TRPS1抑制SOX2在乳腺癌细胞干性维持和肿瘤发生起始的转录调控机制研究

发布时间：2023-03-24 21:07

　　乳腺癌是女性最高发的癌症类型。GATA转录因子家族成员在发育和癌症中都起着重要作用。典型的GATA转录因子家族成员GATA1-6参与诱导胚胎干细胞的分化和调节肿瘤干细胞功能。转录抑制因子GATA结合蛋白1(TRPS1)是非典型的GATA转录因子家族成员,TRPS1能够抑制软骨细胞促分化过程,暗示TRPS1在肿瘤干细胞中发挥重要作用,然而TRPS1是如何调控肿瘤细胞干性维持和肿瘤发生起始过程还不清楚。肿瘤干细胞在癌症中广泛分布并在癌症发生发展过程中发挥重要作用。SOX转录因子家族成员SOX2是肿瘤干细胞干性维持和肿瘤发生的关键调控因子。SOX2在乳腺癌的发生、增殖、转移、复发等过程中均发生重要作用,然而SOX2基因表达被如何调控尚未被揭示。TRPS1是非典型的GATA转录因子家族成员,通常作为转录抑制因子调控靶基因的表达。本论文研究利用生物信息学分析,发现TRPS1为潜在的调控SOX2表达的因子,进一步通过染色质免疫共沉淀和荧光素酶报告实验等结果证实TRPS1能够直接结合在SOX2的启动子区域并且抑制启动子区域的转录活性。在体外细胞水平的实验中,通过体外反映细胞干性的经典实验模型微球体实...

【文章页数】：107 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
Abstract
英文缩略词表
绪论
第一章 文献综述
    1.1 乳腺癌的研究进展
        1.1.1 乳腺癌是一种高发的恶性肿瘤
        1.1.2 乳腺癌的分子分型
        1.1.3 乳腺癌的临床分期
        1.1.4 乳腺癌的诊疗现状和面临的挑战
    1.2 乳腺癌转录调控的研究进展
        1.2.1 转录因子在乳腺癌中发挥调控作用的研究进展
        1.2.2 非编码RNA在乳腺癌中发挥调控作用的研究进展
    1.3 GATA家族成员在乳腺癌中的研究进展
        1.3.1 GATA家族概述
        1.3.2 GATA家族经典成员的生物学功能
        1.3.3 GATA家族经典成员在乳腺癌中的研究进展
        1.3.4 非典型GATA家族成员TRPS1 的生物学功能
        1.3.5 TRPS1 在乳腺癌中的研究进展
    1.4 SOX2 的研究进展
        1.4.1 SOX基因家族概述
        1.4.2 SOX2 概述和生物学功能
        1.4.3 SOX2 在乳腺癌中的研究进展
    1.5 乳腺癌干细胞研究进展
        1.5.1 干细胞概述
        1.5.2 肿瘤干细胞概述
        1.5.3 乳腺癌干细胞概述
第二章 实验材料与方法
    2.1 材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 小干扰RNA
        2.1.3 质粒
    2.2 实验试剂
        2.2.1 细胞培养及转染相关试剂
        2.2.2 RNA提取、逆转录及实时荧光定量PCR相关试剂
        2.2.3 蛋白质免疫印迹相关试剂
        2.2.4 染色质免疫共沉淀相关试剂
        2.2.5 荧光素酶报告实验相关试剂盒
        2.2.6 微球体实验
        2.2.7 流式细胞分析和分选
        2.2.8 裸鼠成瘤实验
        2.2.9 生化、分子实验试剂
    2.3 常用溶液配方
    2.4 实验耗材和仪器
        2.4.1 实验耗材
        2.4.2 实验仪器
    2.5 实验方法
        2.5.1 细胞培养
            2.5.1.1 细胞复苏
            2.5.1.2 细胞传代
            2.5.1.3 细胞冻存
        2.5.2 siRNA转染乳腺癌细胞
        2.5.3 质粒转染乳腺癌细胞
        2.5.4 乳腺癌细胞总RNA的提取
        2.5.5 RNA逆转录为c DNA
        2.5.6 实时荧光定量PCR
        2.5.7 蛋白质免疫印迹
            2.5.7.1 肿瘤细胞内总蛋白的提取和制备
            2.5.7.2 蛋白样品定量
            2.5.7.3 SDS-PAGE凝胶电泳
            2.5.7.4 转膜与封闭
            2.5.7.5 抗体孵育与显色
        2.5.8 质粒的构建
            2.5.8.1 感受态细胞的制备
            2.5.8.2 目的片段的扩增
            2.5.8.3 目的片段与质粒载体的酶切反应
            2.5.8.4 目的片段与质粒载体的连接
            2.5.8.5 连接产物的转化
        2.5.9 定点突变质粒的构建
        2.5.10 慢病毒包装系统
        2.5.11 染色质免疫共沉淀
        2.5.12 荧光素酶报告实验
        2.5.13 微球体实验
        2.5.14 流式细胞分析和分选
        2.5.15 裸鼠成瘤实验
        2.5.16 临床样本分析
        2.5.17 统计分析
第三章 实验结果及讨论
    引言
    3.1 TRPS1 抑制SOX2 的表达
        3.1.1 从数据库中挖掘调控SOX2 的转录因子TRPS
        3.1.2 T47D和 MCF7中TRPS1 抑制SOX2 的表达
    3.2 TRPS1 锚定在SOX2 的启动子区域并发挥转录抑制作用
        3.2.1 TRPS1 直接结合在SOX2 的启动子区域
        3.2.2 TRPS1对SOX2 的启动子区域发挥转录抑制作用
        3.2.3 小结
    3.3 在体外TRPS1 通过抑制SOX2 的表达抑制肿瘤细胞干性
        3.3.1 TRPS1 通过SOX2 实现对乳腺癌细胞干性调控
        3.3.2 构建MCF7 稳转细胞系
        3.3.3 TRPS1 调控乳腺癌细胞的成球能力
        3.3.4 TRPS1 调控肿瘤细胞中CD44+/CD24-细胞群体
        3.3.5 乳腺癌患者样本中TRPS1和SOX2 表达情况
        3.3.6 小结
    3.4 在裸鼠体内TRPS1 通过抑制SOX2 的表达抑制肿瘤发生的起始过程
        3.4.1 TRPS1 对肿瘤发生阶段的影响
        3.4.2 TRPS1 对肿瘤生长阶段的影响
        3.4.3 小结
    3.5 讨论
结论与展望
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3769852