KDM1A通过表观修饰抑制TIMP1/MMP9途径增强甲状腺乳头状癌的迁移和侵袭

发布时间：2022-12-10 17:42

　　目的:近年来,甲状腺恶性肿瘤的发病率呈逐年上升趋势,现已是全球范围内发病率上升最快的神经内分泌系统恶性肿瘤,在年轻女性中,其发病率超过乳腺癌,成为30岁以下女性最多见的恶性肿瘤。甲状腺恶性肿瘤可分为4个病理亚型,分别是甲状腺乳头状癌（papillary thyroid cancer,PTC）、甲状腺滤泡状癌（folicular thyroid cancer,FTC）、甲状腺髓样癌（medullary thyroid cancer,MTC）及甲状腺未分化癌（anaplastic thyroid cancer,ATC）。其中PTC是最常见的甲状腺癌病理亚型,约占全部甲状腺癌的80%~90%。大部分PTC患者在彻底的手术切除及放射性碘（radioactive iodine,RAI）治疗后预后良好,5年生存率超过95%。但其易发生早期淋巴结转移。且淋巴结转移是PTC患者预后的独立危险因素,这部分患者生存率骤降至40%。组蛋白甲基化异常是肿瘤发生、发展的常见原因。组蛋白去甲基化酶1A（KDM1A）可以与多种蛋白质复合物（Corest、NuRD和RCOR2）、受体（雌激素、雄激素和TLX）、非编码... 

【文章页数】：96 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分:KDM1A在 PTC及其对应癌旁组织中的表达情况
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 组织标本
            2.1.2 细胞系
            2.1.3 主要试剂
            2.1.4 主要仪器
        2.2 方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 RNA提取及反转录
            2.2.3 Real time PCR
            2.2.4 总蛋白提取
            2.2.5 蛋白浓度定量(BCA法)
            2.2.6 蛋白免疫印迹(Western blot)
            2.2.7 免疫组织化学染色(IHC)
        2.3 统计学分析
    3 实验结果
        3.1 常见的KDMs在 PTC中的表达情况
        3.2 KDM1A在 PTC中的表达情况
        3.3 KDM1A与 PTC患者临床特性的关系
        3.4 KDM1A在 PTC细胞系及正常甲状腺细胞系中的表达
    4 讨论
    5 结论
第二部分:KDM1A对 PTC细胞迁移、侵袭能力作用的研究
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 细胞系
            2.1.2 主要试剂
            2.1.4 主要仪器
        2.2 方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 细胞转染
            2.2.3 RNA提取及反转录
            2.2.4 Real time PCR
            2.2.5 总蛋白提取
            2.2.6 蛋白浓度定量(BCA法)
            2.2.7 蛋白免疫印迹(Western blot)
            2.2.8 Transwell实验
            2.2.9 细胞划痕实验
            2.2.10 裸鼠尾静脉注射肺转移模型
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 使用si-KDM1A的干扰效率
        3.2 下调KDM1A对细胞迁移、侵袭能力的影响
        3.3 裸鼠经尾静脉注射肺转移实验
    4 讨论
    5 结论
第三部分:KDM1A通过使TIMP1 转录起始区域H3K4 me2 去甲基化,抑制其表达发挥促进肿瘤侵袭转移的作用
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 材料
            2.1.1 细胞系
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 方法
            2.2.1 细胞培养
            2.2.2 细胞转染
            2.2.3 RNA提取及反转录
            2.2.4 Real time PCR
            2.2.5 总蛋白提取
            2.2.6 BCA蛋白浓度定量法
            2.2.7 蛋白免疫印迹(Western blot)
            2.2.8 Transwell实验
            2.2.9 细胞划痕实验
            2.2.10 明胶酶谱法
            2.2.11 染色质免疫共沉淀技术
        2.3 统计学分析
    3 结果
        3.1 转染si-KDM1A后下游侵袭相关蛋白的变化
        3.2 TIMP1是KDM1A的下游靶基因
        3.3 下调TIMP1 可以部分挽救干扰KDM1A后引起的细胞迁移和侵袭能力的改变
        3.4 KDM1A与 TIMP1 启动子区域结合
        3.5 KDM1A与 TIMP1 结合并使H3K4me2 去甲基化
    4 讨论
    5 结论
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]甲状腺癌病人生存现状分析[J]. 田文,郗洪庆.  中国实用外科杂志. 2016(05)
[2]LSD1及其在肿瘤发生中的调节作用[J]. 于妍妍,王斌,陈东风.  医学综述. 2012(17)
[3]组蛋白去甲基化酶LSD1的结构和功能研究进展[J]. 阮建彬,臧建业.  中国科学技术大学学报. 2008(08)



本文编号：3717224