Pin1作为宫颈上皮内瘤变风险的评估指标及宫颈癌新型治疗靶点的研究

发布时间：2023-04-10 23:35

　　肽基-脯氨酰基顺反异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,Pin1)在多种肿瘤中异常激活,通过作用于其底物或相关信号通路促进肿瘤发生发展。宫颈上皮内瘤变(squamous intraepithelial lesions,SIL)属于癌前病变。低级别宫颈上皮内瘤变(Low-grade squamous intraepithelial lesions,LSIL)预后良好,但LSIL进展为高级别宫颈上皮内瘤变(High-grade squamous intraepithelial lesions,HSIL)极大增加宫颈癌患病风险,目前尚缺乏有效风险评估的指标。由于Pin1在肿瘤起始阶段的独特作用,在癌前病变阶段检测Pin1的表达作为发癌前病变阶段的风险分层指标具有重要意义。宫颈癌转移及化学敏感性降低是导致治疗失败的主要原因。Pin1一方面能够与下游底物c-Jun、AKT、cyclinD1、β-catenin和STAT3等结合,催化顺反异构变化,调控下游靶点。另一方面通过激活下游多种致癌基因和生长促进剂,在肿瘤发生发展中发挥重要促癌作用。靶向Pin1的治...

【文章页数】：120 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略词表
第1章 综述
    1.1 宫颈上皮内瘤变与宫颈癌
        1.1.1 HPV与宫颈癌
        1.1.2 LSIL可进展为宫颈癌
    1.2 Pin1在肿瘤中的作用
        1.2.1 Pin1蛋白结构及功能
        1.2.2 Pin1与肿瘤发生发展
            1.2.2.1 Pin1在癌症中的调节作用
            1.2.2.2 Pin1激活多种癌症途径
            1.2.2.3 Pin1和基因转录
            1.2.2.4 Pin1调节质膜上受体/非受体蛋白酪氨酸激酶，Notch和磷酸酶
            1.2.2.5 Pin1调节MAPK和AKT途径中的胞质蛋白激酶
            1.2.2.6 Pin1调控有丝分裂和细胞周期
            1.2.2.7 Pin1调节糖酵解
            1.2.2.8 Pin1在应激反应和细胞凋亡中的作用
            1.2.2.9 Pin1与病毒感染和转化
        1.2.3 Pin1与肿瘤耐药
            1.2.3.1 Pin1通过EMT促进耐药
            1.2.3.2 Pin1通过肿瘤干细胞促进耐药
            1.2.3.3 Pin1通过肿瘤微环境促进耐药
    1.3 Pin1抑制剂的研究进展
        1.3.1 早期发现的Pin1抑制剂
        1.3.2 基于Pin1催化机制的小分子抑制剂
        1.3.3 基于蛋白结构的Pin1抑制剂
        1.3.4 基于结构域的小分子抑制剂
            1.3.4.1 基于PPIases结构域的小分子抑制剂
            1.3.4.2 靶向WW结构域的小分子抑制剂
        1.3.5 顺反构象特异性抗体
第2章 材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 试剂配制
        2.1.4 细胞系
        2.1.5 实验动物
        2.1.6 人宫颈病变组织样本来源
    2.2 实验方法
        2.2.1 免疫组织化学染色
        2.2.2 细胞培养与细胞转染
            2.2.2.1 细胞培养
            2.2.2.2 细胞转染
        2.2.3 KPT-6566合成方法
        2.2.4 细胞活力实验（CCK8）
        2.2.5 细胞克隆形成实验
        2.2.6 Western blot 免疫印迹法检测蛋白表达实验
        2.2.7 流式细胞术检测细胞凋亡实验
        2.2.8 TUNEL染色实验
        2.2.9 细胞划痕实验
        2.2.10 Transwell细胞侵袭实验
        2.2.11 动物实验
        2.2.12 统计学分析
第3章 实验结果
    3.1 Pin1和c-Jun在宫颈SIL与宫颈癌组织中的表达及临床意义
        3.1.1 宫颈SIL组织中Pin1和c-Jun的表达及临床意义
            3.1.1.1 Pin1和c-Jun与LSIL进展率的关系
            3.1.1.2 Pin1和c-Jun在SIL中表达的相关性分析
        3.1.2 Pin1和c-Jun在宫颈癌组织中的表达及临床意义
            3.1.2.1 Pin1和c-Jun在宫颈癌组织中表达与临床信息的相关性分析
            3.1.2.2 Pin1和c-Jun在宫颈癌组织中的蛋白表达水平
    3.2 沉默Pin1体系的建立及鉴定
        3.2.1 在Hela和Siha细胞系中沉默Pin1并获得稳定细胞株
        3.2.2 合成新型Pin1抑制剂KPT-6566并鉴定
            3.2.2.1 Pin1特异性抑制剂KPT-6566的化学合成
            3.2.2.2 KPT-6566抑制Pin1及相关蛋白表达的鉴定
    3.3 Pin1作为宫颈癌治疗靶点的研究
        3.3.1 抑制Pin1显著降低宫颈癌细胞增殖能力
            3.3.1.1 抑制Pin1对宫颈癌细胞活力的影响
            3.3.1.2 抑制Pin1对宫颈癌细胞克隆形成的影响
        3.3.2 抑制Pin1显著降低宫颈癌细胞转移能力
            3.3.2.1 抑制Pin1对宫颈癌细胞迁移能力的影响
            3.3.2.2 抑制Pin1对宫颈癌细胞侵袭能力的影响
            3.3.2.3 体内实验检测Pin1对宫颈癌转移的影响
        3.3.3 Pin1通过c-Jun/Slug对宫颈癌细胞EMT的影响
            3.3.3.1 抑制Pin1对宫颈癌细胞EMT相关蛋白表达的影响
            3.3.3.2 Pin1调控宫颈癌细胞EMT的机制
    3.4 KPT-6566增强顺铂对宫颈癌细胞杀伤效果的研究
        3.4.1 KPT-6566可显著增强顺铂对宫颈癌细胞的杀伤效果
            3.4.1.1 KPT-6566和顺铂对宫颈癌细胞超微结构的影响
            3.4.1.2 KPT-6566和顺铂对宫颈癌细胞凋亡的影响
        3.4.2 KPT-6566增强裸鼠异种移植瘤模型中顺铂的抗肿瘤作用
            3.4.2.1 KPT-6566和顺铂对宫颈癌细胞体内成瘤能力的影响
            3.4.2.2 KPT-6566和顺铂对移植瘤组织Pin1表达水平的影响
            3.4.2.3 KPT-6566和顺铂对移植瘤组织凋亡的影响
            3.4.2.4 KPT-6566联合顺铂治疗对小鼠主要脏器的影响
第4章 讨论
    4.1 序言
    4.2 Pin1在LSIL中的临床意义
    4.3 SIL与宫颈癌发病的探讨
    4.4 Pin1作为宫颈癌新型治疗靶点的理论依据
    4.5 KPT-6566与顺铂联合应用治疗宫颈癌的前景
    4.6 KPT-6566用于联合用药治疗的优势
第5章 结论
参考文献
个人简介及作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢



本文编号：3788934