药大学 2013
[7]红芪多糖调节免疫及抗肿瘤作用的蛋白质组学研究[D]. 卫东锋.兰州大学 2012
[8]红枣多糖的分子修饰与生物活性研究[D]. 焦中高.西北农林科技大学 2012
[9]1.复方四君子汤水煎剂的化学研究 2.多序岩黄芪化学成分的研究[D]. 刘扬.中国协和医科大学 2006
[10]调治脾胃方药干预精神神经活动的理论与实验研究[D]. 贺娟.北京中医药大学 2004
硕士论文
[1]补中益气汤的相关文献研究[D]. 李晓丹.河南中医学院 2014
[2]红芪多糖HPS1的提取分离及HPS1中四个组分结构特征和抗补体活性研究[D]. 杨涛.兰州大学 2014
[3]红芪多糖抗氧化作用研究[D]. 杨小虎.甘肃农业大学 2010
[4]两种中草药提取物对小鼠免疫功能和肉鸡生产性能的影响[D]. 秦亮.甘肃农业大学 2010
本文编号：3679603
【文章页数】：143 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略词表
第一章 绪论
1.1 前言
1.2 补中益气汤应用概况
1.3 红芪与黄芪在种植(种质)、成分、功效方面的比较研究
1.4 红芪现代研究
1.4.1 红芪种植研究
1.4.2 红芪成分研究
1.4.3 红芪功效研究
1.5 红芪多糖研究
1.5.1 红芪多糖提取工艺研究
1.5.2 红芪多糖含量测定及多糖组分研究
1.5.3 红芪多糖功效及相关机制研究
1.6 Label free技术在中药作用机制研究中的作用
1.7 立题依据
1.8 技术路线图
第二章 用红芪替代补中益气汤中的君药黄芪对SAMP8小鼠抗免疫老化作用比较研究
2.1 材料
2.1.1 动物
2.1.2 试剂和仪器
2.1.3 药物
2.2 实验方法与步骤
2.2.1 分组及给药
2.2.2 小鼠脾淋巴细胞悬液制备
2.2.3 HE染色观察小鼠脾脏病理组织学变化
2.2.4 ELISA检测血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α的含量
2.2.5 流式细胞术检测T淋巴细胞亚群
2.2.6 实时荧光定量PCR检测脾淋巴细胞中p38MAPK mRNA表达量
2.2.7 Western Blot检测脾淋巴细胞中p38MAPK蛋白的表达
2.2.8 免疫组化法检测小鼠脾脏p38MAPK蛋白
2.2.9 统计学方法
2.3 实验结果
2.3.1 补中益气汤对SAMP8小鼠生命状态的影响
2.3.2 补中益气汤对SAMP8小鼠脾脏病理组织学变化的影响
2.3.3 补中益气汤对SAMP8小鼠血清细胞因子含量的影响
2.3.4 补中益气汤对SAMP8小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的影响
2.3.5 补中益气汤对SAMP8 小鼠脾淋巴细胞中的p38MAPK mRNA的影响
2.3.6 补中益气汤对SAMP8 小鼠淋巴细胞中的p38MAPK蛋白表达的影响
2.3.7 补中益气汤对SAMP8 小鼠脾脏p38MAPK蛋白表达的影响
2.4 讨论
2.5 结论
第三章 红芪多糖促进小鼠脾淋巴细胞增殖的实验研究
3.1 实验动物
3.2 试剂与仪器
3.2.1 试剂
3.2.2 仪器
3.3 实验过程
3.3.1 红芪多糖制备
3.3.2 小鼠脾淋巴细胞悬液的制备
3.3.3 MTT法测定HPS-3 对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
3.3.4 ELISA测定HPS-3 对淋巴细胞培养上清细胞因子IL-2、IFN-γ、TNF-α和 IL-4 的影响
3.3.5 FCM测定HPS-3 对小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的影响
3.3.6 透射电镜观察HPS-3对脾淋巴细胞超微结构的改变
3.4 统计学方法
3.5 实验结果
3.5.1 HPS-3对小鼠脾淋巴细胞增殖能力的影响
3.5.2 HPS-3 对小鼠脾淋巴细胞产生Th1/Th2 细胞因子的影响
3.5.3 HPS-3对小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的影响
3.5.4 HPS-3对脾淋巴细胞超微结构的改变
3.6 讨论
3.7 结论
