当前位置:主页 > 硕博论文 > 医学博士论文 >

加减补肺汤对博来霉素诱导小鼠肺纤维化干预作用的实验研究

发布时间:2017-05-19 20:21

  本文关键词:加减补肺汤对博来霉素诱导小鼠肺纤维化干预作用的实验研究,,由笔耕文化传播整理发布。


【摘要】:研究目的肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)发病率呈不断上升趋势,目前约为16.3/10万,且3年内急性恶化发生率为20.7%。PF的主要病理特点是初期广泛性肺泡炎形成,后期大量成纤维细胞增生,以及基质胶原进行性积聚,最后取代正常的肺组织结构。发病机制尚不清,病死率高,目前缺乏有效药物。本课题前期研究结果表明,加减补肺汤有抗氧化作用拮抗纤维的形成。但是加减补肺汤拮抗肺纤维化的具体分子机制目前尚不十分清楚。为阐明加减补肺汤对肺纤维化的作用及其可能的作用机制,本研究拟通过博来霉素诱导肺纤维化小鼠为模型,观察加减补肺汤对小鼠肺纤维化模型的病理形态学改变,检测加减补肺汤对小鼠肺组织中TGF-β1、TNF-α、CatD、LC3和mTOR表达的影响,研究加减补肺汤对肺纤维化小鼠的作用,初步探讨其抑制肺纤维化的机制。研究方法及结果1采用不同剂量的博莱霉素复制小鼠肺纤维化模型,探讨复制小鼠肺纤维化模型的理想剂量。(1)方法:昆明种小鼠90只,随机分为空白组、假手术组、模型高(7.5mg/kg)、模型中(5mg/kg)和模型低(2.5mg/kg)剂量组,每组18只。模型组气管内单次注入博来霉素生理盐水溶液,假手术组气管内单次注入等体积生理盐水。各组动物分别于第3天、7天、14天处死,取肺组织进行HE染色,观察肺组织病理改变及死亡率。(2)结果1)博来霉素诱导小鼠肺纤维化模型复制成功。2)博来霉素注入剂量与肺纤维化程度及死亡率呈正相关。3)小鼠肺纤维化模型的建立:采用经气管内一次性给药方法,用博莱霉素5mg/kg是较为理想的复制小鼠肺纤维化模型剂量。2加减补肺汤对博来霉素诱导小鼠肺纤维化形态结构的影响,探讨加减补肺汤抗小鼠肺纤维化的药效。(1)方法:昆明小鼠306只,随机分为假手术组、模型组、加减补肺汤高剂量组、加减补肺汤中剂量组、加减补肺汤低剂量组、醋酸泼尼松组和加减补肺汤中剂量+醋酸泼尼松组,假手术组36只,其余每组均为45只。除假手术组,其余各治疗组及模型组气管内均单次注入博来霉素生理盐水溶液(5mg/kg)复制小鼠肺纤维化模型,假手术组气管内单次注射等体积的生理盐水。各治疗组于造模后第二天开始给予相应的药物干预,加减补肺汤高、中、低剂量组分别按12g/kg/d、6g/kg/d、3g/kg/d剂量给药,醋酸泼尼松组按0.5mg/kg/d剂量给药,加减补肺汤中剂量+醋酸泼尼松组:上午给加减补肺汤按6g/kg/d剂量给药,下午醋酸泼尼松按0.5mg/kg/d剂量给药;模型组和假手术组分别给予等量的生理盐水灌胃。各组动物于第7天、14天、28天随机取10只处死,取肺组织进行he染色,观察肺组织病理改变,对图片进行定量分析。(2)结果:he染色显示,假手术组:肺泡结构完整、清晰,未见炎症细胞浸润和肺实质病变;模型组:肺泡间隔增宽变形,肺泡结构紊乱,早期肺泡腔内重度炎性细胞浸润,晚期成纤维细胞大量增生,纤维组织呈条索样改变,纤维化程度随时间的进展而加深加重;加减补肺汤高、中、低剂量组、醋酸泼尼松组和加减补肺汤中剂量+醋酸泼尼松组:肺泡结构较为清晰,在支气管周围有局部纤维化,肺泡间隔增厚,较模型组有所减轻。3加减补肺汤干预小鼠肺纤维化作用机制研究(1)方法:171只昆明小鼠,随机分为假手术组、模型组、加减补肺汤组和醋酸泼尼松组,假手术组36,其余各组均为45只。模型组、加减补肺汤组和醋酸泼尼松组,气管内注射博来霉素(5mg/kg)诱导肺纤维化;假手术组在相同条件下给予生理盐水。造模后第二天开始给药,加减补肺汤组按12g/kg/d剂量给药,醋酸泼尼松组按0.5mg/kg/d剂量给药;模型组和假手术组分别给等体剂生理盐水灌胃。各组动物于第7、14、28天随机取10只处死,取肺组织he染色,观察肺组织病理改变。用免疫组化和westernblot方法,对于各组小鼠肺组织中tgf-β1、tnf-α、catd、lc3和mtor表达量进行观察,并用图像分析软件分析各组的平均光密度。(2)结果:1)tnf-α和tgf-β1免疫组化结果表明,tnf-α和tgf-β1在假手术组表达较弱;在模型组表达随时间延长逐渐增强,与假手术组比较有显著差异(p0.01);加减补肺汤及醋酸泼尼松组在各时间点表达趋势与模型组相同,但与模型组比较均有显著差异(p0.01或p0.05);到第28d时,加减补肺汤组优于强的松组,但两组无明显差异(p0.05)。