低氧条件下YAP结合并稳定HIF-1α蛋白促进肝癌细胞糖酵解发生的机制研究

发布时间：2023-01-31 02:19

　　目的:肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是最常见的消化系统恶性肿瘤,在全球肿瘤相关死亡率中排第四位;在我国60岁以下的男性中排在肿瘤相关死亡率的首位。包括肝癌在内的绝大多数实体肿瘤中存在着缺氧微环境,缺氧是大多数实体瘤的特征之一,缺氧微环境的存在促进了肿瘤细胞的转移,增强了肿瘤细胞对放化疗的耐受,同时也改变了肿瘤细胞的基因表达水平。缺氧微环境下,肿瘤细胞通过上调多个基因促进多种糖酵解关键酶的表达,以增强细胞糖酵解过程,为肿瘤细胞适应低氧环境提供生存所必须的能量和物质。然而目前对于肝癌糖酵解调控分子机制的研究依然尚不明确,深入探索低氧微环境下肝癌细胞糖酵解调控的分子机制,将有助于研发新的肝癌治疗方案。Yes相关蛋白（Yes association protein,YAP）是重要的转录共激活因子,也是关键的核浆穿梭蛋白,在包括肝癌在内的多种恶性肿瘤中异常高表达,主要在细胞核中发挥转录调控作用。关于YAP在肿瘤能量代谢过程中的调控机制研究,已经成为肿瘤治疗领域的一个新的研究热点。细胞内增强的糖酵解状态能够通过上调糖酵解关键酶的表达促进YAP蛋白活性的表达,而Y... 

【文章页数】：83 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分: YAP在肝癌组织与癌旁组织中的表达及其与HIF-1α的相关性分析
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 研究对象
        2.2 主要试剂和仪器
            2.2.1 主要试剂
            2.2.2 主要仪器
        2.3 主要实验方法
            2.3.1 Western blotting实验
            2.3.2 Real-time PCR实验
            2.3.3 组织免疫荧光实验
            2.3.4 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提实验
            2.3.5 免疫组化
        2.4 统计分析
    3 结果
        3.1 YAP在肝癌组织中高表达且主要在肝癌细胞核中表达
        3.2 YAP与HIF-1α在肝癌组织中的表达水平呈显著正相关
    4 讨论
第二部分: 低氧条件下YAP通过结合并稳定HIF-1α蛋白上调PKM2表达的机制研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 实验材料
            2.1.1 细胞来源
            2.1.2 主要试剂
            2.1.3 主要仪器
        2.2 主要实验方法
            2.2.1 肝癌细胞系培养与转染
            2.2.2 Western bloting实验
            2.2.3 Real-time PCR实验
            2.2.4 细胞免疫荧光实验
            2.2.5 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提实验
            2.2.6 葡萄糖摄取检测实验
            2.2.7 乳酸检测实验
            2.2.8 细胞侵袭实验
            2.2.9 细胞迁移实验
            2.2.10 免疫共沉淀实验(Co-IP)
            2.2.11 染色质免疫共沉淀实验(ChIP)
            2.2.12 荧光素酶报告基因实验
        2.3 统计分析
    3 结果
        3.1 低氧激活YAP并促进YAP在肝癌细胞核内表达
        3.2 低氧激活YAP并不依赖HIF-1α
        3.3 低氧促进肝癌细胞糖酵解发生
        3.4 YAP介导了低氧对肝癌细胞糖酵解的促进作用
        3.5 YAP结合并稳定HIF-1α蛋白
        3.6 YAP-HIF-1α复合体促进PKM2的表达
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3733633