糖基磷脂酰肌醇转移酶GPAA1促进胃癌增殖和侵袭转移的机制研究

发布时间：2023-01-26 06:59

　　胃癌是世界发病率排名第四的恶性肿瘤,并且死亡率排在恶性肿瘤的第二名。胃癌在东亚地区的发病率极高,2008年,全球共有一百万人罹患胃癌,其中74%的发病人口在东亚,47%在中国。尽管目前普遍认为胃癌的发生主要和幽门螺旋杆菌感染有关,但癌基因的扩增、抑癌基因的突变和缺失也是造成胃癌发生和进展的重要因素。其中,染色体扩增导致的癌基因扩增对胃癌的发生非常关键,也是治疗的重要靶点,如胃癌中ERBB2的扩增与不良预后显著相关,赫赛汀这样靶向ERBB2的单抗是治疗胃癌的有效手段。然而,目前人们对影响胃癌发生发展的基因并未完全了解,基于这些扩增基因开发的药物也非常有限,因此胃癌的治疗方式仍然是以手术和化疗为主,靶向药物除了ERBB2和VEGFR的抑制剂或单抗外,应用的数量极为有限。因此,探索影响胃癌发生发展的癌基因,对于寻找治疗胃癌的靶点和分子标志物,具有非常重要的意义。以往的研究发现,染色体的8q24区段是胃癌的扩增高发区段,其中就包括著名的癌基因c-MYC,促进肿瘤增殖、侵袭转移、血管形成等一系列恶性的生物学行为。通过对胃癌8q24区段基因的分析,我们发现糖基磷脂酰肌醇转移酶GPAA1在胃癌中扩增... 

【文章页数】：103 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 胃癌的流行病学
    1.2 胃癌的分类和治疗
    1.3 胃癌病因学
    1.4 胃癌的分子分型
    1.5 胃癌信号通路
    1.6 糖基磷脂酰肌醇转移酶 GPAA1
    1.7 糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白和肿瘤
第二章 GPAA1 在胃癌中的表达及临床意义
    2.1 前言
    2.2 材料和试剂
        2.2.1 组织标本
        2.2.2 587 例胃癌组织芯片
        2.2.3 免疫组织化学试剂
        2.2.4 蛋白免疫印迹(western blot)所需试剂和耗材
        2.2.5 蛋白免疫印迹常用试剂和缓冲液配制
        2.2.6 免疫组织化学常用试剂和缓冲液配制
        2.2.7 免疫组织化学和蛋白免疫印迹所需抗体
        2.2.8 实验主要仪器设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 数据挖掘和分析
        2.3.2 免疫组织化学染色步骤
        2.3.3 组织蛋白提取
        2.3.4 蛋白质免疫印迹实验
        2.3.5 统计学分析
    2.4 结果
        2.4.1 GPAA1 在多种恶性肿瘤中显著扩增
        2.4.2 数据库验证GPAA1 在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织
        2.4.3 组织样本验证GPAA1 在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织
        2.4.4 GPAA1 高表达与胃癌不良预后正相关
        2.4.5 GPAA1 表达与胃癌临床分期和病理分级正相关
        2.4.6 ERBB2 的表达与胃癌临床分期和病理分级的相关性
        2.4.7 GPAA1与ERBB2 在胃癌中的表达具有显著相关性
        2.4.8 GPAA1与ERBB2 和胃癌生存期
        2.4.9 GPAA1 在胃癌中的预后意义
    2.5 讨论
第三章 GPAA1 促进胃癌发展的功能研究
    3.1 前言
    3.2 材料和试剂
        3.2.1 材料
        3.2.2 试剂
        3.2.3 仪器
    3.3 方法
        3.3.1 数据挖掘与分析
        3.3.2 细胞培养
        3.3.3 稳定转染细胞株构建
        3.3.4 荧光定量PCR检测
        3.3.5 细胞免疫荧光
        3.3.6 克隆形成
        3.3.7 细胞增殖
        3.3.8 细胞周期
        3.3.9 细胞侵袭转移
        3.3.10 体内转移实验
    3.4 结果
        3.4.1 GPAA1 在胃癌细胞株的表达及稳转株构建
        3.4.2 GPAA1 对胃癌的功能预测
        3.4.3 GPAA1 促进胃癌细胞增殖能力
        3.4.4 GPAA1 促进胃癌细胞的克隆形成能力
        3.4.5 GPAA1 促进胃癌细胞周期G1-S期转换
        3.4.6 GPAA1 促进转移相关GPI锚定蛋白的表达
        3.4.7 GPAA1 促进胃癌细胞体外侵袭和运动
        3.4.8 GPAA1 促进胃癌的肝转移
    3.5 讨论
第四章 GPAA1 促进胃癌发展的机制研究
    4.1 前言
    4.2 材料和试剂
        4.2.1 试剂
        4.2.2 仪器
    4.3 方法
        4.3.1 组织切片制作
        4.3.2 免疫组织化学染色
        4.3.3 脂筏提取
        4.3.4 PLA DuoLink
        4.3.5 蛋白质免疫共沉淀
        4.3.6 小鼠荷瘤实验
        4.3.7 蛋白质免疫印迹试验
    4.4 结果
        4.4.1 GPAA1 促进细胞膜上脂筏的形成
        4.4.2 GPAA1 促进EGFR-ERBB2 相互作用
        4.4.3 GPAA1 促进EGFR-ERBB2 的共定位
        4.4.4 GPAA1 促进ERBB磷酸化下游信号通路激活
        4.4.5 GPAA1 促进胃癌细胞增殖依赖于EGFR-ERBB2 信号通路
        4.4.6 GPAA1 通过激活ERBB-AKT信号轴促进胃癌生长
    4.5 讨论
第五章 讨论和总结
致谢
科研成果
参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]Cancer statistics: updated cancer burden in China[J]. Wanqing Chen.  Chinese Journal of Cancer Research. 2015(01)
[2]Rho/ROCK signaling in motility and metastasis of gastric cancer[J]. Tasuku Matsuoka,Masakazu Yashiro.  World Journal of Gastroenterology. 2014(38)
[3]Gene-diet interactions in gastric cancer risk: A systematic review[J]. Jeongseon Kim,Young Ae Cho,Wook Jin Choi,Seung Hwa Jeong.  World Journal of Gastroenterology. 2014(28)
[4]Mutations in components of the Wnt signaling pathway in gastric cancer[J]. Kai-Feng Pan, Lian Zhang, Wei-Cheng You, Department of Cancer Epidemiology, Peking University School of Oncology and Beijing Cancer Hospital ＆ Institute, Beijing 100036, China Wan-Guo Liu, Division of Experimental Pathology, Department of Laboratory Medicine and Pathology, Mayo Clinic/Mayo Medical School, Rochester 55905, United States You-Yong Lu, Beijing Laboratory of Molecular Oncology, Peking University School of Oncology and Beijing Cancer Hospital ＆ Institute, Beijing 100036, China.  World Journal of Gastroenterology. 2008(10)



本文编号：3732291