第14d各组小鼠肺组织中tgf-β1和tnf-α的westernblot实验结果与免疫组化结果相一致。2)catd免疫组化结果表明,假手术组在支气管上皮细胞有少量catd表达;博来霉素诱导肺纤维化小鼠catd表达明显增多,在肺间质和支气管上皮细胞中都有表达,并且随时间延长有增多的趋势,第7天、14天和28天时与假手术组比较都有明显差异(p0.01);强的松、加减补肺汤组:catd表达趋势与模型组相同,但表达较模型组明显减少,与模型组比较均有显著差异(p0.01或p0.05)。3)通过对肺组织中lc3表达情况的分析,我们发现lc3存在于正常肺组织的支气管及血管周围,且蛋白表达较弱,说明在正常组织细胞内自噬功能较低;而在肺纤维化肺组织中,lc3除了见于支气管及血管周围以外,尚可见lc3在细胞浆中有阳性表达,与假手术组比较,博莱霉素处理后各时间点小鼠肺组织中lc3的表达均显著升高(p0.01);加减补肺汤组lc3表达较模型组明显降低,说明加减补肺汤能减少肺纤维化小鼠肺组织中lc3的过度表达。4)mtor免疫组化结果表明,假手术组:mtor蛋白表达在支气管、血管周围,胞浆中有少许阳性表达。模型组:mtor表达明显增多,胞浆中也有阳性表达。第7天、14天和28天时与假手术组比较都有显著性差异(p0.01),提示模型组随着肺纤维化程度加重mtor被激活。加减补肺汤组:表达趋势与模型组相同,但表达较模型组明显减少(p0.05),提示加减补肺汤能使肺纤维化小鼠肺组织中mTOR活性下降结论1用5mg/kg博莱霉素是较为理想的复制小鼠肺纤维化模型剂量。2加减补肺汤能改善肺纤维化小鼠炎性细胞浸润,明显减轻肺纤维化程度,从而干预肺纤维化的形成。3加减补肺汤干预小鼠肺纤维化作用机制研究(1)加减补肺汤能抑制博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化肺组织TNF-α、TGF-β1蛋白的表达,明显减轻肺纤维化模型小鼠肺泡炎的发展及肺纤维化的形成。(2)加减补肺汤能减轻博莱霉素诱发的小鼠肺纤维化,其作用机制可能与抑制Cathepsin D的过度表达有关。(3)加减补肺汤能减少肺纤维化小鼠肺组织中LC3、mTOR的过度表达,干预肺纤维化的形成。
【关键词】:肺纤维化 加减补肺汤 TGF-β1 TNF-α Cat D LC3 mTOR
【学位授予单位】:湖北中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R285.5
【目录】:
  • 中文摘要5-9
  • ABSTRACT9-16
  • 英文缩略词表16-17
  • 前言17-19
  • 第一部分 中医文献与理论研究19-24
  • 1.中医对肺纤维化的理论认识19-21
  • 2.中医药治疗肺纤维化的临床报道21-22
  • 3.中医药治疗肺纤维化的实验研究22-23
  • 4 讨论23-24
  • 第二部分 实验研究24-125
  • 实验一 博来霉素诱导肺纤维化小鼠动物模型的建立24-40
  • 1. 前言24-25
  • 2 材料与方法25-28
  • 3.结果28-36
  • 4.讨论36-38
  • 5.结论38-40
  • 实验二 加减补肺汤对肺纤维化小鼠肺组织病理形态学的研究40-64
  • 1.前言40-41
  • 2.材料与方法41-46
  • 3.结果46-60
  • 4.讨论60-63
  • 5.结论63-64
  • 实验三 加减补肺汤对肺纤维化小鼠肺组织TGF-β1、TNF-α表达的影响64-95
  • 1.前言64-65
  • 2.材料与方法65-77
  • 3.结果77-90
  • 4.讨论90-93
  • 5.结论93-95
  • 实验四 加减补肺汤对肺纤维化小鼠肺组织cathepsin D的影响95-109
  • 1.前言95-96
  • 2.材料与方法96-99
  • 3.结果99-107
  • 4.讨论107-108
  • 5.结论108-109
  • 实验五 加减补肺汤对肺纤维化小鼠自噬/溶酶体途径中相关蛋白表达的研究109-125
  • 1.前言109-110
  • 2.材料与方法110-114
  • 3.结果114-121
  • 4.讨论121-124
  • 5.结论124-125
  • 结语125-127
  • 创新点127-128
  • 参考文献128-150
  • 附录一 综述150-158
  • 参考文献154-158
  • 附录二 读博期间发表文章158-159
  • 致谢159