第四章 Label Free蛋白质组学研究红芪多糖对衰老小鼠脾淋巴细胞作用的机制
4.1 实验材料
4.1.1 动物
4.1.2 试剂
4.1.3 仪器
4.1.4 软件工具和相关数据库
4.2 实验方法
4.2.1 样本制备
4.2.2 质谱数据采集
4.2.3 数据分析
4.2.4 生物信息分析
4.2.5 Western Blot验证差异蛋白的表达
4.3 结果
4.3.1 质谱分析数据总体情况
4.3.2 组间显著差异表达蛋白解析
4.3.3 差异蛋白GO分析
4.3.4 差异蛋白聚类分析
4.3.5 差异蛋白KEGG通路分析
4.3.6 STRING分析
4.3.7 上调差异蛋白Reactome Pathways通路分析
4.3.8 Western Blot验证上调的免疫调节相关的差异表达蛋白
4.4 讨论
4.5 结论
第五章 结论
附 质谱信息
参考文献
在学期间的研究成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]p38MAPK信号通路参与BMP2诱导MSCs的归巢效应研究[J]. 赵淦琳炜,杨毅. 中国临床研究. 2020(04)
[2]补中益气汤联合不同营养方式对肝癌切除术后大鼠免疫功能的影响[J]. 宋新梅,马晓勇,曹磊,吴煜龙,郭志学,王颖. 世界中医药. 2019(11)
[3]不同年龄SD大鼠脾脏组织显微结构观察[J]. 黄静,郭洋,项涛,吴大鹏,陈丹,杨正伟,李阳友. 实验动物与比较医学. 2019(05)
[4]香菇多糖的抗肿瘤作用机制研究进展[J]. 苏畅,李小江,贾英杰,张晶. 中草药. 2019(06)
[5]慢性乙型肝炎患者外周血CD8+CD28+T淋巴细胞百分比的变化及其临床意义探讨[J]. 周积云,马勇,丁体龙,涂远航,陈策. 实用肝脏病杂志. 2019(02)
[6]香菇多糖联合AdIRF3通过刺激IFN-β表达抑制乳腺癌生长[J]. 苏畅,贾英杰,李小江,刘宏根,张丽丽,邬明歆,李文杰,张晶. 中草药. 2019(05)
[7]衰老对于实验性小鼠结肠炎的影响及机制[J]. 刘爱玲,汪红英,吕红,钱家鸣. 中国医学科学院学报. 2019(01)
[8]甘肃红芪和黄芪血清移行成分对比研究[J]. 许京,叶迎,王瑞海,苗青,王震,聂颖兰,刘丽梅. 中国中医基础医学杂志. 2019(02)
[9]补中益气汤加减对糖尿病心肌病大鼠心功能及心肌细胞FABP3,PPARγ蛋白表达的影响[J]. 刘军彤,杨宇峰,王仁和,石岩. 中国实验方剂学杂志. 2019(12)
[10]微波提取红芪总多糖工艺及其抗氧化活性的研究[J]. 袁菊丽,王亚丽,黄钰芳. 应用化工. 2019(02)
博士论文
[1]白细胞介素1受体相关激酶（IRAK）家族在基于Toll样受体4信号通路介导的急性前葡萄膜炎发病中所起作用及红芪多糖干预机制的研究[D]. 余烁.首都医科大学 2017
[2]膀胱癌标志物的蛋白质组学研究[D]. 郭娇.中国科学院北京基因组研究所 2016
[3]黄芪及拆分组分对脾虚水湿不化模型大鼠的影响及分子机制研究[D]. 赵文晓.山东中医药大学 2015
[4]黑灵芝多糖的抗肿瘤活性及其分子机制初探[D]. 张莘莘.南昌大学 2014
[5]湖北麦冬多糖质量控制与抗糖尿病活性研究[D]. 肖作奇.华中科技大学 2014
[6]当归芍药散抗衰老活性的药效学和药代动力学研究[D]. 曾宇.广州中医药大学 2013
[7]红芪多糖调节免疫及抗肿瘤作用的蛋白质组学研究[D]. 卫东锋.兰州大学 2012
[8]红枣多糖的分子修饰与生物活性研究[D]. 焦中高.西北农林科技大学 2012
[9]1.复方四君子汤水煎剂的化学研究 2.多序岩黄芪化学成分的研究[D]. 刘扬.中国协和医科大学 2006
[10]调治脾胃方药干预精神神经活动的理论与实验研究[D]. 贺娟.北京中医药大学 2004
硕士论文
[1]补中益气汤的相关文献研究[D]. 李晓丹.河南中医学院 2014
[2]红芪多糖HPS1的提取分离及HPS1中四个组分结构特征和抗补体活性研究[D]. 杨涛.兰州大学 2014
[3]红芪多糖抗氧化作用研究[D]. 杨小虎.甘肃农业大学 2010
[4]两种中草药提取物对小鼠免疫功能和肉鸡生产性能的影响[D]. 秦亮.甘肃农业大学 2010
本文编号：3679603
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