巨噬细胞膜包被纳米药物的制备及其抗动脉粥样硬化研究

发布时间：2022-10-18 20:03

　　动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是一种典型的慢性炎症性血管病变,是脑血管病、冠心病和外周动脉疾病等缺血性心脑血管病的共同病理学基础,严重危害人类健康。目前,临床上常采用口服降脂或抗炎药物来抑制AS的发展,然而传统的口服药物治疗存在利用率低、见效慢、毒副作用严重等问题。纳米药物递送系统能够增溶药物、提高药物半衰期、改善药物体内分布、降低毒副作用,在临床AS诊断和治疗中具有极大的应用价值和广阔的市场前景。但是,传统的纳米药物递送系统难以被正常的生物机体交互认可,不可避免地被作为“非己”异物被机体清除,难以靶向输送药物到靶病变部位。因此,基于AS病理特点构建具有药物缓释及靶向药物递送功能的仿生纳米药物系统是实现AS高效、安全治疗的关键。本研究基于AS的慢性炎症、病变部位EPR效应及内皮高表达粘附分子的病理特点,利用具有优异生物相容性且可降解的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）作为纳米载体,负载具有抗AS功能的药物-雷帕霉素（RAP）,制备纳米药物RAPNPs;并进一步协同天然巨噬细胞的免疫逃逸及特异性识别炎症内皮功能,将巨噬细胞膜（MM）包被于RAPNPs纳米药物表面,制... 

【文章页数】：137 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
主要缩写词
1 绪论
    1.1 动脉粥样硬化简介
    1.2 动脉粥样硬化纳米给药的靶向方式
        1.2.1 被动靶向
        1.2.2 主动靶向
    1.3 利用纳米药物治疗动脉粥样硬化的方式
        1.3.1 管理血脂水平
        1.3.2 动脉粥样硬化抗炎治疗
    1.4 细胞膜包被纳米粒子技术
        1.4.1 细胞膜包被纳米粒子的制备
        1.4.2 包被纳米粒子的细胞膜种类
    1.5 问题的提出及研究思路
        1.5.1 问题的提出
        1.5.2 研究思路
    1.6 研究内容及研究意义
        1.6.1 主要研究内容
        1.6.2 研究的意义
    1.7 本研究的创新性之处
2 巨噬细胞膜包被纳米药物构建及表征
    2.1 引言
    2.2 实验材料与设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 RAPNPs的制备
        2.3.2 巨噬细胞膜的提取
        2.3.3 仿生纳米药物(MM/RAPNPs)的制备
        2.3.4 RAPNPs、DiDNPs及 MMRAPNPs的粒径、电位及形貌表征
        2.3.5 RAPNPs载药量和包封率测量
        2.3.6 RAPNPs及 MM/RAPNPs的体外药物释放表征
        2.3.7 共定位实验表征
        2.3.8 MM/RAPNPs蛋白组成表征
        2.3.9 MM/RAPNPs表面糖蛋白含量测定
        2.3.10 蛋白免疫印迹表征MM/RAPNPs特征性蛋白
        2.3.11 统计分析
    2.4 实验结果与讨论
        2.4.1 RAPNPs粒径、电位表征
        2.4.2 DiDNPs粒径、电位表征
        2.4.3 RAPNPs载药量及包封率
        2.4.4 MM/RAPNPs粒径、电位及形貌表征
        2.4.5共定位实验
        2.4.6 MM/RANPs蛋白组成表征
        2.4.7 MM/RANPs表面巨噬细胞膜取向表征
        2.4.8 MM/RAPNPs特征性蛋白表征
        2.4.9 MM/RAPNPs体外药物释放行为研究
    2.5 本章小结
3 巨噬细胞膜包被纳米药物的体外评价
    3.1 引言
    3.2 实验材料与设备
    3.3 实验方法
        3.3.1溶血实验
        3.3.2 血浆中血小板α颗粒膜蛋白的检测
        3.3.3 血清中蛋白吸附
        3.3.4 细胞培养
        3.3.5 体外巨噬细胞吞噬
        3.3.6 体外炎症内皮细胞吞噬
        3.3.7体外抑制巨噬细胞及平滑肌细胞的增殖实验
        3.3.8 统计分析
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 溶血实验
        3.4.2 血浆中血小板α颗粒膜蛋白检测
        3.4.3 血清中蛋白吸附
        3.4.4 体外巨噬细胞吞噬
        3.4.5 体外炎症内皮细胞吞噬
        3.4.6 体外抑制巨噬细胞及平滑肌细胞的增殖
    3.5 本章小结
4 巨噬细胞膜包被纳米药物体内抗动脉粥样硬化及安全性评价
    4.1 引言
    4.2 实验材料及设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 体内长效循环检测
        4.3.2 ApoE~(-/-)小鼠AS造模
        4.3.3 体内靶向AS研究
        4.3.4 仿生纳米药物对ApoE~(-/-)小鼠AS的治疗
        4.3.5 仿生纳米药物治疗后组织样本的采集
        4.3.6 小鼠主动脉的油红O染色
        4.3.7 小鼠主动脉弓根部冰冻切片制备
        4.3.8 小鼠主动脉弓根部冰冻切片油红O染色
        4.3.9 小鼠主动脉弓根部冰切片的MASSON及甲苯胺蓝染色
        4.3.10 小鼠主动脉弓根部切片的免疫组化染色
        4.3.11 小鼠主要脏器石蜡切片制备及HE染色
        4.3.12 血液指标检测
        4.3.13 统计分析
    4.4 实验结果与讨论
        4.4.1 巨噬细胞膜包被纳米粒子的体内长效循环
        4.4.2 巨噬细胞膜包被纳米粒子对AS部位的靶向性及体内聚集
        4.4.3 仿生纳米药物对ApoE~(-/-)小鼠斑块治疗效果
        4.4.4 仿生纳米药物对ApoE~(-/-)小鼠治疗后斑块稳定性影响
        4.4.5 仿生纳米药物治疗对Apo E~(-/-)小鼠斑块内巨噬细胞及平滑肌细胞的影响
        4.4.6 仿生纳米药物对ApoE~(-/-)小鼠治疗后的安全性评价
    4.5 本章小结
5 结论与展望
    5.1 主要结论
    5.2 后续研究工作的展望
参考文献
附录
    A.作者在攻读学位期间发表的论文目录：
    B.作者在攻读学位期间参与的科研项目
    C.学术论文数据集
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]High-density lipoprotein and atherosclerosis: Roles of lipid transporters[J]. Yoshinari Uehara,Keijiro Saku.  World Journal of Cardiology. 2014(10)



本文编号：3692963