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 吴之煌;张晓霞;;补肺活血汤治疗特发性肺纤维化临床观察[J];北京中医药;2010年02期

2 李惠萍;特发性肺间质纤维化的研究进展[J];国外医学.呼吸系统分册;2001年01期

3 贺雄;曹文富;赵苹利;李艳;黄欣;;益气化瘀化痰法对肺纤维化大鼠TGF-β_1、PAI-1的影响[J];重庆医学;2012年19期

4 曹姝;李少林;兰曦;王勇;邹冬玲;臧春宝;王颖;;霉酚酸酯对小鼠肺纤维化的治疗作用[J];第三军医大学学报;2012年24期

5 杨长福;杨冰瑶;欧江琴;林昶;张晓蓉;王和生;王世姣;;加减补肺汤对IPF大鼠SOD mRNA表达的影响[J];贵阳中医学院学报;2013年06期

6 周冬;焦洁;许东;徐志勇;秦卫东;姚武;;PDGF-AA和PDGF-BB在大鼠矽肺组织中的表达及意义[J];医药论坛杂志;2008年07期

7 杨明会;张利军;冯林春;窦永起;刘毅;戴相昆;;小剂量多次照射大鼠放射性肺损伤模型的评价[J];军医进修学院学报;2006年06期

8 班健;;特发性肺纤维化的治疗进展[J];临床肺科杂志;2011年09期

9 宫金艳;;丹参对大鼠肺纤维化的影响研究[J];湖南中医杂志;2013年02期

10 曹振东;周贤梅;;特发性肺纤维化相关细胞因子与中医药治疗研究进展[J];临床肺科杂志;2013年04期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 米粟;白介素17A抑制自噬活性促进组织纤维化发生发展[D];北京协和医学院;2012年


  本文关键词:加减补肺汤对博来霉素诱导小鼠肺纤维化干预作用的实验研究,由笔耕文化传播整理发布。



本文编号:379764

资料下载
论文发表

本文链接:https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/379764.html


Copyright(c)文论论文网All Rights Reserved | 网站地图 |

版权申明:资料由用户ba060***提供,本站仅收录摘要或目录,作者需要删除请E-mail邮箱bigeng88@qq.com