DUB3去泛素化稳定NRF2引起肠癌细胞化疗耐药的机制研究

发布时间：2022-12-24 10:53

　　结直肠癌（CRC）已经成为世界上发病率和死亡率排名第三的恶性肿瘤,每年造成超过五十万例患者的死亡。许多研究人员试图揭示NRF2在结直肠癌中的复杂作用。转录因子NRF2在结直肠癌中起着双刃剑的作用。5-氟尿嘧啶（5-Fu）和喜树碱（CPT）是治疗结直肠癌最常用的化疗药物。不幸的是,多药耐药仍然是结直肠癌有效化疗的主要障碍之一。几项研究揭示了NRF2过度表达与结直肠癌患者对5-Fu耐药增加之间的关系。另有研究表明,乳腺癌对紫杉醇的耐药性也与NRF2的过度表达有关。在本研究中,我们主要研究了结直肠癌细胞对喜树碱和紫杉醇耐药性的分子机制。NRF2是调节细胞内稳态的重要转录因子。NRF2通过识别启动子中的抗氧化反应元件（AREs）来调节下游基因的转录。这些基因编码了参与各种病理生理过程的酶,形成了交叉互作的酶网络。在细胞稳态条件下,NRF2的蛋白水平和转录活性相对较低。目前研究发现,三个E3泛素连接酶复合物能够调控NRF2的泛素化和蛋白酶体降解。尽管NRF2的E3泛素连接酶及其泛素化过程已经得到了充分的研究,但是调节NRF2稳定性的去泛素化酶（DUBs）却仍然是未知的。因此,调节NRF2活性的D... 

【文章页数】：93 页

【学位级别】：博士

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论文创新点
中文摘要
Abstract
中英文缩略对照表
第一章 结直肠癌及NRF2的研究进展
    1.1 结直肠癌
        1.1.1 结直肠癌的发生发展
        1.1.2 结直肠癌的分子机制
        1.1.3 肠癌的治疗
    1.2 NRF2 的研究进展
        1.2.1 NRF2-ARE信号通路
        1.2.2 NRF2 的调控
        1.2.3 NRF2 与耐药
    1.3 泛素化与去泛素化系统
        1.3.1 泛素化系统
        1.3.2 去泛素化系统
    1.4 DUB3 的研究进展
        1.4.1 DUB3 的发现
        1.4.2 DUB3 的功能
        1.4.3 DUB3 与癌症
第二章 实验材料与试验方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 肠癌组织样品
        2.1.2 细胞系、质粒及病毒
        2.1.3 主要实验试剂及耗材
        2.1.4 主要仪器设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 质粒构建
        2.2.2 质粒提取
        2.2.3 细胞培养
        2.2.4 慢病毒包装
        2.2.5 稳转细胞系构建
        2.2.6 CRISPR/Cas9 敲除细胞系构建
        2.2.7 总RNA提取、反转录及定量
        2.2.8 双荧光素酶报告基因实验
        2.2.9 免疫印迹实验Western Blot
        2.2.10 半衰期实验
        2.2.11 免疫荧光实验IF
        2.2.12 免疫沉淀实验IP
        2.2.13 泛素化实验
        2.2.14 细胞活力实验
        2.2.15 细胞克隆形成实验
        2.2.16 数据统计分析
第三章 实验结果与讨论
    3.1 前言
    3.2 实验结果与分析
        3.2.1 DUB3 被鉴定为NRF2 最有可能的去泛素化酶
        3.2.2 NRF2和DUB3 在肠癌组织中表达上调
        3.2.3 DUB3 稳定NRF2 的蛋白水平
        3.2.4 DUB3 促进NRF2 的转录活性
        3.2.5 DUB3、NRF2和KEAP1 一起形成一个复合体
        3.2.6 DUB3 降低NRF2的K48 连接的泛素化
        3.2.7 DUB3 通过上调NRF2 引起化疗耐药
    3.3 讨论与展望
参考文献
博士期间发表及待发表论文
致谢



本文编号：3726067